重组pcDNA3.1-hBMP-2转染兔脂肪干细胞体外诱导的成骨分化

背景:骨形态发生蛋白2具有很强的诱导干细胞成骨活性。目的:构建人骨形态发生蛋白2基因真核表达载体,探讨其转染脂肪干细胞后的成骨效果。方法:通过噬菌斑原位杂交筛选人混合细胞cDNA文库获得人骨形态发生蛋白2基因,与真核表达载体pcDNA3.1-连接,构建重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2。利用脂质体LipofectamineTM2000分别介导人骨形态发生蛋白2基因、EGFP基因转染第4代脂肪干细胞,并经G418进行筛选。结果与结论:酶切鉴定及DNA测序结果证实重组质粒pcDNA3.1-hBMP-2构建成功。经计算脂质体介导的脂肪干细胞瞬时转染率为(18.0±0.42)%,并经过G418筛选后获得了稳定转染的细胞。细胞生长曲线表明转染后对脂肪干细胞生长、增殖无明显影响。ELISA检测发现人骨形态发生蛋白2组的人骨形态发生蛋白2因子表达量均高于EGFP组及未转染组,且能够稳定表达。经人骨形态发生蛋白2基因转染的脂肪干细胞的Ⅰ型胶原含量、碱性磷酸酶活性以及钙结节数目均比EGFP组及未转染组有明显升高。     

卷帘门术式治疗椎管内肿瘤的探讨

目的:分析探讨卷帘门术式治疗椎管内肿瘤的方法与疗效.方法:2005年8月至2008年6月共收治椎管内肿瘤16例,男6例,女10例;年龄17～86岁,手术前经过CT、MRI等诊断为椎管内占住病变,其中硬膜外7例,髓外硬膜内肿瘤9例,无髓内肿瘤;胸段肿瘤10例,腰段6例.其中有神经脊髓压迫症状的8例,所有患者均采用卷帘门手术方式切开摘除肿瘤,关帘门时采用1号可吸收缝线进行固定,8例进行了同种异体骨植骨术.结果:16例均获随访,随访时间8个月至3年不等(平均19.6个月),8例有脊髓神经压迫症状患者中1例肿瘤压迫症状手术后1 d消失,4例出院时基本恢复,2例在随访期内基本恢复,1例在随访期限内仍然有不全瘫,与手术前比较变化不大,所有病例无手术后腰部疼痛及腰椎不稳等并发症出现,椎板愈合率100%,未见加重脊髓神经压迫病例.优良率为93.75%.结论:卷帘门手术治疗椎管内肿瘤,手术过程中暴露充分,摘除肿瘤方便,手术时间短,手术后可以保持椎管和椎体的完整性以及脊柱的稳定性,减少手术后腰椎不稳及加速退变等并发症,为一种摘除椎管内肿瘤较好的手术方法.     

免软骨基质支架与脂肪干细胞的生物相容性

背景:软骨基质主要为II型胶原和葡萄糖胺聚糖,它是软骨细胞分化和发育的先天环境,能促进干细胞向软骨细胞分化.目的:观察兔软骨基质支架与同种异体脂肪干细胞在体外的生物相容性.设计、时间及地点:观察实验.于2007-12/2008-05在遵义医学院珠海校区中心实验室完成.材料:取兔新鲜耳郭软骨组织在蛋白酶抑制剂苯甲基磺酰氟的保护下利用低渗透压和Triton X-100脱去细胞成分制备软骨基质.脂肪干细胞由新西兰大白兔颈部脂肪组织经剪碎、I型胶原酶消化并离心后获得.方法:将2×107L-1的脂肪干细胞悬液0.2mL滴在软骨基质支架表面,置于37℃、体积分数为0.05CO2饱和湿度的培养箱中静置4 h后加入含体积分数为0.1胎牛血清的DMEM培养液培养.主要观察指标:采用倒置相差显微镜、扫描电镜观察细胞在支架上的黏附、生长及增殖情况,同时计算细胞黏附率,并采用二甲氧唑黄比色法榆测细胞增殖趋势.结果:扫描电镜和倒置显微镜观察到脂肪干细胞在软骨基质支架上黏附和变形,其黏附率为93.7%;苏木精～伊红染色见细胞向支架深层生长:二甲氧唑黄比色法测定细胞生长曲线表明细胞在支架上有增殖的趋势.结论:兔软骨脱细胞基质与同种异体脂肪干细胞在体外具有良好的生物相容性.     

转化生长因子β在软骨组织工程中的研究进展

转化生长因子β能诱导种子细胞向软骨分化,是目前基因强化软骨组织工程首选的生长因子.软骨组织工程种子细胞主要有:骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、胎盘间充质干细胞、软骨细胞.TGF-β诱导种子细胞的方式主要有两种:一种是外源性诱导,另一种是内源性诱导.通过基因转染技术和组织工程技术相结合的内源性诱导方法解决了外源性诱导的很多缺点,是目前软骨组织工程研究的热点.本文对相关研究进行了综述.