免疫PCR

将抗原抗体反应与ＰＣＲ技术结合在一起建立了一种新的检测微量抗原的技术，这种技术称之为免疫ＰＣＲ，其具有非常高的敏感性，比ＥＬＩＳＡ敏感１０＾５倍，在理论上可以检测到一个分子的抗原，因此，免疫ＰＣＲ具有非常广泛的应用前景。     

90例肺炎患儿的腺病毒和支原体DNA检测

应用二重ＰＣＲ方法检测９０例小儿肺炎鼻咽分泌物中的腺病毒和支原体ＤＮＡ。采用快速制备ＰＣＲ模板的方法简化ＰＣＲ实验过程，在４小时内全部完成，结果腺病毒阳性２７例（３０％）支原体最性１３例（１４．４％），而病毒分离仅２例阳性，因此，本方法既保持了ＰＣＲ的敏感性和特异性，又使实验过程简化，可用于常规诊断呼吸道腺病毒和支原体感染。     

非放射性PCR—SSCP的应用

我们将核酸银染用于ＰＣＲ－ＳＳＣＰ（聚合酶链反应－单链构象多态），结果显示具有简便、快速、无放射性污染等优点，有利于核酸分析的科研及临床应用。     

血清TK1压电石英晶片免疫传感器测定法的建立及其在恶性肿瘤诊断中的初步应用

目的建立压电石英晶片免疫传感器测定方法检测人血清中胸腺嘧啶脱氧核苷激酶-1(TK1),探索其对常见恶性肿瘤早期诊断的可行性。方法克隆人TK1基因,表达并纯化TK1基因融合蛋白,再制备并纯化TK1单克隆抗体后,用生物素标记TK1单克隆抗体。再选择并利用特殊TK1固化剂和镀金压电石英晶体制备压电石英晶体TK1免疫传感器及抗干扰反应池及屏蔽系统。最后,用此免疫传感器方法检测正常人、不同肿瘤患者血清。结果肝癌血清的TK1水平最高(2·44±0·46)ng/ml,其次为乳腺癌血清(1·16±0·24)ng/ml,二者的TK1水平均明显高于其他恶性肿瘤血清(P<0·001)。肺癌、胃肠癌、生殖系统癌以及其他恶性肿瘤血清间的TK1水平接近(P>0·05),但与良性肿瘤血清TK1存在显著性差异(P<0·001)。此外,良性肿瘤血清的TK1频移值亦显著大于正常人血清(P<0·001)。结论压电石英晶片免疫传感器可作为一种简便灵敏TK1测定新方法用于临床恶性肿瘤普查以及区分肿瘤类型,尤其是肝癌的诊断。     

糖尿病大鼠心肌GluT4 mRNA的表达水平

目的 探讨ＧｌｕＴ４ｍＲＮＡ的表达水平与糖尿病心肌病的相关性。方法 采用逆转录聚合链式反应的方法对链脲佐菌素（ＳＴＺ）诱导的糖尿病大鼠心肌ＧｌｕＴ４ｍＲＮＡ的表达水平检测与正常对照组大鼠对比。结果 糖尿病大鼠心ＧｌｕＴ４ｍＲＮＡ的表达水平明显低于正常对照组（Ｐ〈０．０１）。结论 在发生糖尿病的同时,大鼠心肌细胞ＧｌｕＴ４ｍＲＮＡ的表达受抑制,含量降低,导致心肌的能量代谢紊乱,引起糖尿病心肌病。     

人细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)基因克隆和原核表达

目的从人胃癌组织中克隆出人CDK2基因和原核表达CDK2蛋白.方法从胃癌组织中提取RNA,逆转录PCR扩增CDK2 cDNA'PCR产物进行TA克隆和DNA序列分析;阳性TA克隆CDK2片段亚克隆入PET28a 载体,IPTG诱导表达人CDK2.结果逆转录PCR扩增出约900 bp的DNA片段,TA克隆和DNA序列分析显示重组片段是人CDK2基因序列,全长897bp;CDK2 cDNA亚克隆入PET28a 载体NcoI和XhoI位点之间;IPTG诱导出约34 kD的蛋白.结论从人胃癌组织中成功地扩增出人CDK2基因,并且在大肠杆菌中得到表达.     

IFN-γ治疗结核的动物实验研究

目的　探讨 IFN- γ对结核的治疗作用。方法　在建立小鼠结核模型的基础上 ,给予小鼠 IFN- γ腹腔内注射 ,采用 RT- PCR法观察小鼠肺组织 IFN-γ的表达 ,病理切片及肺组织内结核菌培养的对比。结果　给予 IFN-γ注射的小鼠病理组织像上也可见结核肉芽肿样病变 ,但对照组织病理切片上可见在渗出病变的基础上 ,出现灶性坏死。两组病变对比出现明显的差异。肺内细菌数也呈现明显的对比。IFN- γ的 m RNA表达 ,实验组较对照组明显减少。结论　 IFN-γ是一个有效的增强宿主抵御结核分支杆菌感染的免疫调节细胞因子。     

压电免疫传感器用于人胸苷激酶及其与单克隆抗体反应亲和常数的测定

目的用自制单克隆抗体构建人胸苷激酶(hTK)压电免疫传感器,测定免疫反应亲和常数,评价抗体的活性。方法在压电石英晶体的金电极上自组装一层蛋白A,定向固定hTK单克隆抗体,测定不同浓度hTK引起的频移值。结果根据Scatchard绘图法,对免疫反应亲和常数进行了估算,为1.85×106mol/L。结论该压电免疫传感器可直接测定溶液中的hTK,得到免疫反应的亲和常数,并证实实验室制备的单克隆抗体具有较高活性。     

人CDK4 cDNA克隆和原核表达

目的 从人肝癌组织细胞中克隆人CDK4基因和原核表达CDK4蛋白.方法 用逆转录PCR方法从人肝癌组织RNA中扩增出CDK4 cDNA,然后与T载体和PET28a＋载体重组,转化受体菌和诱导表达,DNA序列分析和Western blot鉴定重组质粒和蛋白表达.结果 PCR扩增出900 bp的DNA片段,与T载体和PET28a＋载体重组得到人CDK4基因的重组质粒,DNA序列显示为人CDK4的cDNA全序列;IPTG可以诱导重组菌表达蛋白;Western blot结果表明为人CDK4蛋白.结论 用逆转录PCR方法扩增出人CDK4 cDNA,并与PET28a＋载体重组得到能够用IPTG诱导表达的人CDK4蛋白.     

p21基因转染人肝癌SMMC-7721 细胞对化疗药物敏感性的研究

目的探讨p21基因转染人肝癌SMMC-7721细胞（7721细胞）对化疗药物的敏感性，深入研究p21基因对肝癌细胞的治疗作用。方法应用磷酸钙介导p21基因转染人肝癌7721细胞；通过G418筛选稳定表达细胞株并扩大培养；采用MTT法检测肿瘤细胞增殖速度；流式细胞术检测细胞周期变化。结果经过3～4w G418筛选得到稳定表达的细胞株，p21基因稳定转染并联合化疗药物应用可明显抑制7721细胞的体外增殖，细胞周期明显改变，细胞从G1期到G2期发生阻滞。结论提示转染外源p21基因联合化疗药物可使7721细胞周期阻滞于G1期，并可抑制肿瘤细胞增殖。