P38与内质网应激诱导胃癌细胞顺铂耐药的关系*

目的:探讨P 38在内质网应激诱导胃癌细胞中对顺铂产生耐药的作用。方法:采用衣霉素及毒胡萝卜素建立胃癌细胞内质网应激模型,用Westernblot技术检测内质网应激标志物GRP 78的表达;流式细胞仪技术检测内质网应激能否降低胃癌细胞对顺铂的敏感性;Westernblot技术检测内质网应激对P 38激活状态的影响;流式细胞仪技术检测P 38通路受阻能否逆转内质网应激诱导的胃癌细胞对顺铂的耐药现象。结果:衣霉素（或毒胡萝卜素）处理胃癌细胞BGC 823 及SGC 79018、16、24h 后,GRP 78蛋白表达量均明显高于0 h 组。衣霉素（或毒胡萝卜素）组、顺铂组及衣霉素（或毒胡萝卜素）加顺铂组胃癌细胞系的凋亡率均明显高于对照组（P < 0.05）,衣霉素（或毒胡萝卜素）加顺铂组凋亡率明显低于顺铂组（P < 0.05）。 衣霉素（或毒胡萝卜素）处理胃癌细胞BGC 823 及SGC 79018、16、24h 后,P 38的磷酸化水平明显高于0 h 组,而各组P 38蛋白表达水平无明显变化;P 38抑制剂SB203580或PD169316均可抑制P 38的激活。阻断P 38通路可基本恢复内质网应激状态下胃癌细胞对顺铂的敏感性（P < 0.05）。结论:内质网应激可通过激活P 38通路诱导胃癌细胞对顺铂产生耐药,阻断该通路可抑制内质网应激诱导胃癌细胞对其耐药现象。      

过表达Mxi1对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响

目的：构建含有Max结合蛋白1（Mxi1）基因的重组慢病毒载体,并探讨过表达Mxi1基因对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。方法：利用DNA重组技术将Mxi1基因克隆至慢病毒载体,经酶切和测序鉴定后,将重组质粒与慢病毒辅助包装元件质粒共转染293T 细胞,获得含 Mxi1基因的重组慢病毒。重组慢病毒感染人胃癌SGC-7901细胞,荧光显微镜下观察感染效率,逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Mxi1、cyclinB1和caspase-8的基因表达,免疫印迹法（Western blot）检测Mxi1蛋白的表达。CCK-8比色法和流式细胞术分别检测Mxi1 基因对人胃癌SGC-7901细胞增殖和凋亡的影响。结果：成功构建含 Mxi1基因的慢病毒表达载体,RT-PCR和Western blot检测到Mxi1 基因和蛋白的表达。RT-PCR结果显示,过表达Mxi1 的SGC-7901细胞与空白对照细胞及过表达空病毒对照细胞相比,细胞内cyclinB1的mRNA表达水平明显降低,而caspase-8的 mRNA表达水平显著升高。CCK-8实验和流式细胞术检测结果显示,过表达Mxi1的SGC-7901细胞与空白对照细胞及过表达空病毒对照细胞相比,细胞增殖活性明显降低,细胞凋亡率显著升高。结论：成功构建Mxi1慢病毒载体且有效转染SGC-7901细胞,过表达Mxi1 可以抑制胃癌细胞增殖并促进其凋亡。     

RUNX1基因突变对成人急性髓系白血病患者临床特征、疗效及预后的影响

目的探讨Runt相关转录因子1(RUNX1)基因对成人急性髓系白血病(AML)患者临床特征、疗效及预后的影响。 方法利用二代测序方法检测2017年4月至2021年10月于济宁市第一人民医院血液内科就诊的145例初诊AML患者中RUNX1、FLT3、NPM1等在内的25种AML相关基因突变情况,按照有无RUNX1基因突变将患者分为RUNX1基因突变(RUNX1^mut)组及RUNX1基因野生型(RUNX1^wt)组,比较两组在年龄、性别、初诊时外周血细胞计数、骨髓原始细胞比例、FAB分型、细胞遗传学分层、AML细胞免疫表型、伴发基因突变、治疗疗效及生存期方面的差异。 结果15例(10.34%)患者中检出RUNX1突变。与RUNX1^wt组(n＝130)患者相比,RUNX1^mut组(n＝15)患者的年龄更大[(61.00±10.42)岁,(49.92±16.33)岁](t＝3.63,P＝0.001),骨髓原始细胞比例更低[34.01(22.60,45.00)%,55.91(33.44,77.95)%,U＝827.00,P＝0.013],AML细胞表达CD15[0%(0/15),26.15%(34/130),P＝0.022]和CD64[6.67%(1/15),39.23%(51/130),χ²＝6.20,P＝0.013]的阳性率更低,合并其他基因突变个数更多[5.00(3.00,6.00),3.00(2.75,5.00),U＝650.50,P＝0.032],且更易伴发EZH2突变[20.00%(3/15),1.54%(2/130),P＝0.008]及8号染色体三体(+8)异常[21.43%(3/14),3.31%(4/121),P＝0.025]。两组在性别、初诊时外周血细胞计数、FAB分型、细胞遗传学分层及诱导治疗反应率方面均差异无统计学意义(均P>0.05)。另外,RUNX1^mut组患者1年总生存期显著低于RUNX1^wt组[40.00%(6/15),66.15%(86/130),χ²＝3.97,P＝0.046]。 结论在AML患者中RUNX1基因突变与高龄、低骨髓原始细胞比例、AML细胞低表达CD15和CD64及伴发更多的基因突变相关,RUNX1突变易合并EZH2突变及8号染色体异常。携带有RUNX1突变的患者可能生存期更短,预后更差。     

体外诱导胰腺干细胞向胰岛样细胞团的分化

背景：目前由于胰岛来源匮乏,使得胰岛细胞移植治疗糖尿病无法满足临床需求,故体外将胰腺干细胞诱导分化为胰岛成为研究焦点。目的：于体外将小鼠胰腺干细胞诱导成胰岛样细胞团并对其进行相关检测,探寻一种胰腺干细胞体外诱导分化成胰岛及鉴定的技术和方法。方法：体外获得纯化的小鼠胰腺干细胞,采用联合诱导剂对其进行成胰岛方向的诱导分化,并对诱导形成的胰岛样细胞团进行形态学观察、双硫腙染色、RT-PCR和Western blot检测。结果与结论：实验通过细胞形态学和细胞生长特性的观察以及免疫细胞化学染色证实体外成功获得了小鼠胰腺干细胞,采用联合诱导剂将其诱导成胰岛样结构,呈球形,以较细长的蒂部与瓶底连接,双硫腙染色将其染成铁红色。RT-PCR和Western blot法可分别检测到胰岛样细胞团的胰岛素mRNA和胰岛素蛋白。结果证实小鼠胰腺干细胞可体外诱导分化成含β细胞的胰岛样细胞团。     

特异性siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中OY-TES-1蛋白表达的抑制作用

目的:探讨特异性siRNA对卵巢癌SKOV3细胞中肿瘤-睾丸抗原OY-TES-1蛋白表达的影响。方法:针对OY-TES-1基因设计、化学方法合成的siRNA通过脂质体转染体外培养的卵巢癌SKOV3细胞,在转染后24、36、48、72 h,通过免疫细胞化学检测OY-TES-1蛋白的表达水平。结果:靶向OY-TES-1基因siRNA转染SKOV3细胞后,OY-TES-1蛋白的表达明显降低,其抑制作用在转染后24 h出现,转染后36 h几乎完全被抑制,转染后72 h开始出现RNAi衰减现象。结论:OY-TES-1特异性siRNA(1 486～1 504)序列可在体外有效地干扰SKOV3细胞中OY-TES-1基因的表达。     

卵巢癌细胞中OY-TES-1基因启动子CpG位点甲基化状态分析

目的:了解卵巢癌SKOV3细胞中OY-TES-1启动子区域CpG位点的甲基化状态.方法:运用免疫细胞化学法检测SKOV3细胞中OY-TES-1蛋白表达;通过硫化测序PCR法,分析SKOV3细胞中OY-TES-1启动子区域CpG位点的甲基化状态,并与睾丸组织相比较.结果:免疫细胞化学法检测结果显示,SKOV3细胞中OY-TES-1蛋白呈阳性反应;在检测的OY-TES-1启动子区域(转录起始点-127 bp～+110 bp,含24个CpG位点)中,CpG位点的甲基化频率为80.21％,其甲基化状态明显高于睾丸组织.结论:SKOV3细胞中OY-TES-1启动子CpG位点处于高甲基化状态,进一步可探讨甲基化抑制剂氮杂脱氧胞嘧啶对OY-TES-1甲基化状态及其表达水平的影响.     

非肌层浸润膀胱癌患者癌组织BLACAT2、WDR5表达观察及预后影响因素分析

目的 观察非肌层浸润膀胱癌（NMIBC）患者癌组织长链非编码RNA膀胱癌相关转录本2(BLACAT2)、WD重复域蛋白5(WDR5)的表达变化，并分析患者预后的影响因素。方法 选取NMIBC组织及正常膀胱黏膜组织各94例份，采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测上述组织BLACAT2、WDR5 mRNA，免疫组化法检测上述组织WDR5蛋白，分析BLACAT2 mRNA、WDR5 mRNA之间及其与NMIBC临床病理特征的关系，比较不同BLACAT2、WDR5 mRNA表达的NMIBC患者总体无进展生存率，分析NMIBC患者的预后影响因素。结果 NMIBC组织BLACAT2、WDR5 mRNA相对表达量分别为2.19±0.38、1.62±0.41，正常膀胱黏膜组织分别为0.47±0.09、0.61±0.12，两者比较，P均<0.05。NMIBC、正常膀胱黏膜组织WDR5蛋白阳性率分别为71.28%、10.64%,P<0.05。NMIBC组织BLACAT2 mRNA与WDR5 mRNA表达呈显著正相关（r=0.756,P=0.000）。BLACAT2、WDR5 mRNA表达与NMI...