大鼠转化生长因子β1基因转染成骨细胞后的表达

背景将生物材料复合细胞因子基因,或复合转入细胞因子基因的细胞植入骨缺损处可以促进骨修复.目的观察将大鼠转化生长因子β1基因转染成骨细胞后进行骨缺损基因治疗的可行性.设计对照观察实验.单位华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科.对象新生SD大鼠5只,雌雄不限.方法实验于2000-02/09在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成.通过脂质体介导将转化生长因子β1基因导入大鼠成骨细胞,并以质粒pcDNA3转染细胞作为对照.转染24 h后通过链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物法和原位杂交法检测目的基因瞬时表达的情况.采用G418筛选转染细胞2周,获得阳性细胞克隆,用链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物法检测转染细胞稳定表达转化生长因子β1的情况.主要观察指标链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物法和原位杂交法检测转染细胞基因表达情况.结果①pcDNA3-TGF-β1转染成骨细胞瞬时表达组化检测和原位杂交检测结果24 h转染成骨细胞胞浆中充满染色的棕黄色颗粒,对照组空载体转染细胞胞浆中则没有棕黄色颗粒,说明转基因细胞中转化生长因子β1 mRNA明显增高.②G418筛选转基因细胞组化检测G418筛选2周后的转染细胞仍然有较高的转化生长因子β1表达.结论利用基因转染技术可使成骨细胞瞬时、高效表达细胞因子,转染后瞬时和筛选2周后,均呈现转化生长因子β1基因转染成骨细胞后稳定的高表达,说明采用细胞因子基因转染成骨细胞进行骨缺损的基因治疗具有可行性.     

大鼠转化生长因子β1基因转染成骨细胞后的表达

背景：将生物材料复合细胞因子基因，或复合转入细胞因子基因的细胞植入骨缺损处可以促进骨修复。目的：观察将大鼠转化生长因子β1基因转染成骨细胞后进行骨缺损基因治疗的可行性。设计：对照观察实验。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科。对象：新生SD大鼠5只，雌雄不限。方法：实验于2000—02／09在华中科技大学同济医学院附属协和医院骨科实验室完成。通过脂质体介导将转化生长因子β1基因导人大鼠成骨细胞，并以质粒pcDNA，转染细胞作为对照。转染24h后通过链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物法和原位杂交法检测目的基因瞬时表达的情况。采用G418筛选转染细胞2周，获得阳性细胞克隆，用链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物法检测转染细胞稳定表达转化生长因子β1的情况。主要观察指标：链霉亲和素-生物素化过氧化物酶复合物法和原位杂交法检测转染细胞基因表达情况。结果：①pcDNA3-TGF-β1转染成骨细胞瞬时表达组化检测和原位杂交检测结果：24h转染成骨细胞胞浆中充满染色的棕黄色颗粒，对照组空载体转染细胞腧浆中刚没有棕黄倘．颗粒．说明转基因细胞中转化毕长因子β1 mRNA明显增高。②G418筛选转基因细胞组化检测：G418筛选2周后的转染细胞仍然有较高的转化生长因子β表达。结论：利用基因转染技术可使成骨细胞瞬时、高效表达细胞因子，转染后瞬时和筛选2周后，均呈现转化生长因子β1基因转染成骨细胞后稳定的高表达，说明采用细胞因子基因转染成骨细胞进行骨缺损的基因治疗具有可行性。     

几种生物材料表面黏附特性的实验

目的：应用微吸管吸吮技术测量大鼠骨髓基质细胞在聚乳酸、聚丙交酯/乙交酯、聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸-聚乙二醇三嵌段共聚物表面的黏附力,以筛选生物相容性良好的生物材料.方法：实验于2003-11/2004-05在华中科技大学附属协和医院骨科组织工程实验室完成.选取4周龄健康SD大白鼠4只.大鼠麻醉后抽取双侧胫骨和股骨的骨髓基质细胞体外培养,第3代细胞用于实验.制备以玻璃为底、直径约25 mm的特制圆形小腔室,分别将聚乳酸、聚丙交酯/乙交酯、聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸-聚乙二醇三嵌段共聚物溶液0.3 mL滴入小腔室内,300 r/min离心5 min,在玻璃表面形成聚合物薄膜.用微吸管拉制器拉制微吸管,加工成前端内径为2～4 μm的微管,并用微量进样器向微管内灌满培养液,微管后端接于水压控制的微操作手上,并与自动压力控制系统连接.将第3代骨髓基质细胞接种在表面为不同材料的小腔室内,在每种材料表面随机测量20～30个细胞,以没有涂覆材料的玻璃为对照,测量骨髓细胞于不同时间在三种生物材料表面的细胞黏附力.结果：实验纳入大鼠4只,全部进入结果分析.不同生物材料上骨髓基质细胞黏附力的比较：细胞种植到生物材料表面4,12,24 h,骨髓基质细胞在聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸-聚乙二醇三嵌段共聚物表面的黏附力均明显高于聚乳酸、聚丙交酯/乙交酯[（172.78&;#177;15.23）,（155.609&;#177;17.29）,（144.84&;#177;21.14）;（324.84&;#177;102.73）,（199.39&;#177;37.20）,（234.09&;#177;62.09）;（180.77&;#177;29.22）,（170.32&;#177;21.14）,（174.38&;#177;44.29）&;#215;10^-10N,P均＜0.05].结论：微细管吸吮法能够精确测量细胞在支架材料上的黏附力.在聚乳酸、聚丙交酯/乙交酯、聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸-聚乙二醇三嵌段共聚物这三种生物材料中,聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸-聚乙二醇三嵌段共聚物表面的细胞黏附力最好,是较理想的生物材料.     

脑转移瘤的CT诊断 (附100例分析)

一、资料和方法脑转移瘤是常见的颅内肿瘤,约占颅内肿瘤的15～215%。本组100例中男性70例,女性30例,年龄18～74岁。97例在临床上有脑转移瘤症状,3例无症状。100例中有4例经手术和病理证实为转移性腺癌(其中1例为甲状腺癌转移)。     

IKVAV多肽自组装纳米纤维促进PC12细胞的黏附性能

目的：细胞黏附性能是评价神经组织工程基质材料的重要指标，拟对包含神经活性多肽片断的IKVAV多肽两亲性分子在体外进行自组装，并且检测其对PC12细胞黏附的影响。 方法：实验于2005-12／2006—03在华中科技大学附属协和医院骨科实验室完成。IKVAV多肽两亲性分子委托上海波泰生物科技公司合成，并用高效液相色谱仪和质谱仪进行纯化和分析。在IKVAV多肽两亲性分子中加入稀盐酸降低pH值引发其自组装，用不同浓度的IKVAV自组装材料包被培养板，培养PC12细胞，检测IKVAV对PC12细胞黏附的影响结果：①当IKVAV自组装材料的密度为0．58-15．0μg/cm^2 。时，能明显增强PC12细胞黏附，而且在一定的范围内随密度增加PC12细胞的黏附率升高。②在1h和3h各IKVAV密度组的细胞黏附率之间差异无显著性： 结论：IKVAV能够促进PC12细胞黏附，而且有一定的量效关系。同时，IKVAV促进PC12细胞黏附的作用迅速、稳定。     

重组人红细胞生成素对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的保护作用

目的 观察大鼠脊髓损伤(SCI)后损伤段脊髓神经细胞凋亡机制和相关因子的表达,以及重组人红细胞生成素(rHu-EPO)对其的影响。方法 30只SD大鼠分为4组,建立SCI模型,观察rHu EPO对大鼠神经功能的影响;免疫组化法检测损伤脊髓神经细胞凋亡因子(Bcl 2、Bax、Fas)的表达;TUNEL标记凋亡细胞;比较各组间差别。结果 治疗组的神经功能较损伤组提高(P<0.05);损伤组的凋亡阳性细胞多于治疗组;治疗组Bcl 2阳性表达细胞多于损伤组(P<0.05)。结论 凋亡是 SCI后神经细胞死亡的一种重要方式;rHu-EPO能抑制脊髓神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能有保护作用。     

有创机械通气救治急性左心衰合并严重肺水肿的临床探讨

目前，呼吸机广泛用于治疗各种类型的呼吸衰竭，亦有报道利用无创机械通气治疗急性左心衰取得良好效果。近来，我们利用有创机械通气救治了19例因急性左心衰造成严重肺水肿患者，取得良好效果，现报道如下。     

阻断转化生长因子β1自分泌环基因治疗骨肉瘤的机制研究

目的 阻断骨肉瘤细胞TGF—β1自分组环能抑制肿瘤细胞的增殖活性，从而达到基因治疗骨肉瘤的目的，探讨巴断TGF—β1自分组环基因治疗骨肉瘤的机制。方法 将反义TGF—β1基因转染骨肉瘤细胞MG—63后，采用RT—PCR的方法检测肿瘤细胞BMP—2、IGF—1、bFGF基因表达的变化。结果 阻断TGF—β1自分组环后，骨肉瘤细胞BMP-2、IGF—1、bFGF基因表达明显降低或消失。结论 通过阻断自分组环以降低骨肉瘤细胞表达的TGF—β1后，肿瘤细胞其他各种细胞因子的表达明显抑制，肿瘤细胞生物学活性降低。研究阻断TGF—β1自分组环抑制肿瘤生长和发展的机制，将为开辟骨肉瘤基因治疗的新方向奠定基础。     

腰椎间盘退变性疾病的研究进展及展望

腰椎间盘退变性疾病(lumbar disc degenerative disease,LDDD)是最常见的脊柱疾病之一,易造成腰椎间盘突出、腰椎滑脱、腰椎管狭窄等继发性病变.LDDD的病因复杂,发病机制及病理变化尚不明确,同时治疗效果并不十分理想.近年来,分子生物学、基因技术、生物力学的快速发展为阐明LDDD的发病机制和病理变化提供了新的方法.同时,各种新型药物和生长因子的研发应用、基因治疗、人工椎间盘置换以及组织工程技术为治疗LDDD提供了新的手段.目前,对LDDD的研究受到广泛关注.现就LDDD的研究进展及展望作一述评.