PLCε shRNA质粒构建及功能鉴定

T24细胞株后对PLCε mRNA及对PLCε蛋白表达均有明显抑制,流式细胞术结果表明细胞阻滞于G0/G1期,MTT检测表明重组的载体质粒明显抑制T24细胞增殖活力.结论 针对PLCε基因的shRNA能有效抑制膀胱癌T24细胞中PLCε基因的表达及膀胱癌细胞增殖.     

HBV共价闭合环状DNA功能化纳米颗粒制备及鉴定

目的 制备HBV共价闭合环状DNA(cccDNA)功能化磁性纳米颗粒,为进一步建立富集分离和检测cccDNA方法奠定基础. 方法 通过亲和素修饰纳米颗粒表面,利用亲和素与生物素的亲和作用,将亲和素修饰的纳米颗粒与生物素标记的cccDNA特异性探针偶联,制备cccDNA功能化纳米颗粒,最后用cccDNA探针完全互补的荧光标记序列与功能化纳米颗粒反应,鉴定其特性. 结果 亲和素修饰的纳米颗粒能结合生物素最大量为1 205 ng/mg;通过与亲和素作用,生物素标记cccDNA特异性探针固定在磁性纳米微粒表面,其最大结合生物素标记探针量为3.2×10-9 mol/mg;cccDNA功能化纳米颗粒可捕获与其互补的荧光标记寡核苷酸序列,其最大捕获量为2.0×10-9mol/mg,并能通过变性释放出保持生物学活性游离的荧光标记寡核苷酸序列. 结论 成功构建的cccDNA功能化纳米微粒能有效捕获与其互补的序列,其捕获量能达到cccDNA的分离提取要求.