艾滋病HAART治疗免疫重建炎性综合征的免疫机制初步研究

目的 为探讨我国艾滋病病人(AIDS)启动高效抗反转录病毒治疗(HAART)后,发生免疫重建炎性综合征(IRIS)的免疫学发病机制,在前瞻性研究队列中对启动HAART的AIDS病人部分淋巴细胞亚群、调节性T细胞和部分Th1和Th2细胞因子等进行追踪分析.方法 将接受HAART初始治疗的238例AIDS病人建立前瞻性研究队列,分为在24周内发生IRIS的47例病人(IRIS组)和未发生IRIS的191例病人(非IRIS组).在HAART的0周、12周和24周采集两组血标本,对47例IRIS病例及随机选择的50例非IRIS病例进行免疫机制的研究分析,检测HIV病毒载量和CD4+细胞计数;使用流式细胞术检测部分淋巴细胞亚群和调节性T细胞(CD4+CD25+Foxp3+).在HAART的0周、4周、12周、24周及发生IRIS时分别采集全部238例患者的血标本,使用ELISA法测定血浆细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10以及IL-7水平.结果 两组感染者的CD4+、CD8+纯真细胞和记忆细胞比例在0周、12周、24周及发生IRIS时比较差异均无统计学意义,但CD4+记忆细胞和CD8+记忆细胞比例在启动HAART后均明显上升.两组感染者CD4+CD38+活化细胞和CD8+CD38+活化细胞比例在基线时均较正常值明显升高,治疗后均有下降趋势.在0周、12周、24周及发生IRIS时CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在IRIS组中均较非IRIS组要低.两组IL-2及IFN-γ在HAART后均呈上升趋势,且IRIS组在4周及发生IRIS时更明显高于非IRIS组;两组IL-4及IL-10在HAART后均呈下降趋势,IRIS组中IL-10在4周及发生IRIS时更明显低于非IRIS组.IL-7在两组中基线时均较正常值升高,并随HAART进程逐渐降低,其中IRIS组在各随访点IL-7均要高于非IRIS组.结论 接受HAART治疗者早期即出现记忆T细胞快速上升,在IRIS炎症反应中可能起重要作用.IL-2、IL-10和IFN-γ在发生IRIS时的水平差别,提示IRIS的发生与炎性细胞因子大量增加,炎性抑制因子相对不足有一定关系.IL-7也可能参与到IRIS的发病机制中.

Abstract：

Objective To investigate the immunological pathogenesis of immune reconstitution inflammatory syndrome (IRIS) during highly active antiretroviral therapy( HAART), in this prospective cohort study we analyzed the lymphocyte subsets, lymphocyte activation, changes in regulatory T cells, and levels of Th1 and Th2 cytokines in both IRIS and non-IRIS groups. Methods Two hundred and thirty-eight AIDS patients received HAART and participated prospective research cohort for 24 weeks follow-up. Forty-seven IRIS cases and 191 non-IRIS cases were enrolled in the IRIS group or non-IRIS group respectively. Blood samples were collected in both groups at pre- and post-HAART 12 weeks, 24 weeks. Using flow cytometer to detect the immunophenotypes of lymphocyte subsets (CD4 + CD45RA+ CD62L+, CD8+ CD45RA+ CD62L+naive T cells; CD4+ CD45RO+, CD8+ CD45RO+ memory T cells), activated T lymphocytes (CD4+CD38 +, CD8 + CD38 + cells), and regulatory T cell ( CD4 + CD25 + Foxp3 + ). Blood samples collected at pre-and post-HAART4 weeks, 12 weeks, 24 weeks and used ELISA to detect IL-2, IFN-γ, IL-4, IL-10and IL-7 cytokine serum levels. Results The percentages of CD4 + and CD8 + naive T cells and mlemory T cells exhibited no significant differences at the baseline, 12 weeks, 24 weeks of HAART initiation between both groups, but CD4 + and CD8 + memory T cells were demonstrated a trend towards to increase while compared to baseline during HAART. The percentages of CD4 + and CD8 + activated T cells are significantly higher at the baseline while compared to normal control and demonstrated a downward trend, but between both groups showed no significant difference. The percentages of CD4 + regulatory T cell was lower in IRIS group than non-IRIS group at the baseline, 12 weeks, 24 weeks and the onset of IRIS. Th1 cytokines, IL-2 and IFN-γshowed an upward trend during HAART at the levels of IRIS group had significantly increased at 4 weeks and the onset of IRIS. Th2 cytokines, IL-4 and IL-10 showed a downward trend during HAART,and the levels of IL-10 in IRIS group had significantly decreased at 4 weeks and the onset of IRIS. IL-7 was higher than normal control at the baseline in two groups and showed a downward trend during HAART. The level of IL-7 was higher than non-IRIS group at all follow-up points. Conclusion Memory T cells appear rapid increase in the early stage of HAART and may play a significant role in the inflammatory response of IRIS. CD4 + and CD8 + naive T cells, memory T cells and activated T cells showed no significant difference between IRIS and non-IRIS group within 24 weeks after HAART started. There was a significant reduction in the frequency of regulatory T cells in IRIS group without obvious upward trend during HAART, suggesting that the immune suppression function of regulatory T cells in IRIS was impaired. IL-2 and IFN-γ significantly increased while IL-10 significantly decreased at 4 weeks post-HAART initiation and onset of IRIS in IRISgroup than non-IRIS group, suggested that IRIS was related to cytokines environment disorder. That is, a significant increase in inflammatory cytokines, while the relative lack of non-inflammatory cytokines. The level of IL-7 decreased gradually after HAART started, and it was higher in IRIS group when compared to non-IRIS group in the first 24 weeks after HAART started. Also IL-7 may play a role in the pathogenesis of IRIS.     

HIV-1 Vpr对细胞周期的影响和致凋亡作用的研究

目的 研究人免疫缺陷病毒1型(HIV-1)的vpr基因和不同变异株对宿主细胞周期和凋亡的影响,以及其致细胞周期变化和致细胞凋亡机制的两者间的可能关系.方法 将14个带有不同变异位点的中国感染者HIV-1 upr片段分别连入pcDNA3.1(+)真核表达载体,构建重组质粒.将这些重组质粒电转染Jurkat细胞,并设立保守株vpr基因转染细胞、突变株vpr-Fs基因转染细胞、空载体转染细胞和未转染细胞作为对照.经G418选择培养及RT-PCR检测目的基因转染成功后,PI染色,流式细胞仪检测被转染细胞的细胞周期分布和细胞凋亡.结果 流式细胞仪检测上述14个带有不同变异位点的HIV-1 vpr基因片段的Jurkat细胞,发现转染保守片段HIV-1 vpr的Jurkat细胞,其细胞周期出现G_2期阻滞和细胞凋亡率明显升高,但转染vpr C端截断的vpr-Fs片段的细胞、空载体peDNA3.1(+)转染细胞和未转染的Jurkat细胞无此现象.转染了,HIV-1 vpr基因序列相对应的Vpr蛋白中含有70V、85P、86G、94G突变的片段,较vpr保守片段其致感染细胞G_2期阻滞和凋亡的能力明显下降,且Vpr蛋白的AE亚型致细胞周期阻滞和致凋亡能力较其他亚型普遍为低.初步发现vpr诱导G2期阻滞百分比越高其所致凋亡率越高.结论 HIV-I vpr基因有明显的致感染细胞G_2周期阻滞和致细胞凋亡的作用,但vpr C端截断的vpr-Fs片段无此功能.首次发现中国感染者HIV-1 vpr基因表达蛋白的70V、85P、86G、94G位点突变能使其致感染细胞G_2期阻滞和凋亡的能力下降,Vpr的AE亚型致细胞周期阻滞和凋亡能力较其他亚型普遍为低.对14个变异片段的分析显示vpr诱导G_2期阻滞的程度与其致凋亡水平可能相关,提示两者的发生机制可能有一定的关联.本研究为进一步探讨HIV-1致病机制和探索可能的基因干预措施打下基础.     

血吸虫病延迟诊断22例分析

目的通过分析血吸虫病延迟诊断的情况,探讨减少误诊的途径。方法收集2001年5月至2006年5月在中南大学湘雅二医院延迟诊断为血吸虫病病例,分析临床特点和误诊原因。结果符合条件的病例共22例,学生占60%;主要临床表现为发热、咳嗽、腹痛、腹泻、嗜酸性粒细胞增加,少数有浅表淋巴结肿大、肝脾肿大,入院诊断为肺部感染、伤寒、败血症、结核菌感染、炎症性肠病、肿瘤等。结论血吸虫病发生在疫区,诊断依靠复杂的临床表现及特异性辅助检查。易感人群除农民外,也有接触疫水的学生。     

高效抗反转录病毒疗法中的免疫重建炎性综合征及相关危险因素分析

目的了解高效抗反转录病毒疗法（highly active antiretroviral therapy,HAART）中发生的免疫重建炎性综合征（immune restoration inflammatory syndromes, IRIS）,并分析发生IRIS的危险因素。方法采用前瞻性研究方法对初次启动HAART的212例HIV／AIDS患者进行为期6个月的跟踪随访观察,统计IRIS的发生率、发生时间和临床疾病谱,采用多元逐步Logistic回归法分析发生IRIS的危险因素。结果212例患者中,59例在HAART开始的6个月内发生IRIS,发生率为27．8％,其中2例死亡,IRIS病死率为3．39％。IRIS发生的中位时间为HAART后的第21天。发生的疾病谱包括结核病、疱疹病毒感染、肺胞子菌肺炎、隐球菌性脑膜炎和马尔尼菲青霉病等。Logistic多元逐步回归分析显示,基础感染的数量（OR=1．655,P=0．010）、HAART时患者发热情况（OR=2．344,P=0．006）以及CD4＋T淋巴细胞基线值（OR=1．556,P=0．034）与IRIS的发生相关。结论IRIS多发生于HAART开始后的1个月内,常见疾病谱为结核病和疱疹病毒感染等。HAART开始时抗原负荷愈多、基线CD4＋T淋巴细胞水平愈低,越易发生IRIS。在HAART开始前尽可能控制基础感染,有利于减少IRIS的发生。     

HAART治疗的艾滋病患者血清IL-16动态监测及临床价值

目的 探讨艾滋病毒Ⅰ型(HIV-1)(+)感染者在高效抗逆转录病毒治疗(HAART)不同阶段血清白细胞介素16(IL-16)的变化及临床价值. 方法用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清IL-16水平;用反转录聚合酶链反应(RT-PR)法测定HIV RNA载量.HAART治疗方案:去羟肌苷+司他夫定+奈韦拉平. 结果健康组与未治疗组、C治疗4周、治疗8周组比较,未治疗组与治疗18周、治疗24周组比较,血清IL-16水平极显著升高(P＜0.01);未治疗组与治疗4周、治疗8周组比较,血清IL-16水平也明显升高(P＜0.05). 结论血清IL-16作为HIV/AIDS病情观察及抗病毒疗效考核的指标值得重视.IL-16作为辅助治疗HIV/AIDS也将具有应用前景.     

高效抗逆转录病毒治疗艾滋病毒感染者和艾滋病患者的6年临床疗效及安全性观察

目的：评估奈韦拉平加两种核苷类反转录酶抑制剂组合对艾滋病毒（human immunodeficiency virus, HIV）感染者和艾滋病（acquired immunodeficiency syndrome, AIDS）患者的长期抗病毒和免疫重建效果以及毒副作用。方法：从2002年10月至2004年5月共有57例HIV-1感染者/AIDS患者陆续接受高效抗反转录病毒治疗（highly active antiretroviral therapy, HAART）,定期随访截止于2008年12月。HAART方案主要为两种核苷类反转录酶抑制剂加奈韦拉平。随访期间定期监测其病毒载量,T细胞亚群的变化,记录药物的毒副作用并适当处理,追踪血常规和主要生化指标的变化;对治疗出现病毒学失败或严重毒副作用者及时调整用药。结果：57例中,34例持续追踪了4年以上。经过5~6年治疗,63.3%(19/30)的患者病毒载量＜50拷贝/mL。 CD4+细胞比治疗前平均上升了329个/μL。CD8+细胞平均下降128个/μL,CD4+CD45RA+CD62L童贞细胞和CD4+CD45RO+记忆细胞逐渐上升,CD8+CD38+激活细胞逐渐下降;这些变化均以治疗2年内较明显,2年以上的长期趋势变缓,但6年时均未达到健康者的水平。56%(32/57)的患者先后出现多种可能与药物相关的毒副作用,主要为消化道症状、神经系统症状、皮疹和脱发,多发生于6月内。29.8%(17/57)的病例γ-谷氨酰转肽酶升高, 26.3%(15/57)的患者血脂升高,6例出现脂肪分布异常,多见于女性患者;25例发生血象异常、肝功能受损、肾功能变化和淀粉酶升高。3例患者发生3~4级毒副作用(2例为外周神经炎,1例怀疑乳酸酸中毒),1例患者发生3级皮疹。结论：奈韦拉平加两种核苷类反转录酶抑制剂的HAART药物组合长期治疗艾滋病毒感染者和艾滋病患者可持续抑制病毒,增加CD4细胞,其毒副作用可控制,是安全有效的治疗方案。     

男男性接触者和艾滋病

艾滋病在我国已进入快速增长期 ,专家估计中国大陆 2 0 0 1年底已有艾滋病病毒 (ＨＩＶ )感染者85 0 0 0 0人 ,且感染者年增长 30 %～ 4 0 %。性接触是ＨＩＶ主要的传播途径之一 ,其中同性性接触的传播尤为明显[1] 。由于种种原因我国对同性性行为的情况了解较少 ,其相关的防制措施更显薄弱。本文拟就我国男男性接触者的概况、与艾滋病的关系及其可能干预方案 ,作一初步讨论。1　男男性接触者的定义和同性恋的诊断标准男男性接触者是指和男性发生性接触的男性(ｍｅｎｗｈｏｈａｖｅｓｅｘｗｉｔｈｍｅｎ ,ＭＳＭ ) ,包括四部分人 :男性同性…     

TT病毒子宫内传播的初步研究

目的 :观察TT病毒 (TTV)子宫内传播的可能性。方法 :采用妊娠中期引产孕妇的静脉血及其胎儿心脏血 ,以巢式聚合酶链反应检测TTVDNA部分基因 ,对产物进行基因序列测定和分析 ,并比较母子TTV部分序列之间同源性。结果 :2 3例孕妇中TTVDNA阳性者 5例 (2 1.7% ) ,其中 2例引产儿亦阳性。测序结果与中国北京株TTVDNA同段序列基本一致。两对阳性母子TTVDNA序列同源性极高 (98.3% ,99.1% )。结论 :TTV可在子宫内传播     

一起严重的艾滋病毒职业暴露处理经过及分析

随着我国艾滋病毒（human immunodefieieney virus,HIV）感染者和艾滋病（human immunodefieieney syndrome,MDS）发病率的不断上升,到医院就诊的HIV感染者和AIDS病人逐渐增多。医务人员在施行诊断和治疗处理时,不可避免地接触到HIV污染的血液、体液或组织。避免HIV职业感染及暴露后的正确规范处理是值得研究的重要问题。本文报告1例严重HIV职业暴露,由于处理得十分规范和及时,完全符合有关的职业暴露后处理的程序和措施,有效地避免了一次危险的职业感染事故。