p16基因转染对肺癌细胞SPC-A1的抑制作用

目的　探讨抑癌基因p16对肺癌细胞SPC A1的抑制作用。方法　以Escort脂质体介导p16基因转染肺癌SPC A1细胞 ,MTS法测定OD值 ,计算细胞生长抑制率 ,描绘p16基因转染后SPC A1细胞增殖曲线。结果　p16基因转染对SPC A1细胞具有明显抑制作用 (P <0 0 5 ) ,细胞抑制率为 2 3 18% ,细胞增殖曲线较SPC A1细胞明显降低。紫杉醇对SPC A1细胞亦有明显抑制作用 ,抑制率为对 3 7 12 %。结论　p16基因转染对肺癌SPC A1细胞具有明显抑制作用     

益气温阳护卫法对哮喘大鼠GATA3_mRNA表达的影响

目的:探讨益气温阳护卫法对哮喘大鼠Th细胞异常分化相关分子基因表达影响。方法:50只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、益气温阳护卫组、地塞米松组和卡介菌多糖核酸组,每组10只。采用TaqMan Realtime PCR测定各组外周血单个核细胞(PBMC)中GATA3_mRNA的表达变化。结果:哮喘模型组PBMC中GATA3_mRNA表达显著高于正常对照组(P<0.01),益气温阳护卫组、地塞米松组和卡介菌多糖核酸组PBMC中GATA3_mRNA的表达显著低于哮喘模型组(P<0.01),且与正常对照组PBMC中GATA3_mRNA的表达相当。结论:益气温阳护卫法调节Th1/Th2细胞亚群趋于平衡可能是通过抑制哮喘大鼠GATA3_mRNA的表达实现,从而达到防治哮喘的作用。     

益气温阳护卫法对哮喘大鼠IL-12/STAT4信号途径的影响

目的：探讨益气温阳护卫法对哮喘大鼠白细胞介素12／信号传导子及转录激活子4（IL-12／STAT4）信号途径的调节作用。方法：50只SPF级雄性SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、益气温阳护卫组、地塞米松组和卡介菌多糖核酸组，每组10只。采用TaqMan Real time PCR测定哮喘大鼠Th细胞IL-12和STAT4的mRNA表达变化。结果：哮喘模型组IL-12和STAT4的mRNA表达显著低于正常对照组（P〈0．01），益气温阳护卫组、地塞米松组和卡介菌多糖核酸组PBMC中IL-12和STAT4的mRNA表达显著高于哮喘模型组（P〈0．01）且与正常对照组IL-12和STAT4的mRNA表达相当。结论：益气温阳护卫法调节哮喘大鼠Th1／Th2平衡的作用可能是通过上调IL-12／STAT4信号途径的基因表达实现。     

MeCP2特异性shRNA真核细胞表达质粒的构建与鉴定

目的构建MeCP2特异性SiRNA表达质粒pSilence-MeCP2。方法根据人MeCP2mRNA序列设计作用靶序列,化学合成两条互补的DNA寡核苷酸链,该序列中包含靶序列正义链、反义链,两者间的连接序列及与质粒相匹配的酶切位点序列,连接质粒后转化感受态细胞(E.Coli),使其在大肠杆菌内大量复制,提取质粒,PCR鉴定。结果合成的寡核苷酸序列与要求的序列完全相符,且以正确的方向插入。结论成功构建两个MeCP2特异性SiRNA表达质粒psilence-MeCP2/Ⅰ和psilence-MeCP2/Ⅱ。     

MeCP2特异性shRNA真核细胞表达质粒的构建与鉴定

目的构建MeCP2特异性SiRNA表达质粒pSilence-MeCP2.方法根据人MeCP2 mRNA序列设计作用靶序列,化学合成两条互补的DNA寡核苷酸链,该序列中包含靶序列正义链、反义链,两者间的连接序列及与质粒相匹配的酶切位点序列,连接质粒后转化感受态细胞(E.Coli),使其在大肠杆菌内大量复制,提取质粒,PCR鉴定.结果合成的寡核苷酸序列与要求的序列完全相符,且以正确的方向插入.结论成功构建两个MeCP2特异性SiRNA表达质粒psilence-MeCP2/I和psilence-MeCP2/Ⅱ.     

宫颈癌患者人乳头瘤病毒基因检测分型研究

目的 了解汕头地区宫颈癌患者人乳头瘤病毒(HPV)的感染率及基因分型分布情况,探讨HPV基因型与宫颈癌类型的相关性.方法 应用基因芯片技术检测23种HPV基因型.对2006年1月-2008年6月在我院住院并确诊的125例宫颈癌患者宫颈脱落细胞行HPV检测,并统计各基因型的感染率.结果 125例宫颈癌标本中HPV阳性116例,占92.8%.共检测出9种HPV基因型,分别为HPV6、11、16、18、31、33、45、58、59.其中单一低危型(HPV6、11)感染3例,占2.6%;单一高危型(HPV16、18、45、59)感染82例,占65.6%;双重感染22例,占17.6%;多重感染9例,占7.8%.HPV16为主要致病基因型,检出率达59.5%;其次是HPV18,检出率为19.8%.结论 汕头地区宫颈癌患者中,HPV基因型多样,且多为高危型感染,以HPV16、18最为常见,存在双重染感,宫颈鳞癌中HPV感染率明显高于宫颈腺癌,HPV基因分布与肿瘤类型有关.     

急性白血病患者WT1基因的表达及其意义

目的探讨急性白血病（AL）患者骨髓单个核细胞（BMMNC）WT1（Wilms＇tumor）基因的表达及其在AL患者微小残留病（MRD）的临床意义。方法采用半定量逆转聚合酶反应（RT-PCR）方法检测54例AL患者BMMNC WT1的表达水平，分析WT1表达与疗效关系，并与对照组检测结果进行比较。结果WT1阳性表达率：ANLL为48．4％，ALL为46．2％，两者比较，无显著性差异（P〉0．05）；完全缓解组（CR）及对照组WT1的表达均阴性，对初治时WT1阳性患者进行半定量分析：有效组WT1表达水平低于复发难治组（P〈0．05）；高表达组CR率显著低于低表达组（P〈0.05），两组复发率比较，无显著性差异（P〉0.05）。结论初治AL患者治疗前高水平表达CR率低、CR时间短、易复发；AL患者CR时WT1转阴，复发时再次升高，动态检测WT1的表达水平可在一定程度上了解疾病的状态和体内白血病细胞的总负荷量，对AL患者的化学治疗、预后判断及监测MRD、防治复发提供实验依据。     

汕头地区孕母产前血型抗体预测新生儿溶血病的研究

目的：探讨本地区ABO血型不合孕妇产前抗体效价检测在预测新生儿溶血病（HDN）中的意义。方法对536名血型不合的O型及Rh阴性孕妇在妊娠20周时进行血型不规则抗体筛选,抗体效价检测,效价≥64的定期（每4周）进行血型抗体效价复查检测,对新生儿出生后（0-7d）出现黄疸症状的抽静脉血3 ml进行血型血清学和溶血病三项检测。结果在536名孕妇血清中检出血型抗体303例,占56.5%,其中IgG抗体≥64者175例,占32.6%;,7名Rh阴性孕妇血清中产生抗D抗体3例,占0.6%;新生儿发生黄疸303例,诊断HDN 73例,占24.1%,接受治疗后均痊愈出院。结论汕头地区孕母产前血型抗体效价与新生儿溶血病密切相关,定期筛选与测定孕母体内血型抗体效价可预测HDN的发生,评估HDN的严重程度及提高HDN的治愈率。     

常染色体显性遗传性多囊肾病的基因诊断及其临床应用

常染色体显性遗传性多囊肾 (autosomaldominantpoly cystickidneydisease ,ADPKD)是人类最常见的单基因遗传病之一 ,发病率约为 1‰[1] 。本病通过常染色体显性方式遗传 ,男女发病率相等 ,外显率几乎 10 0 %。其主要临床特征是双侧肾脏形成多个液性囊泡 ,囊肿进行性长大 ,造成肾脏结构和功能的损害 ,最终可导致终末期肾衰。除肾脏外 ,还常伴有肝、胰、脑、心等多个器官受累。ADPKD属延迟显性遗传 ,一般在 4 0岁左右才出现临床症状 ,得以诊断。而此时患者多已将致病基因传给下一代。ADPKD目前尚无有效治疗方法。因此 ,产前和症状前基因…     

人MeCP2基因shRNA真核表达质粒的构建及鉴定

目的 构建针对人甲基化结合蛋白MeCP2的shRNA真核表达质粒,稳定转染肺腺癌细胞A-549观察其对MeCP2表达的影响.方法 根据MeCP2的mRNA序列,利用Ambion网上设计软件设计两条针对该基因不同靶点的shRNA干扰序列,克隆到线性化的质粒载体上,PCR、测序鉴定插入成功,且插入方向正确.转染A-549细胞,观察其在mRNA和蛋白水平对MeCP2的影响.结果 成功构建两个MeCP2的shRNA真核表达质粒,并稳定转染到肺癌细胞A-549中,两个真核表达质粒在mRNA水平和蛋白水平对MeCP2有明显的抑制作用.结论 人MeCP2的shRNA真核表达质粒成功构建及鉴定为进一步研究该蛋白的功能奠定了基础.