用聚合酶链反应检测泪液中单疮病毒DNA

自从80年代末开始应用聚合酶链反应(PCR)检测病毒DNA,已成为目前最特异和最敏感的方法。国外已有报导用PCR 检测角膜上皮、房水、玻璃体、视网膜下液中的HSV DNA。我们试用HSV 的多聚酶(Pol)基因的PCR 引物检测各种角膜炎病人泪液中的HSV DNA,现将结果报告如下。     

热应激对鲤鱼血清组织HSP70诱导的影响

为了探讨热应激过程中热应激蛋白（heat stress proteins，HSPs）的诱导合成与机制，建立了鲤鱼血清组织HSP70的双抗体夹心酶联免疫吸附检测方法（ELISA）。以国际通用的鱼类温度指标测定程序，依据鲤鱼的起始致死温度（即50％个体无限期存活的温度上限Upper incipient lethal temperature，TL50），以及鲤鱼的选择一回避温度、选择最适温度（Preferred optimum temperature），在热冲击室内模拟环境下，进行了不同驯化温度、不同增温条件下的鲤鱼血清组织HSP70的诱导合成测定。     

重组人神经肽Y受体Y5融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究

目的 在大肠杆菌中表达人神经肽Y Y5受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析.方法 取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y5转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化.然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y5受体蛋白.结果 经IPTG诱导含有pET28a-Y5重组质粒的DE3菌,表达出重组人Y5融合蛋白.重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白.经相关在线软件分析后获得了Y5受体的相关生物学特性.结论 重组质粒pET28a-Y5在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对Y5受体蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础.     

大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶自杀基因对人胃癌细胞的作用

目的：探讨大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶自杀基因对胃癌细胞MKN-45的抑制及杀伤作用, 并证实旁观者效应。方法：构建真核表达载体pcDNA3.1-ePNP, 将重组载体转染MKN-45细胞获得高表达大肠杆菌嘌呤核苷磷酸化酶基因（ePNP）的MKN-45细胞克隆。在MKN-45/ePNP细胞培养物中加入前体药物MePdR, 观察MePdR对该细胞的杀伤作用及旁观者效应。结果：随MePdR浓度的增大, MKN-45/ePNP细胞的生存率逐步下降,在MePdR浓度达到1 mg•L^-1时MKN-45/ePNP细胞全部被杀灭, 而未经转染的MKN-45细胞的生存率则不受影响，MePdR对MKN-45/ePNP有显著的抑制及杀灭作用；当MKN-45/ePNP细胞占总细胞的10%时，全部细胞被杀死。结论:ePNP/MePdR 自杀基因系统对胃癌细胞有生长抑制及杀伤作用并具有旁观者效应。     

PCR检测技术中模板DNA的简易快速提取法

本文报道用胰酶消化分散组织细胞,再用蛋白酶K和非离子去垢剂从肺癌组织细胞中提取DNA。结果表明:本方法只需 100mg左右的组织即可提取 10μg左右的 DNA,并且简单快速,省去以往用匀浆器破碎细胞的繁琐操作,提取的DNA不需用酚和氯仿抽提就可直接用于PCR。     

多重聚合酶链反应检测女性生殖道病毒感染

应用多重聚合酶链反应(PCR)检测了女性生殖道单纯疱疹病毒、乳头瘤病毒和巨细胞病毒。结果显示:在健康体检200例中,9例为阳性(4.50％);门诊病人712例中,142例为阳性(19.94％)。多重PCR具有一次可检测多重病原,且速度快、敏感和特异的优点,非常适用于临床检测女性生殖道病毒感染。