用兔IgG筛选噬菌体展示免疫球蛋白结合分子组合文库

目的 应用噬菌体展示免疫球蛋白(Ig)结合分子组合文库,进化筛选获得与兔IgG结合的代表性序列,测定其与兔IgG及人IgG结合活性的差异,以判断筛选获得的代表性序列对不同种属Ig的结合是否存在倾向性的差别.方法 应用包含Ig效应子结合蛋白Protein A的D结构域(PA-D)、A结构域(PA-A),Protein G的B2结构域(PG-B2)及protein L的B3结构域(PL-B3)的单结构域随机组合文库,以兔IgG对该组合文库进行进化筛选,序列比较分析筛选获得的代表性序列与人IgG进化筛选文库所得代表性序列的异同性;用ELISA和竞争抑制试验分别测定阳性噬菌体克隆与兔IgG及人IgG的结合活性.结果 以兔IgG经4轮分子进化筛选,获得在天然细菌蛋白中不存在的新的结构形式PA-A-PA-A,该结果与人IgG进化筛选所得代表性序列PA-A-PG有显著差异;兔IgG筛选序列PA-A-PA-A和人IgG筛选序列PA-A-PG分别显示出与兔Ig和人Ig结合力更强的特性.结论 该研究首次应用噬菌体展示技术研究不同种属抗体效应子构象的不同,证实兔IgG和人IgG两者效应子构象之间确实存在差异.这一结论有助于阐明抗体效应子构象在不同种属之间的差异性.     

王行宽以益肾补肝通督法论治颈椎病经验

介绍王行宽教授辨治益肾补肝通督法论治颈椎病经验。认为其病机为肝肾亏虚,筋骨失养,骨络瘀阻,督脉失利。治以补肝肾、益精气、活血通络与疏通督脉并举,强调治痹勿忘藤类、枝类、络类、虫类等通络药物。并举验案1则。     

噬菌体展示耐药突变HIV-1蛋白酶敏感切割位点六肽随机文库的构建

目的构建耐药性突变HIV-1蛋白酶(protease PR)敏感切割位点序列体外噬菌体筛选模型,研究HIV-1蛋白酶耐药性突变与敏感切割序列的关系。方法用含随机核苷酸序列的引物PCR方法对HIV-1gag基因上的CAP2片段的PR切割位点处的氨基酸序列进行随机化,再将重组CAP2片段和NC片段拼接克隆于噬菌体展示载体LD3-pCANT-AB5S上,建立HIV-1蛋白酶靶蛋白切割位点随机化的噬菌体展示文库。结果该噬菌体展示文库库容量为2.6×106,滴度为4.1×1015TU·L-1,CAP2片段插入率为47.8%;序列分析显示切割位点中随机化的核苷酸与氨基酸均呈随机性分布。结论成功地构建HIV-1蛋白酶的敏感切割序列噬菌体筛选文库,为筛选到突变PR敏感切割序列噬菌体及研究耐药HIV-1蛋白酶抑制剂与突变PR的关系打下基础。     

早孕因子对淋巴细胞增殖的影响

目的：探讨早孕因子（ＥＰＦ）活性物对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响及其在胎母免疫中的作用。方法：使用离子交换层析、亲和层析和凝胶过滤技术提纯３～６周孕妇血清中ＥＰＦ；用淋巴细胞转化法观察ＥＰＦ对淋巴细胞的作用。结果：ＥＰＦ活性物Ｇ４、Ｇ３及孕血清均能抑制淋巴细胞ＤＮＡ合成，尤以Ｇ４作用更为明显，并呈一定剂量依赖性。结论：ＥＰＦ可能在介导、调控妊娠早期诱导的免疫抑制，保证妊娠的持续中起重要作用     

孕妇血清提取物—早孕因子样物质的花结抑制活性测定

以花结抑制试验检测50名妊娠3～8周妇女静脉血混合血清及其经DEAE纤维素离子交换层折和经Sephadex-G-100凝胶过滤后,所得各阶段提取物的花抑滴度,并以HCG胶体金试剂盒测定HCG。对照组为50名处女混合血清,结果证明:混合孕血清经DE-52柱层析后未吸附蛋白部分(DE-I)及Sephadex-G100凝胶过滤后洗脱峰DE-I-GⅡ及DE-I-GⅢ均具花抑活性,DE-I-GⅡ为HCG( )而DE-I-GⅢ为HCG(-)°提示DE-I-GⅡ峰为EPF与HCG混合物,而DE-I-GⅢ峰为不含HCG而具花抑活性的EPF粗提物。     

两种抗弓形虫抗体的检测与临床应用

目的 探讨自然流产与弓形虫感染的关系。方法 用酶联免疫吸附试验检测了４９例自然流产妇女和７５例妊娠８个月以上的健康孕妇血清物异性ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体。结果 流产组ＩｇＧ和ＩｇＭ抗体阳性率（３４．７％）和（１８．４％）均明显高于健康对照组（９．３％和３．１％）,并随流产次数的增加,两种抗体阳性呈逐渐升高的趋势。另外,两种抗体阳性率还随患者年龄增加而逐渐增高。结论 弓形虫感染与孕妇流产有一定关系。ＩｇＭ     

围刺埋线配合体穴埋线治疗肛周湿疹163例分析

目的探讨围刺埋线配合体穴埋线在肛周湿疹治疗中的价值。方法总结163例采用局部围刺埋线配合体穴埋线治疗肛周湿疹患者的临床疗效及3个月后随访情况。结果痊愈147例,治愈率为90．18％,好转163例,有效率100％;3个月随访,复发3例,占1．84％。结论围刺埋线配合体穴埋线是治疗肛周湿疹的一种有效方法,近期疗效确切,疼痛少、疗程短、疗效佳,复发率低。可重复操作,具有很好的推广价值。     

肖振球教授治疗慢性泄泻经验

肖振球教授是广西中医学院第一附属医院教授、主任医师,中华中医药学会肛肠分会常务理事,广西中西医结合学会肛肠专业委员会主任委员,全国肛肠专业知名专家,广西名中医,擅长运用中西医结合疗法治疗各种肛肠疾病。泄泻是指大便次数增多,粪质稀薄为特征的症状。现临床上将泄泻症状持续或反复超过2个月者称为慢性泄泻。中医“久泻”、“大瘕泄”、“伏梁”等病症,西医许多消化道病变均可引起慢性泄泻,其病因复杂、病情反复、缠绵难愈。     

HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体的构建及在大肠杆菌中的高效表达

目的 构建HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区N端移位突变体,并在大肠杆菌E.coli B121(DE3)中进行高效表达和纯化.方法 应用PCR拼接的方法将首轮合成Tat基因的半胱氨酸富集区(64～111位核苷酸,22～37位氨基酸)移位至缺失半胱氨酸富集区的Tat(AC)的N末端,获得其突变体序列(Tat(CN)DNA),构建其原核表达质粒pET32a-Tat(CN),并转入大肠杆菌E.coli BL21(DE3)中进行诱导表达及纯化,经SDS-PAGE鉴定表达及纯化产物,纯化后的产物用间接ELISA进行鉴定.结果 构建了pET32a-Tat(cn)突变体,pET32a-Tat(CN)融合蛋白在大肠杆菌中表达水平为5.17 mg/nd,相对分子质量为31 ku.间接的ELISA结果表明,pET32a-Tat(CN)能与Tat兔抗血清呈特异反应.结论 成功构建了HIV-1 HXB2株Tat半胱氨酸富集区移位至TatN端的突变体,并能在大肠杆菌中高效表达,其纯化的蛋白pET32a-Tat(CN)很好地保留了与HIV-1 Tat兔抗血清的免疫反应性,为HIV-1 Tat的疫苗基础研究提供了一有价值的研究结论.     

应用正交设计优化天马颗粒剂配方的实验研究

目的优化天马颗粒剂的最佳配方。方法天马颗粒剂的17味药物按L20(217)正交表分为20组,并通过对20组大鼠灌胃获取含药血清。用5%、10%、20%含药血清分别对人大肠癌细胞HCT8、HCT116、HT29、COLO320、SW480、SW620干预24、48、72 h,CCK-8法检测细胞的吸光度,比较各组含药血清对细胞的增殖抑制率。结果经直接分析和方差分析,原方中蜈蚣、全蝎、半边莲、黄柏、三棱、大黄、胆南星、海藻、黄芪、山药均在大肠癌细胞的增殖抑制中发挥主要作用(均P0.05,P0.01),而其它药物则无明显作用(均P0.05)。结论根据正交设计优选天马颗粒剂的最佳配方为:蜈蚣、全蝎、半边莲、黄柏、三棱、大黄、胆南星、海藻、黄芪、山药。