我国省级疾病预防控制系统实验室主要腹泻病原菌检测能力调查分析

目的 了解我国省级疾病预防控制系统实验室针对主要腹泻病原菌的检测条件和能力,为促进以实验室为基础的腹泻病监测工作提出建议。 方法 以调查表的形式调查了27个省级疾病预防控制中心(CDC)实验室在细菌分离鉴定、血清分型及耐药性监测方面的实验条件、分子生物学技术能力以及实验储备情况和需求。 结果 27个省级CDC实验室完成了本次调查,针对主要腹泻病原,具备了基本实验室分离培养、生化鉴定、血清分型的能力;分离菌株耐药性检测仍以集中时段的实验为主;一些分子生物学检测和分子分型方法部分实验室仍未建立付诸应用;实验室人员不足。 结论 目前我国省级CDC系统实验室能够完成常见致病菌基本的培养鉴定,但在腹泻病原菌检测方面的能力尚显不足,表现在实验室专业技术人员不足,培训缺乏。需要在基于分子生物学的快速检测、分子分型技术方面加强力量,并促进腹泻病原监测的实验室网络化发展。     

沙门菌脉冲场凝胶电泳分型与血清型的对应关系

目的分析沙门菌脉冲场凝胶电泳分型(PFGE)与血清分型之间的对应关系.方法选择中国细菌性传染病分子分型实验室监测网络PulseNet China沙门菌监测数据中鼠伤寒(Typhimurium)、肠炎(Enteritidis)、德尔卑(Derby)、阿贡纳(Agona)及山夫登堡(Senftenberg)前五位常见血清型菌株共1230株,进行PFGE聚类分析,以血清分型作为参照进行比对.确定这5种血清型PFGE优势带型的共有条带.结果1230株菌株中,1149株经PFGE预测的血清型与实际血清型一致,PFGE预测血清型的准确率为93.4%.5种血清型经PFGE预测的血清型阳性预测值多在90.0%以上、阴性预测值均在95.0%以上.结论PFGE聚类对5种常见血清型沙门菌血清分型具有较好的提示及验证作用.     

Supreme喉罩在颅内动脉瘤栓塞术中的应用

2011-01—2013-01我们对20例患者应用Supreme喉罩,在全麻下行颅内动脉瘤栓塞术,并与20例气管插管麻醉下施术的同类患者进行比较,报告如下。1资料与方法1.1一般资料择期行颅内动脉瘤栓塞术患者40例,ASAⅠ～Ⅱ级,男26例,女14例;年龄28～65岁,体质量42～70kg。     

CTXΦ在霍乱弧菌两个染色体上的整合分析

目的 研究CTXΦ是否可以在没有TIE（toxin-linked cryptic）因子的非产毒霍乱弧菌染色体上整合，以及是否可以在霍乱弧菌小染色体上整合。方法 筛选染色体上没有整合CTXΦ及TIE基因组的霍乱菌株（CTX^- TLC^-），检测这类菌株染色体上是否有类似的CTXΦ染色体整合位点attB。以含有CTXΦ的RS区及整合位点的自杀质粒pKRSn与pKRSe结合转移到CTX^-TLC^-及CTX^- TLC^＋菌株，观察染色体整合情况，并分析整合位置的序列。结果 CTX^-TLC^-菌株存在与CTXΦ染色体整合位点相似的序列。在CTX^-TLC^-菌株当中，CTXΦ基因组存在于小染色体上：自杀质粒pKRSn与pKRSe可以在TLC^＋及TLC^-菌株的大染色体发生整合，也可以在TLC^-菌株的小染色体发生整合。结论 CTXΦ可以在霍乱弧菌的两条染色体上通过高度相似或一致的attB位点发生整合，另外也提示TIE在CTXΦ的大染色体整合中可能发挥作用。     

利用实时荧光定量-聚合酶链反应方法检测粪便标本中的伤寒沙门菌

目的 建立针对粪便标本中伤寒沙门菌的检测方法,评价该方法的特异性、敏感性及检测下限,以提高感染人群粪便标本中伤寒沙门菌的检出率。 方法 根据伤寒沙门菌特异基因STY1633设计特异性引物,优化反应条件,建立实时荧光定量-聚合酶链反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qPCR)反应体系。利用92株常见的非伤寒病原菌及44株伤寒沙门菌的染色体DNA评价该方法的特异性和灵敏性,并对伤寒沙门菌的粪便模拟标本进行检测下限评价,同时利用10份伤寒患者粪便标本及48份其他病原所致发热和/或伴腹泻的患者粪便标本进行特异性、敏感性验证。 结果 利用本方法检测的伤寒沙门菌纯菌及伤寒患者标本均扩增阳性,其余的非伤寒沙门菌、致腹泻的其他5种肠道致病菌及引起发热症状的8种常见非肠道病原菌纯菌及相应患者标本均扩增阴性。在对纯伤寒沙门菌DNA检测中,qPCR法的最低检测限为500 fg/反应,相当于97个拷贝/反应。以粪便模拟样品提取DNA为模板的检测中,增菌前检测下限达104 cfu/g,增菌后可达50 cfu/g。 结论 基于STY1633基因的实时荧光定量PCR方法在检测粪便中的伤寒沙门菌中具有很好的特异性、灵敏度,为伤寒沙门菌的快速诊断及某些不明原因发热及腹泻症状的病原初步鉴定提供了新的简便型手段,对于伤寒的早期诊断及预防控制提供了技术支持。     

肠炎沙门菌可变数目串联重复序列位点用于多位点可变数目串联重复序列分型分析的评价

目的 评价不同肠炎沙门菌可变数目串联重复序列(VNTR)位点用于多位点可变数目串联重复序列(MLVA)分型的可行性.方法 选取已报道使用的肠炎沙门菌11个VNTR位点,对中国不同时间和地区分离的16株菌进行初步评价,选取具有单一扩增条带的位点进行104株肠炎沙门茵的MLVA分型分析.对这些菌株同时进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析,比较MLVA分型方法与PFGE分型方法对菌株分型能力的强弱.结果 初筛得到7个VNTR位点用于扩大菌株的分析,这些位点将104株菌分为16个MLVA型别,D值为0.7222,这些菌株同时被分为22个PFGE型别,D值为0.7974.对两种方法各自所分的最大组包含的菌株进行比较,发现PFGE具有更强的分辨能力;从频数分布看,PFGE方法分型结果比较分散,MLVA分型较为集中.结论 用于国际肠炎沙门菌分型具有扩增多态性的VNTR位点在国内分离株中并不都具有多态性结果,在MLVA方法学建立中应选择更多的VNTR位点进行广泛的筛选才有利于国际实验室间的方法的统一.     

TaqMan-rRT-PCR检测猪霍乱沙门菌方法的建立和实验室评价

目的 基于猪霍乱沙门菌血清型特异性基因,建立TaqMan逆转录实时聚合酶链反应(TaqMamrRT-PCR)检测猪霍乱沙门菌的方法.方法 利用基因组序列比对筛选到猪霍乱沙门菌特有的基因SC0358,通过普通PCR及利用多种血清型沙门菌及非沙门菌菌株共计145株,评价该方法的菌株特异性,针对该基因设计TaqMan-rRT...     

1995-2004年全国伤寒副伤寒的流行分析

目的分析1995-2004年全国伤寒副伤寒流行特征和趋势,为制定防治措施提供依据。方法利用近10年的全国伤寒副伤寒疫情资料,用SPSS10.0软件,并根据开展的疾病控制工作,分析了近10年伤寒副伤寒在我国的发病情况。结果全国报告例数、发病率和病死率在逐年下降,地区分布上仍表现为相对集中趋势,发病季节性、发病人群构成比无明显变化。甲型副伤寒在我国已流行并在继续扩展,在一些地区超过伤寒的流行,但当前存在诊断欠明确、报告病例数不确切的问题。结论伤寒疫情仍然严峻,副伤寒发病呈流行上升趋势,对此需要进一步调查分析;还需要改进伤寒副伤寒的检测方法、明确伤寒副伤寒发病构成、监测疫情发展、分析流行因素,并在高发区开展综合的控制措施。     

2010 — 2011年云南省元江县一起甲型副伤寒暴发调查与处置

2010年4月 — 2011年8月云南省元江县发生一起甲型副伤寒暴发疫情,587例确诊甲型副伤寒。有关部门进行了病例环境调查、分布特征分析、接触者管理、疫区处置和疫情报告;同时开展了病例与环境标本病原学检测,利用病原菌分子分型与基因组学技术,追溯疫情来源。结果显示,疫情起源与输入病例有关联,病原菌随污水排入蔬菜田、污染蔬菜、病例生吃污染蔬菜而感染;形成病例 – 污水 – 蔬菜 – 人群传播循环。采取环境污染控制、病例诊断治疗、密切接触者监测、人群健康教育防治策略措施后,历时17个月疫情得到完全控制。提示,病原菌分子分型、基因组学技术在流行病学调查、病原菌识别信息的传染源溯源和疫情精准控制中具有十分重要的作用。     

聚合酶链反应扩增STY3671基因鉴别伤寒与甲型副伤寒沙门菌

目的 评价伤寒沙门菌基因STY3671用于特异性检测该血清型沙门菌的可能性。 方法 根据伤寒沙门菌与甲型副伤寒沙门菌外膜蛋白质组比较得到的伤寒沙门菌特异性蛋白点编码基因STY3671的序列设计引物,提取伤寒沙门菌、甲型副伤寒沙门菌以及其他非伤寒沙门菌血清型菌株的基因组DNA进行PCR检测, 对引物特异性和灵敏性进行分析。 结果 检测的184株伤寒沙门菌均得到807 bp长度片段,部分菌株扩增产物测序结果与伤寒沙门菌标准株CT-18一致。146株甲型副伤寒沙门菌以及其余163株其他血清型沙门菌均未扩增出该片段。 结论 STY3671基因能够作为特异性检测伤寒沙门菌的靶标,能够区别于甲型副伤寒沙门菌及其他常见非伤寒沙门菌血清型,在发热患者的伤寒沙门菌感染诊断、尤其使用血液标本检测中具有良好的潜在价值。