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目的探讨EGFR和DEC1在肺腺癌中的表达及与临床特征的关系。方法采用免疫组织化学方法检测75例肺腺癌癌组织及癌旁组织EGFR和DEC1的表达。结果在癌组织中,EGFR胞膜上的表达为45.3%(34/75),DEC1胞核上的表达为54.7%(41/75),两者均与癌旁组织的表达有统计学差异(P<0.001);EGFR的表达与组织分化(P=0.033)、淋巴结转移(P=0.006)和远处转移(P=0.043)相关,DEC1与年龄(P=0.026)和肿瘤大小(P=0.047)相关。表达模式为EGFR+/DEC1+的肺腺癌患者比EGFR-/DEC1-的患者发生淋巴结转移的百分率高,两者有统计学差异(P=0.024)。结论 EGFR和DEC1蛋白的共表达可促进肺腺癌患者淋巴结转移。 相似文献
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背景:分化型胚胎软骨基因1可调控肿瘤生长、凋亡、衰老相关因子,与肿瘤的发生发展有着重要的联系。目的:构建针对人分化型胚胎软骨基因1的小干扰RNA表达载体。 方法:从NCBI中查找人分化型胚胎软骨基因1基因全长mRNA序列,利用Katahdin提供的在线小干扰 RNA模板序列设计软件,设计针对分化型胚胎软骨基因1的2条shRNA 的 DNA 模板单链,合成靶向分化型胚胎软骨基因1基因转录可形成茎环结构的寡聚核苷酸,退火后与酶切后的pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒连接,在JM-109菌株中扩增,并进行质粒DNA琼脂糖凝胶电泳分析、紫外分光光度计检测、菌落PCR以及测序鉴定。 结果与结论:将含有分化型胚胎软骨基因1目标序列25 bp 的双链 DNA插入片段,连接到pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒形成重组质粒。质粒DNA琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计分析结果确认所提质粒纯度较高,可用于后续实验。菌落PCR结果表明产物大小约为170 bp,与预期相符。测序结果表明pGreenPuro™ shRNA Cloning and Expression Lentivector质粒已经插入人分化型胚胎软骨基因1的干扰合成片段,无碱基突变。成功构建了靶向分化型胚胎软骨基因1-小干扰 RNA表达载体。 相似文献
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背景:RNA干扰技术的应用,关键在于能够采用1个有效的基因转移系统将小干扰RNA转入至靶细胞,目前广泛应用的是构建小干扰RNA表达载体.目的:利用AdMax腺病毒载体系统构建表达人甲胎蛋白-小干扰RNA的腺病毒载体.设计、时间及地点:开放性实验,于2007-03/10在山东大学附属济南市中心医院中心实验室完成.材料:穿梭质粒pDC316-EGFP-U6为本元正阳基因技术公司产品;AdMax KitD试剂盒与低代数HEK293细胞为Microbix Biosystems Inc.(Canada)公司产品.方法:选择针对甲胎蛋白 mRNA的特异性小干扰RNA靶序列,设计合成为相应的双链DNA,并将其与酶切线性化的pDC316-EGFP-U6载体片段连接,构建好的穿梭质粒pDC316-EGFP-U6-AFP-siRNA和腺病毒骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre共转染HEK293细胞,同源重组产生重组腺病毒.主要观察指标:对重组腺病毒进行聚合酶链反应鉴定及扩增、纯化、滴度测定.结果:构建的穿梭质粒载体经聚合酶链反应鉴定和测序分析,证实与设计一致.重组腺病毒Ad-AFP-siRNA经聚合酶链反应和绿色荧光蛋白表达检测证实构建成功,测定滴度为1.4×109 nfu/L.结论:实验成功构建了Ad-EGFP-U6-AFP-siRNA重组腺病毒. 相似文献
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目的 通过下调α5-烟碱型乙酰胆碱受体(α5-nAChR)的表达,体外研究尼古丁促肺癌细胞增殖过程中α5-nAChR对缺氧诱导因子(HIF-1α)表达的影响。方法 以不同浓度尼古丁作用人肺腺癌细胞株A549,分别采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测A549细胞中α5-nAChR、HIF-1α mRNA和蛋白的表达。MTT法、实时荧光定量PCR、Western blotting检测CHRNA5-siRNA转染后,尼古丁促A549细胞增殖的作用和HIF-1α表达的变化。结果 尼古丁浓度为1μmol/L时,α5-nAChR和HIF-1α表达明显升高(P<0.05),二者表达呈尼古丁浓度依赖性。CHRNA5-siRNA转染显著抑制α5-nAChR、HIF-1α表达(P<0.05),尼古丁促A549细胞增殖的作用明显受到抑制(P<0.05)。结论 α5-nAchR通过调节HIF-1α的表达,在尼古丁促肺癌细胞增殖中起作用,提示α5-nAChR/HIF-1α信号轴可能是吸烟相关性肺癌发生的重要分子机制之一。 相似文献
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目的:研究甲胎蛋白特异siRNA腺病毒载体对人甲胎蛋白阳性胃癌细胞FU97AFP基因的抑制作用,及抑制甲胎蛋白基因后对此肿瘤细胞周期及凋亡的影响.方法:利用构建好的腺病毒Ad-EGFP-U6-AFP-siRNA载体转染入FU97细胞,筛选出最佳感染复数.结果:筛选出最佳感染复数为:MOI=100;Ad-EGFP-U6-AFP-siRNA转染细胞后能显著抑制AFP基因在mRNA和蛋白水平的表达,G0/G1期细胞百分率[(33.49±1.85)%]明显低于空载体对照组和空白对照组[(64.76±2.98)%和(74.81±2.60)%,P<0.01],G2/S期[(64.10±2.59)%]显著高于空载体组和空白对照组[(34.77±1.91)%和(29.85±2.85)%],P<0.01;凋亡分析,实验组与各对照组之间凋亡发生差异无统计学意义,P>0.05.结论:重组腺病毒介导的RNA干扰能够显著抑制AFP在FU97中mRNA水平和蛋白水平的表达;抑制AFP后,影响细胞增殖周期,但对细胞凋亡无影响. 相似文献
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目的:探讨转录调节因子DEC1在人胃癌组织中的表达以及临床意义.方法:应用RT-PCR和蛋白质印迹法技术检测多种胃癌细胞株中DEC1的表达.运用免疫组化技术检测52例胃癌组织及10例癌旁胃黏膜组织中DEC1的表达.结果:在正常的胃黏膜上皮细胞株GES1及多种胃癌细胞株中均能检测到DEC1 mRNA的表达,但胃癌细胞株中(MKN28、SGC 7901、MGC 803和HGC27)的表达显著高于胃黏膜上皮细胞株GES1.蛋白质印迹法显示DEC1在蛋白水平的结果与前一致.DEC1在胃癌组织、癌旁胃黏膜组织中表达阳性率分别为55.77%、10.00%,DEC1蛋白的表达水平与胃癌的分化程度相关,P<0.05.与患者性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤类型、TNM分期和有无淋巴结转移均无关,P>0.05.结论:DEC1在各种类型的人胃癌细胞和胃癌组织中都有较高的表达,可能在胃癌的发生、发展中起重要的作用. 相似文献
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目的构建人分化型胚胎软骨发育基因DEC1真核表达载体,探讨DEC1基因对胃癌细胞增殖的影响。方法提取人胃癌细胞MGC-803总RNA,RT-PCR扩增获得DEC1基因,将DEC1基因插入pGEM-T载体,再插入真核表达质粒pcDNA3,将成功构建的pcDNA3-DEC1载体介导转染MGC-803细胞。通过RT-PCR和Westernblot分别检测转染后细胞DEC1在mRNA和蛋白水平的表达;MTT法、免疫细胞化学法检测过表达DEC1基因后MGC-803细胞增殖的变化。结果转染pcDNA3-DEC1质粒的MGC-803细胞DEC1 mRNA和蛋白水平明显升高(P<0.05);MTT试验、ki-67免疫细胞化学染色显示转染后细胞增殖能力明显升高(P<0.05)。结论 DEC1的过表达能明显增强胃癌细胞MGC-803的增殖能力。 相似文献
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目的研究三氧化二砷(As2O3)抑制AFP阳性胃癌(alpha-fetoprotein-producing gastric carcinoma.APGC)细胞株FU97增殖、诱导凋亡及其机制。方法MTT法检测药物效应;DNA凝胶电泳和流式细胞仪(FCM)检测细胞凋亡;化学发光法、实时荧光定量PCR及ELISA检测AFP、STAT3、VEGF表达变化。结果As2O3可明显抑制FU97细胞增殖,且呈时间和浓度依赖关系;DNA凝胶电泳显示出典型的凋亡特征性梯状条带;FCM检测在细胞周期G1期前出现亚二倍体凋亡峰;细胞周期分析显示G2/M期阻滞;化学发光法、免疫细胞化学法、实时荧光定量PCR以及ELISA结果证实As2O3可下调FU97细胞AFP、VEGF、STAT3基因的表达。结论As2O3可抑制FU97细胞的增殖、阻滞细胞周期进程诱导凋亡。同时通过下调AFP、VEGF、STAT3基因的表达阻止APGC的恶性进程。 相似文献