体外培养的肾母细胞瘤细胞株与正常胚肾细胞株差异蛋白的表达

目的 运用SELDI蛋白质芯片技术分析体外培养的肾母细胞瘤细胞株(G401)与正常胚肾细胞株(CCC-HEK-1)蛋白质表达差异.方法 在体外培养G401和CCC-HEK-1细胞株,收获细胞和培养液,将细胞用细胞裂解液裂解后,采用SELDI-TOF-MS技术用WCX2芯片检测G401和CCC-HEK-1的蛋白质谱差异.结果 体外培养的肾母细胞瘤细胞株与正常胚肾细胞株的蛋白质存在差异表达,WCX2芯片共发现差异峰19个,与CCC-HEK-1细胞相比,其中12个在肾母细胞瘤细胞株中高表达,7个差异蛋白在肾母细胞瘤细胞株中低表达.G401细胞裂解液与培养液的蛋白质表达差异峰19个,14个差异蛋白在G401细胞裂解液中高表达,5个在G401细胞裂解液中低表达;G401细胞裂解液与培养液的比较相似蛋白质为3个.结论 SELDI蛋白芯片技术检测肾母细胞瘤细胞株与正常胚肾细胞株蛋白质的差异表达方法简便,灵敏度高,重复性好.     

实时荧光定量PCR检测大肠癌腹腔微转移及其临床意义

[目的]应用实时荧光定量PCR技术检测大肠癌腹腔内游离癌细胞并探讨其临床意义。[方法]2003年5月至2004年1月，收集在日本爱知癌症中心手术81例大肠癌病例的腹腔冲洗液．每个样本的cDNA均应用两种引物合成（随机引物和寡核苷酸引物），并在罗氏实时荧光定量PCR（LightCyckr）上进行定量分析。每个样本同时进行常规细胞学检查。所有病例术后经过平均为1年的随访。[结果]CEA mRNA和CK-20 mRNA的阳性率和阳性值均与肿瘤的浸润深度（T）、分期以及淋巴结转移相关。在一个合理界定值上，CEA和CK-20检测的敏感度与特异度均为100％，而常规的细胞学检查则为33％和100％。[结论]CEA和CK-20 mRNA定量分析是检测大肠癌腹腔微转移的敏感和特异的方法，CEA和CK-20 mRNA水平的异常与术后的无瘤生存率显著相关。     

microRNA143表达对结肠癌组织中细胞增殖的影响及其作用机制

目的 探讨microRNA143(miR-143)表达对结肠肿瘤组织中细胞增殖和K-ras基因表达的影响.方法 采用Northern blot方法检测21例结肠癌组织和癌旁组织中miR-143的表达;构建miR-143的表达载体,将其转入人结肠癌细胞系SW480,用二苯基溴化四氮唑蓝(MTT)方法检测miR-143转染对细胞增殖的影响;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测K-rasmRNA和蛋白的表达变化.结果 在21例结肠癌组织标本中,有17例(81.0%)癌组织的miR-143表达水平低于癌旁组织.基因转染的SW480细胞中,miR-143表达水平显著升高,细胞增殖被抑制,K-ras蛋白的表达水平下降约40.3%,而K-ras mRNA水平未受影响.结论 miR-143在结肠癌组织中的表达明显低于癌旁组织,转染细胞中高表达的miR-143能够抑制细胞增殖,下调K-ras蛋白的表达.     

启动子区5''CpG岛去甲基化对人肠癌RKO细胞生物学表型的影响

目的:探讨DNA启动子区5'CpG岛甲基化状态与人肠癌RKO细胞生物学特征的关系.方法:应用特异性DNA甲基转移酶抑制剂-5-氮-2'-脱氧胞苷(5-Aza-2'-deoxycytidine,5-Aza-CdR)处理肠癌RKO细胞72小时,甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSP)及DNA测序法分析p16/CDKN2抑癌基因5'CpG岛甲基化状态;MTT、FCM、荧光染色及透射电镜检测启动子区去甲基化后对细胞生长、形态和细胞周期凋亡的影响.结果:肠癌RKO细胞p16/CDKN2基因5'CpG岛呈高甲基化状态;DNA甲基转移酶抑制剂(5-Aza-CdR)能较好地逆转启动子区胞嘧啶甲基化状态;CpG岛去甲基化后能明显地抑制肠癌细胞的生长,增加细胞群体倍增时间(P＜0.01),诱导肠癌细胞凋亡,并呈良好的量效依赖关系.结论:通过逆转CpG岛高甲基化能有效地抑制肠癌细胞增殖,为临床治疗大肠癌提供新的作用靶点.     

两个大肠癌负相关新基因的研究

目的在分子水平寻找与人大肠癌的发生发展相关的新的因素,研究两个大肠癌负相关基因的结构与功能。结果已完成两个新基因的全长cDNA序列分析及染色体定位等结构研究,并进行了两基因的核酸与蛋白表达研究及功能研究。SNC6基因全长3168pb,定位于染色体22q13区带,共有12个外显子及11个内含子。SNC19全长3152bp,定位于染色体11q24区带。两个基因于1998年被国际命名委员会分别命名为ST13、ST14基因,并被列入人类基因组图谱中。对比二个新基因在正常大肠粘膜及癌组织核酸水平表达情况,癌组织低于正常粘膜,在不同肿瘤细胞系及组织中表达不一。两基因均已获得了表达蛋白。ST13已制备了单抗,经免疫组化检测表达与核酸表达结果相似,经体内外研究ST13基因有抑制大肠癌细胞系生长的作用。ST14已明确为丝氨酸蛋白酶家族成员。结论 SNC6与SNC19基因可作为新的大肠癌相关基因加以研究,利用。目前仍需继续深入研究该两基因的功能。     

维生素K3对HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的:观察维生素K₃(VK₃)对HL-60细胞凋亡的诱导作用。方法:通过形态学、DNA电泳、Annexin V标记法检测VK₃作用后HL-60细胞的凋亡发生情况。结果:2、5、10、20 μmol/L的VK₃作用于HL-60细胞48h后凋亡发生率分别为8.76%、9.7%、18.54%、75.4%;10 μmol/L的VK₃作用于HL-60细胞24、48、72、96 h后凋亡发生率分别为11.35%、18.54%、21.22%、37.54%。结论:VK₃能诱导HL-60细胞发生凋亡,并具有一定的量效和时效关系。     

微囊化转mIL-12基因细胞介导荷瘤小鼠TH1/TH2的漂移

目的　观察微囊化mIL 1 2基因修饰的 (中国仓鼠卵巢 )CHO细胞皮下移植对荷瘤小鼠TH1 TH2 类细胞因子的影响 ,进一步了解外源性IL 1 2对TH1 TH2 平衡的调节作用 ,同时探讨微囊化基因工程细胞移植治疗恶性肿瘤的可行性。方法　将mIL 1 2基因转染到正常细胞CHO ,然后进行微囊化 ,移植到荷瘤小鼠的皮下。 2 0d后 ,测定小鼠血清TH1 和TH2 类细胞因子IFN γ、IL 2、IL 1 2和IL 4、IL 1 0的水平。结果　经微囊化mIL 1 2基因修饰的CHO细胞皮下移植干预治疗后 ,小鼠血清TH1 细胞因子IFN γ、IL 2、IL 1 2水平明显升高 (P <0 .0 5) ,而TH2 类细胞因子IL 4、IL 1 0则明显降低 (P <0 .0 5)。结论　外源性mIL 1 2促进荷瘤小鼠TH1 细胞的分化 ,使TH1 TH2 向着TH1 方向漂移 ;微囊化基因工程细胞的移植 ,有望替代基因工程药物 ,成为恶性肿瘤生物免疫治疗的平台     

脂质体介导的cripto反义寡核苷酸抑制结肠癌细胞端粒酶活性

目的：探讨cripto反义寡核苷酸（ASODN）对结肠癌细胞端粒酶活性的影响。 方法: 应用脂质体瞬时转染法介导cripto 反义寡核苷酸，处理人结肠癌细胞系后，分别采用实时定量PCR检测cripto mRNA表达，用TRAP检测端粒酶活性，采用软琼脂集落培养试验检测结肠癌细胞的生长。 结果: Cripto ASODN可有效抑制结肠癌细胞集落生长，且与浓度相关。结肠癌细胞经Cripto ASODN转染后，端粒酶活性明显受到抑制，呈作用浓度和时间依赖性。并与ASODN的浓度和处理时间有关。 结论: cripto基因可能参与对结肠癌细胞端粒酶活性的调控。     

血清蛋白质谱与人工神经网络模型诊断卵巢癌的应用性研究

目的 建立筛选卵巢癌血清蛋白质谱与人工神经网络诊断模型的研究。方法 用H4(疏水表面)蛋白芯片结合表面增强激光解吸电离飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)技术检测卵巢癌患者和健康人血清样本的蛋白质谱，同时采用人工神经网络筛选差异蛋白以建立诊断模型。结果 用SELDI-TOF-MS技术和H4蛋白芯片从47例卵巢癌和29名健康人血清中，筛选出4个有明显表达差异的蛋白，其质荷比(m／z)分别为5881、7553、6652和9391。用其中的18名健康人和29例卵巢癌患者样本作训练集和交叉验证后，再用筛选出的4个差异蛋白质建立人工神经网络预测模型。然后，对11名健康人和18例卵巢癌患者样本进行盲法测试，以验证该模型。结果显示，我们建立的诊断模型对卵巢癌检测的敏感性为100％，特异性为90．9％，阳性率为94．7％。结论 血清蛋白质谱与人工神经网络模型对小样本的卵巢癌诊断具有较高的敏感性和特异性，可扩大样本进行深入的应用性研究。