SLPI基因真核表达质粒的构建和鉴定

目的构建并鉴定含分泌型白细胞蛋白酶抑制蛋白(SLPI)基因的重组真核表达质粒。方法以HeLa细胞的总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增出SLPI基因cDNA,将产物克隆进真核载体pcDNA3.1(+)内,构建含SLPI基因的重组真核表达质粒。将pcDNA-SLPI重组质粒和空载体pcDNA分别转染HeLa细胞,Western blot检测SLPI蛋白表达。结果核酸序列分析及双酶切鉴定SLPI已成功插入pcDNA3.1(+)载体中,转染pcDNA-SLPI的HeLa细胞中检测到高表达的SLPI蛋白。结论成功构建了含SLPI基因的重组真核表达质粒。     

ORMDL3基因第一内含子中新启动子区的鉴定

目的构建表达血清类黏蛋白1样蛋白3(ORMDL3)基因第一内含子中新启动子区的质粒,并研究其功能特征。方法以人基因组DNA为模板,PCR扩增ORMDL3基因第一内含子内新转录起始位点上下游776bp启动子区片段,酶切并连接此片段至pGL3-basic载体,构建含有ORMDL3基因第一内含子中新启动子区的基因重组体,并转染人胚肾293细胞。荧光素酶检测报告基因启动子的活性,计算相对活性单位。生物信息学方法分析转录因子结合位点。结果成功构建含有新启动子的重组质粒。与pGL3-basic空载体相比,新启动子活性明显增强,并定位于转录起始位点-363bp至-63bp之间,且该区域存在Sp1、GATA-1等转录因子的结合位点。结论 ORMDL3基因第一内含子中新转录起始位点上游具有启动子活性,在-363bp至-63bp区域存在转录调控元件,且Sp1、GATA-1等转录因子可能参与其转录调控。     

miR-21在早产儿呼吸窘迫综合症患儿血清中表达水平的研究

目的 探讨早产儿呼吸窘迫综合症(respiratory distress syndrome, RDS)患儿外周血血清中miR-21的表达水平及其临床意义。方法 选取2015年6月至2015年12月入住南京医科大学第一附属医院新生儿监护病房的RDS患儿30例;对照组为非RDS早产儿,共21例,使用逆转录PCR法检测外周血血清中miR-21的表达水平,并分析各组病例临床特点。结果 RDS患儿血清中miR-21表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义（P<0.05）。中重度RDS组miR-21表达水平有明显增加趋势,但目前尚未发现统计学差异。RDS患儿中使用肺表面活性物质（pulmonary surfactant,PS）组miR-21表达水平明显增加(P<0.05)。结论 血清中miR-21表达水平与RDS密切相关,提示miR-21在RDS发病机制中起一定作用。     

川芎嗪对哮喘大鼠Th1/Th2型细胞因子水平的影响

目的　探讨川芎嗪对哮喘大鼠Th1/Th2细胞亚群反应的影响及防治哮喘的作用机制。方法　 5 0只SD大鼠哮喘模型 ,分为正常对照组 (A) ,哮喘模型组 (B) ,激素对照组 (C) ,川芎嗪组(D) ,联合用药组 (E) ,用酶联免疫吸附试验 (ELISA)检测支气管肺泡灌洗液 (BALF)中白介素 4 (IL 4 )、γ干扰素 (IFN γ)水平及白介素 4 /γ 干扰素的比值 (IL 4 /IFN γ)的变化。结果　与正常组比较 ,哮喘模型组BALF中IL 4水平、IL 4 /IFN γ比例显著升高 (P <0 0 1) ,IFN γ水平显著降低 (P <0 0 1) ;与哮喘模型组比较 ,川芎嗪组和地塞米松组IL 4水平和IL 4 /IFN γ比例均显著降低 (P <0 0 1)。结论　川芎嗪具有抑制哮喘Th2细胞亚群优势反应和调节免疫平衡的作用。     

川芎嗪对哮喘大鼠肺组织CD44 干预机制的实验研究

目的探讨川芎嗪对不同时段哮喘大鼠肺组织CD44的作用机制。方法以卵蛋白致敏制备大鼠哮喘模型，采用腹腔注射不同剂量川芎嗪、地塞米松或川芎嗪＋地塞米松（联合用药）进行干预，分别在激发或干预后的1、2周取肺组织，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学SP方法研究肺组织CD44的表达。结果正常大鼠肺组织CD44有少量表达。与正常对照组比较，在激发哮喘后1周肺组织中CD44的表达显著升高（P〈0．05），2周后升高更加明显（P〈0．001）。各用药干预组CD44的表达均高于正常对照组但低于哮喘模型组，且随着干预时间的延长，降低幅度增大；川芎嗪大剂量干预组与地塞米松组相似，干预至两周时接近正常水平，二者降低的幅度均大于川芎嗪小剂量干预组和联合用药组；川芎嗪小剂量干预组和联合用药组间无明显差异（P〉0．05）。结论哮喘肺组织CD44过量表达与哮喘的发生发展密切相关，并在早期即开始参与哮喘的发病。川芎嗪可通过抑制肺组织CD44在转录和蛋白水平的过度表达而阻止哮喘的发展。     

哮喘易感基因的研究进展

支气管哮喘(哮喘)是一种多基因遗传病,由易感基因和环境因素共同作用而发病.通过候选基因法、定位克隆法和全基因组关联研究共确定了数百个哮喘易感基因,主要包括β2肾上腺素能受体基因、白细胞介素4受体基因、微丝蛋白基因、心房利钠素前体A基因、Ⅰ型肌醇多聚磷酸4磷酸酶基因、解整合素.金属蛋白酶33基因、双肽酶10基因、视蛋白3基因、血清类黏蛋白1样蛋白3基因、磷酸二酯酶4D基因、几丁质酶3类1基因等,其中多个基因在独立人群中得到验证.     

川芎嗪对哮喘大鼠Th2型细胞因子作用的研究

目的 探讨川芎嗪对哮喘大鼠白细胞介素-4（IL-4）、白细胞介素-13（IL-13）水平的影响及其防治哮喘的作用机制。方法 60只SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、小剂量及大剂量川芎嗪组、联合用药组，以卵蛋白致敏和激发制备大鼠哮喘模型，用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL4、IL—13的水平。结果 哮喘模型组BALF中IL-4、IL—13水平均高于正常对照组（P〈0．001）；地塞米松组和川芎嗪治疗各组均显著低于哮喘模型组（P〈0．001）；川芎嗪大剂量组和联合用药组降低IL-4和IL—13的作用与地塞米松组无显著性差异（P〉0．05）；川芎嗪大剂量组降低IL-4的作用与川芎嗪小剂量组无显著性差异（P〉0．05），川芎嗪大剂量组降低IL—13的作用优于川芎嗪小剂量组（P〈0．05）；BALF中IL-4和TL—13水平呈显著正相关（r=0．714，P〈0．01）。结论 川芎嗪通过抑制IL-4和IL—13的水平而抑制哮喘气道炎症。     

全飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术对角膜表面规则指数的影响

目的:分析全飞秒激光小切口角膜基质透镜取出术(SMILE)对角膜表面规则指数(SRI)的影响。方法:回顾性病例研究。选取2017-01/2019-12秦皇岛视光眼科医院210例401眼近视患者为研究对象,依据采取的矫正手术将其分为观察组110例205眼行SMILE,对照组100例196眼行飞秒激光辅助的准分子激光原位角膜磨镶术(FS-LASIK)。比较两组患者手术前后裸眼视力(UCVA)、最佳矫正视力(BCVA)、角膜前表面6mm范围的非球面参数Q值和SRI。结果:术后3、6mo两组患者UCVA、BCVA均较术前改善(P<0.05),但组间比较无差异(P>0.05);观察组术后3、6mo、1a SRI高于对照组(P<0.05);术后两组患者各时点非球面参数Q值均高于术前,且观察组术后6mo,1a非球面参数Q值低于对照组(P<0.05)。结论:与FS-LASIK相比,SMILE术后有相似的视力恢复效果,但SMILE术后SRI大、对非球面参数Q值影响小。