过氧化氢诱导肠上皮干细胞DNA氧化损伤模型的建立

目的：探索建立过氧化氢诱导肠上皮细胞DNA氧化损伤模型，以便在体外进一步研究DNA氧化损伤在大肠癌发生发展中的作用。方法：过氧化氢以RPM11640培养基稀释成100、50、10、5、μmol／L5个浓度，以RPMI1640培养荆作空白对照。作用人胎肠上皮干细胞不同时间（10min、30min、1h、1．5h、12h、24h）后，以MTT法检测细胞生存状况，以免疫组织化学方法检测DNA特异性氧化损伤产物8-羟-2-脱氧鸟苷（8-OhdG），用SPSS10．0软件以线性回归方法检验肠上皮干细胞在不同时间的生存率变化趋势。结果：MTT活性检测结果表明，在10～30min时，各浓度过氧化氢作用后的细胞活性较高，为60％～80％，但随时间推移，细胞活性下降，至24h，降至30％左右，时间趋势检验表明，除100、50μmol／L过氧化氢组和空白对照组外，其余各组的生存率随过氧化氢作用时间的延长，生存率下降，时间趋势差异具统计学意义。过氧化氢作用时间在10～30min内，100、50μmol／L组的细胞活性明显低于1～10μmol／L组20％左右，但在1．0h以上各组，虽然过氧化氢浓度不同，但在同一作用时间内细胞活性无明显差别。过氧化氢处理肠上皮细胞15min后进行8-OhdG免疫组织化学检测，结果除对照组阴性外，其余各组肠上皮细胞在不同浓度过氧化氢作用后的胞核及胞浆染色均呈棕褐色，为阳性。结论：过氧化氢能诱导肠上皮细胞发生DNA氧化损伤，肠上皮细胞DNA氧化损伤模型的条件以1～10μmol／L过氧化氢作用10～30min为宜。     

苦参碱对K562及其多药耐药细胞K562/Vin的细胞生物学影响

目的:探讨中药苦参碱对K562及其多药耐药细胞K562/Vin的细胞生物学作用及其抗肿瘤作用机制。方法:MTT法检测苦参碱对两细胞的半数抑制浓度(IC₅₀值)及其逆转K562/Vin细胞对长春新碱的耐药作用,并绘制细胞生长曲线变化。免疫组化方法测定细胞表面P-糖蛋白表达。光镜下观察细胞形态学改变,透射电镜下观察细胞结构变化。RT-PCR检测端粒酶基因hTERT-mRNA表达。结果:苦参碱对K562、K562/Vin细胞的IC₅₀值分别为3.4、4.6mmol·L ^-1。4.0mmol·L ^-1苦参碱可抑制两细胞的生长;2.0mmol·L ^-1苦参碱可降低K562/Vin细胞表面P-糖蛋白表达,增强长春新碱对K562/Vin的细胞毒性,其逆转耐药倍数为492.4倍。苦参碱作用后K562、K562/Vin细胞在光镜、电镜下均可见凋亡的形态学变化。苦参碱作用后K562细胞hTERT-mRNA表达受抑,并与药物作用浓度相关。结论:苦参碱可增强长春新碱对K562/Vin细胞的毒性,并诱导K562、K562/Vin细胞凋亡,同时可抑制K562细胞hTERT-mRNA表达,提示苦参碱可为一有效抗肿瘤药物。     

希罗达(R)一线治疗晚期或复发性结直肠癌

目的评价希罗达(R)一线治疗中国人晚期或复发性结直肠癌的疗效及安全性.方法60例晚期或复发性结直肠癌患者均给予希罗达(R)口服,每日2次,餐后服用,1250mg@(m2)@-1次-1,连续服用14 d后停药7 d.治疗周期为21 d,至少治疗2个周期.结果本组部分缓解(PR)14例,病情稳定(SD)24例,疾病进展(PD)15例,总有效率23.3%,中位生存期为14.7个月,1年生存率为63.9%,2年生存率为33.4%.Ⅲ、Ⅳ级不良反应主要为腹泻4例,贫血2例,手足综合征1例.Ⅰ、Ⅱ级不良反应为皮肤色素沉着20例,手足综合征18例,腹泻10例.结论希罗达(R)治疗中国人晚期或复发性结直肠癌疗效肯定,患者耐受性良好.     

随访队列的结直肠癌危险因素的病例-对照研究

目的研究环境暴露因素与结直肠癌发病的联系,为采取有效的预防措施提供科学依据.方法以嘉善结直肠癌筛检队列为研究人群,采用单纯随机抽样方法选择正常人对照343例,以及随访至今发生的结直肠癌存活病例126例,进行结直肠癌流行病学调查,并以非条件logistic回归法分析各因素与结直肠癌发生的关系.结果同事吸烟、粘液血便史、服用导泻药史、肠息肉史、乙肝史、家族结直肠癌史和常食动物油是结肠癌的危险因素,OR值依次为:4.87、28.84、13.00、7.68、6.98、5.55和2.41,香蕉 (OR=0.66)是保护因素;粘液血便史(OR=112.04),腺瘤史(OR=31.92),肠息肉史(OR=8.07),腹部手术史(OR=2.40),食用炸肉(OR=12.88),红烧鱼(OR=1.77),均为直肠癌的危险因子,常饮深井水(OR=0.32),常吃白菜、蘑菇、西瓜和爱吃白糖能显著降低直肠癌的风险,OR依次为:0.32、0.60、0.51、0.67和0.55.结论同事吸烟、粘液血便史、服用导泻药史、肠息肉史、乙肝史、家族结直肠癌史、和动物油、炸肉、红烧鱼、香蕉、白菜、蘑菇、西瓜等饮食与结直肠癌的发生有一定影响.     

血管内皮生长因子在胃癌血清中的表达意义

目的　探讨血管内皮生长因子 (vascular endothelial growth factor,VEGF)在胃癌患者血清中的含量与胃癌临床病理特征及预后监测的关系。方法　应用酶联免疫双抗夹心法 (EL ISA)定量检测 5 6例胃癌患者 (肿瘤组 )术前、术后及 31例术后随访胃癌患者血清中 VEGF含量 ,并同期检测 16例溃疡患者 (非肿瘤组 )及 4 5例健康人 (对照组 )血清 VEGF浓度。结果　肿瘤组血清 VEGF含量 (2 5 7.5± 10 7.3) pg/ ml明显高于溃疡组 (132 .0±5 6 .3) pg/ ml与正常对照组 (12 1.4± 4 2 .5 ) pg/ ml;三组 VEGF阳性率分别为 6 9.8%、2 5 .0 %和 11.1%。VEGF水平与胃癌的血管浸润、淋巴结受累及肝转移密切相关 ,且其含量随 TNM分期升高而增高 ,而与患者年龄、性别、肿瘤大小及组织分化等因素无关 ;术后随访的肿瘤复发 /转移者血清 VEGF与未复发 /转移者比较 ,则显著升高。结论　术前胃癌患者血清 VEGF表达水平是反映胃癌侵袭生长及转移潜能的生物学指标之一 ,对术后复发和预后的监测有一定的临床价值     

实时荧光定量RT-PCR检测乳腺癌患者外周血癌胚抗原mRNA表达的临床意义

目的分析乳腺癌患者外周血癌胚抗原(CEA)mRNA的表达及其与病理分期、区域淋巴结转移的关系,评价CEAmRNA对乳腺癌外周血微转移的特异性。方法采用实时荧光定量RT-PCR技术检测53例有明确临床病理资料的乳腺癌患者和16例良性乳腺疾病患者外周血CEAmRNA的表达。结果乳腺癌患者外周血CEAmRNA总阳性率为28.3%,阳性率随着分期的升高而升高(Ⅰ期12.5%,Ⅱ期22.2%,Ⅲ期44.4%,Ⅳ期44.4%),区域淋巴结转移者(23.1%)CEAmRNA阳性率高于无转移者(18.7%),但统计分析差异无显著性。良性乳腺疾病患者无一检测到CEAmRNA的表达。结论乳腺癌患者外周血CEAmRNA检测对外周血微转移具有一定的代表性,但尚无明显证据支持可以指导乳腺癌预后判断。     

经左锁骨下动脉途径导管药盒植入术（附28例分析）

目的 探讨经皮经左锁骨下动脉（ＳＣＡ）途径导管药盒（ＰＣＳ）植入术的方法学。方法 对２８例患者进行经皮经ＳＣＡ途径ＰＣＳ植入术。结果 ２８例患者中２５例（８９．３％）,植入ＰＣＳ成功,３例失败,发生并发症２例,结论 经皮经ＳＣＡ途径ＰＣＳ植入术提供一种创伤小,操作简单,安全,并发症少的动脉内持续间断药物治疗的途径。     

O-(氯乙酰-氨甲酰基)烟曲霉醇联合5-氟尿嘧啶对胃癌生长的抑制

目的　以了解和探讨血管生成抑制剂与传统化疗药物联合治疗的可行性及疗效为目的 ,研究血管生成抑制剂O (氯乙酰 氨甲酰基 )烟曲霉醇 (代号TNP 4 70 )联合 5 氟尿嘧啶 (5 FU)对人胃癌裸小鼠皮下瘤的作用。方法　将人胃癌细胞株SGC 790 1sc于32只裸小鼠 ,并随机分成 4组 ,TNP 4 70组 (5 0mg·kg- 1)、5 FU组 (30mg·kg- 1)、联合用药组 (TNP 4 705 0mg·kg- 1+ 5 FU 30mg·kg- 1)及对照组 (含 3%乙醇的 5 %阿拉伯胶 ,每只 0 .2mL) ,均隔日sc。观察皮下瘤长径及短径 ,4周后处死 ,取瘤组织行RT PCR检测VEGF16 5mRNA和免疫组化测定微血管密度 (MVD)。结果　 4周末TNP 4 70组、5 FU组及联合治疗组的抑瘤率分别为 69.7% ,86.7% ,98.8% ,3周末联合治疗组的瘤体积已小于两单一治疗组 (P <0 .0 5 ) ,提示联合治疗对皮下瘤生长的抑制作用明显优于各单一治疗。而各组间VEGF16 5mRNA表达无明显差异 (P >0 .0 5 )。TNP 4 70组、5 FU组、联合治疗组及对照组的MVD计数分别为 3.8± 0 .6,8.8± 4 .8,4 .8± 0 .4 ,8.8± 1.3,TNP 4 70组及联合治疗组的MVD明显较 5 FU治疗组及对照组减少 (P <0 .0 5 ) ;TNP 4 70与联合治疗组之间、5 FU与对照组之间MVD无差异 (P >0 .0 5 )。结论　血管生成抑制剂TNP 4 70与细胞毒     

浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的体外实验研究

目的：研究浙江蝮蛇毒诱导人白血病Jurkat细胞凋亡的作用及机理，方法：采用MTT法测定IC50值及生长曲线，流式细胞仪（FCM)Annexin Ⅴ FITC/PI法检测细胞凋亡发生率，PI染色法检测细胞周期，同时用流式细胞汁FCM及Western-blot检测Bcl-2蛋白表达。结果：浙江蝮蛇毒能抑制Jurkat细胞生长，且呈剂量依赖关系，并能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡，48h时作用最强，此时Bcl-2蛋白表达下降，随后此作用减弱，低浓度作用下细胞逐渐恢复生长，结论：浙江蝮蛇毒能诱导人白血病Jurkat细胞凋亡，且呈剂量依赖关系，此作用与Bcl-2蛋白表达下调有关。     

转染外源p53基因在荷瘤裸鼠人肠癌细胞中表达的检测

采用直接注射外源ＤＮＡ－脂质体复合物的方法分别在荷瘤裸鼠人肠癌组织中转染外源正义ｐ５３ｃＤＮＡ和反义ｐ５３ｃＤＮＡ的重组表达质粒及非整合型哺乳动物表达载体ｐＲＥＰ９，并以注射等量生理盐水为对照，然后应用链菌素亲生物蛋白－过氧化酶免疫组化法检测肿瘤组织中突变型ｐ５３蛋白的表达。结果表明：体外培养ＳＷ１１１６细胞中约有５０％为突变型ｐ５３蛋白阳性；转染反义ｐ５３ｃＤＮＡ表达质粒组的裸鼠移植瘤细胞ｐ５３蛋白阳性率为２５％，而注射生理盐水、转染ｐＲＥＰ９及正义ｐ５３ｃＤＮＡ表达质粒组阳性率分别为６６．７％，７７．８％，６６．７％；前者与后三者之间有显著住差异（Ｐ＜０．０１，Ｘ［２］检验），但各组间肿瘤大小并无显著性差异。据此认为，肿瘤体内直接转染外源反义ｐ５３基因能封闭肠癌ＳＷ１１１６细胞中突变型ｐ５３基因的表达。