Sky骨扩张器系统在经皮椎体后凸成形术中的初步临床应用

目的:探讨Sky骨扩张器系统在经皮椎体后凸成形术中应用的临床效果及手术操作要点。方法:对22例共29个椎体塌陷病变患者,应用Sky骨扩张器进行经皮穿刺、塌陷椎体扩张后注入骨水泥。随访观察患者疼痛视觉模拟评分(vasual analogue scale,VAS)及并发症情况。结果:29个椎体均单侧经椎弓根基底穿刺成功完成手术,手术时间每例35~85min,骨水泥注射量每个椎体5.3±1.2ml(3.0~7.6ml),分布均超过中线。骨水泥沿针道返流1个椎体,少量椎管内漏1个椎体,但均无临床症状;无其它并发症。所有患者疼痛缓解,VAS术前为9.2±1.8分,术后第3天为3.1±2.8分;随访1~3个月(平均2个月),随访时VAS为2.9±3.3分。5个椎体高度显著恢复。结论:Sky骨扩张器是经皮脊柱后凸成形术的新型器械,具有可控定向扩张特点,初步观察,安全有效。     

Lrtm1基因在成肌分化过程中的功能探索

目的：观察成肌分化过程中C2C12细胞Lrtm1表达;构建小鼠Lrtm1慢病毒过表达载体;筛选稳定表达外源Lrtm1细胞株诱导其分化后观察对成肌分化标志基因Myogenin、Myosin的影响;发现Lrtm1蛋白质表达水平受调控的机制。方法：诱导C2C12细胞分化用Hoechst染色细胞核;将小鼠Lrtm1基因连接到慢病毒载体质粒pLJM1-GFP上并进行慢病毒包装;筛选稳定过表达Lrtm1基因的C2C12细胞系,诱导分化Lrtm1-DDK组、GFP组检测对成肌分化标志基因Myogenin、Myosin表达的影响;MG132处理C2C12-Lrtm1-DDK细胞系后,观察内源性Lrtm1蛋白质表达。结果：诱导分化过程中,肌管形成,Lrmt1、Myosin mRNA水平随分化的进行表达上升;成功构建重组pLJM1-Lrtm1-DDK表达载体;成功筛选稳定表达外源Lrtm1细胞株;诱导稳定细胞系分化后,real-time PCR在144 h时显示Lrtm1-DDK组（272.1±18.22）Myogenin mRNA水平较GFP组（332.41±41.21）减少（P＜0.05）;Lrtm1-DDK组（76.11±10.47）Myogenin mRNA水平较GFP组（145.51±10.02）减少（P＜0.05）;C2C12细胞中Lrtm1蛋白质被蛋白酶体降解。结论：Lrtm1基因在成肌分化过程中高表达;过表达Lrtm1基因部分抑制了Myogenin、Myosin基因的表达;Lrtm1蛋白质表达水平受蛋白酶体降解调控。     

复方甘草酸苷对兔骨骼肌缺血再灌注损伤的影响

背景:甘草酸苷对缺血再灌注损伤保护作用的研究主要集中于心、肾、肠等器官,对骨骼肌的研究甚少.目的:验证复方甘草酸苷对兔骨髂肌缺血再灌注损伤的保护作用.设计、时间及地点:血清学及组织形态学水平的随机对照动物实验,于2008-02/09在重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室完成.材料:选用24只新两兰大白兔,按随机数字表法分为3组,即假手术组、模型组及复方甘草酸苷组,每组8只.方法:模型组动物制备右后肢骨骼肌缺血损伤模型,缺血4 h后再灌注24 h;复方甘草酸苷组动物缺血4 h后给予复方甘草酸苷20 mg/kg,再灌沣24 h:假手术组动物仅游离山股动脉不进行缺血,4 h后缝合切口并给予等量生理盐水.主要观察指标:观察肌肉损伤后甘草酸苷对血浆乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性及丙二醛浓度,肌组织髓过氧化物酶活性、湿质量/干质量比值及P-选择索mRNA表达水平的影响;光镜下观察骨骼肌的组织形态学改变.结果:假手术组的血浆肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性和丙二醛浓度显著低于缺血再灌注组及复方甘草睃苷组(P<0.05),复方甘草酸苷组显著低于缺血再灌注组(P< 0.01).假手术组的骨骼肌组织髓过氧化物酶活性和湿质量/干质量比值显著低于缺血再灌沣组及复方甘草酸苷组(P<0.01),复方甘草酸苷组显著低于缺血再灌注组(P<0.01).10倍镜下坏死肌纤维数缺血再灌注损伤组显著大于复方甘草酸苷组(P<0.05).骨骼肌组织中P-选择素mRNA表达水平假手术组显著低于缺血再灌注组(P<0.01),复方甘草酸苷组显著低于缺血再灌注组(P<0.05).结论:复方甘草酸苷对骨骼肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用.     

经皮穿刺椎体成形术骨水泥注射量与疗效关系的研究

目的　探讨经皮穿刺椎体成形术 (PVP)在治疗骨质疏松性椎体压缩骨折中的疗效 ,分析骨水泥注射量与疗效的关系。方法　 36例住院患者在C型臂X线机监控或CT定位下行PVP治疗。术后行X线片及CT检查并分析骨水泥在椎体内的分布情况。结果　 36例共穿刺成功 76个椎体。术前疼痛视觉模拟评分 (VAS)为 7 6± 1 4 ,术后 72hVAS为 3 7± 1 3,术后疼痛明显减轻 (P <0 0 0 1)。随访 8～ 13个月 ,未发现椎体进一步压缩及脊髓受压征象。结论　PVP治疗骨质疏松性椎体骨折疗效稳定 ,骨水泥注射量与疼痛缓解程度间不成比例关系     

人骨肉瘤耐阿霉素细胞模型的建立及其生物学特性

背景：多药耐药是骨肉瘤化疗失败的重要原因,目前其耐药机制不明。目的：诱导建立耐阿霉素的人骨肉瘤细胞株并观察多药耐药蛋白1、多药耐药相关蛋白1和肺耐药蛋白的表达。方法：采用逐步递增阿霉素浓度间歇作用的方法诱导143B/WT细胞株建立143B/阿霉素耐药细胞株。结果与结论：经阿霉素诱导45d建立了143B/阿霉素细胞株,其对阿霉素高度耐药,对顺铂、甲氨蝶呤、异环磷酰胺、长春新碱和紫杉醇亦产生不同程度交叉耐药;流式细胞仪检测显示与143B野生型细胞相比,143B/阿霉素细胞周期中G1和S期所占比例增加,而G2/M期所占比例明显减少;罗丹明外排实验显示,143B/阿霉素细胞药物外排能力显著高于143B/WT细胞（P〈0.01）;流式细胞仪和激光共聚焦显微镜观察发现,143B/阿霉素细胞阿霉素相关性细胞凋亡率显著低于143B/WT（P〈0.01）;Western blot检测显示143B/阿霉素细胞多药耐药蛋白1表达水平较143B/WT显著升高（P〈0.01）,二者多药耐药相关蛋白1和肺耐药蛋白表达差异无显著性意义（P〉0.05）。提示143B/阿霉素细胞多药耐药的产生与多药耐药蛋白1表达升高相关。     

骨形态发生蛋白9诱导骨骼肌源性干细胞的成骨分化

背景：已有实验报道部分骨形态发生蛋白能够诱导间充质干细胞等向成骨细胞的分化。目的：评估骨形态发生蛋白9定向诱导骨骼肌源性干细胞成骨分化的能力。方法：采用Ⅰ型胶原酶和胰蛋白酶二步消化法提取兔骨骼肌源性干细胞,用重组腺病毒的方法将骨形态发生蛋白9导入细胞,通过碱性磷酸酶定量测定、钙盐沉积实验观察骨形态发生蛋白9对于骨骼肌源性干细胞成骨分化的定向诱导作用。结果与结论：成功分离培养兔骨骼肌源性干细胞,免疫细胞化学染色80%以上的细胞呈Sca-1阳性。骨形态发生蛋白9能诱导骨骼肌源性干细胞碱性磷酸酶的表达,且能够促进细胞的钙盐沉积。提示,骨形态发生蛋白9具有定向诱导骨骼肌源性干细胞分化成骨的能力。     

经皮穿刺与传统开放椎弓根螺钉内固定术治疗胸腰椎骨折的 Meta 分析

目的：比较经皮穿刺与传统开放椎弓根螺钉内固定技术治疗胸腰椎骨折的疗效及安全性。方法采用 Cochrane 系统评价方法,计算机检索 PUBMED、OVID 和 Cochrane CENTRAL 外文数据库,符合入选标准的文献由2名评价者独立筛选及评估,采用 RevMan5．2．6软件进行 Meta 分析。结果7篇文献（共353例患者）被纳入分析,结果显示经皮穿刺较传统开放椎弓根螺钉内固定技术治疗胸腰椎骨折术中失血量（RR＝1．89,95％CI ：1．55～2．29）和手术时间（RR＝1．21,95％CI ：1．12～1．30）比较,差异有统计学意义（P ＜0．05）,且经皮穿刺组矫正矢状后凸角、改善椎体前缘高度与传统开放组比较,差异无统计学意义（P ＞0．05）。结论经皮穿刺及传统开放椎弓根螺钉内固定技术都是安全有效的治疗胸腰椎骨折的内固定方法,但是经皮穿刺相对于传统开放椎弓根螺钉内固定技术创伤更小、失血更少、手术时间更短。     

骨活素胶囊对骨质疏松性骨折愈合影响的实验研究

目的:探讨骨活素胶囊对骨质疏松性骨折愈合的影响.方法:8～12月龄雌性新西兰大耳兔卵巢去势法10周得到Ⅰ型骨质疏松模型,再行桡骨骨折造模,从而建立骨质疏松性骨折模型.模型建立后随机分为2组,实验组和对照组分别给予含1g/(kg·d)骨活素胶囊的生理盐水和淀粉糊5ml灌胃,在2、4、8周随机选取动物行影像学、血液生化指标、HE染色、增殖细胞核抗原(Proliferating cell nuclear antigen,PCNA)免疫组化和生物力学检测.结果:骨活素干预的实验组动物较对照组骨痂、骨小梁形成增多增快,骨痂力学强度增强.结论:骨活素胶囊能使骨质疏松性骨折的愈合时间缩短,强度增强.     

利用CRISPR/Cas9系统构建Lrtm1基因敲除的C2C12细胞系

目的：利用CRISPR/Cas9技术构建稳定敲除Lrtm1（leucine-rich repeats and transmenbrane domains 1）基因的C2C12细胞系,为研究Lrtm1基因的作用提供实验基础。方法：设计3对针对Lrtm1基因的向导RNA（sgRNA）,将sgRNA插入载体pCRISPR-LvSG06中;利用慢病毒包装系统包装含有sgRNA的重组质粒pCRISPR-LvSG06;将病毒感染C2C12细胞,并加入嘌呤霉素筛选,将筛选嘌呤霉素阳性的细胞提取RNA,逆转录成cDNA;设计Cas9引物,利用cDNA为模版,PCR验证C2C12细胞中Cas9的表达,确认慢病毒成功感染C2C12细胞;利用96孔板挑选单克隆细胞的方法筛选得到单克隆细胞;将扩增的单克隆细胞提取基因组DNA,测序Lrtm1基因相关序列并与野生型Lrtm1基因进行对比,确认敲除成功的克隆细胞株;诱导敲除Lrtm1稳定细胞株成肌分化,检测成肌分化标志因子Myosin的蛋白表达,RT-PCR检测转录因子PAX7的mRNA表达,Western blot检测H3K27me3蛋白水平。结果：测序结果显示向导RNA（sgRNA）成功插入载体质粒;将单克隆细胞DNA测序结果显示A和C克隆成功敲除Lrtm1基因;敲除Lrtm1基因后成肌分化标志因子Myosin蛋白表达降低,成肌转录因子PAX7 mRNA的表达降低,在分化72和96 h组,H3K27me3蛋白水平较野生型组增高。结论：利用CRISPR/Cas9技术成功敲除Lrtm1基因,稳定敲除Lrtm1基因的C2C12细胞系构建成功;敲除Lrtm1后能抑制C2C12细胞成肌分化,并且抑制成肌转录因子PAX7的mRNA表达,PAX7 mRNA表达降低的原因可能为H3K27me3水平增高。     

经皮椎体成形术及后凸成形术治疗骨质疏松性多椎体压缩骨折

目的 观察经皮椎体成形术及后凸成形术治疗骨质疏松性多椎体压缩性骨折的临床疗效.方法 根据患者的临床表现、影像学特征,对27例患者进行经皮椎体成形术或球囊扩张椎体后凸成形术.观察术后3 d和随访时的活动能力(MDS)、疼痛强度视觉模拟评分(VAS)较术前的改善情况.结果 27例均成功完成手术,术后疼痛基本消失,72 h后均离床活动,患者的视觉模拟评分(VAS)术后3 d(2.2±0.9),较术前(7.8±1.4)显著下降(P<0.01);随访时VAS为(1.5±1.0),较术后又有所下降.MDS术后3 d(1.0±0.8),较术前(2.4±1.2)显著下降(P<0.01);随访时为(1.0±0.9),与术后相当.术后随访5～12个月,腰痛无复发.结论 对于骨质疏松性多椎体压缩骨折的患者,根据骨折椎体的特征,行经皮椎体成形术结合后凸成形术,为患者降低一定的医疗费用,短期疗效满意,其长期疗效有待于进一步随访验证.