蛋白酶体抑制剂MG-132及其与顺铂联合应用对喉癌Hep-2细胞株的影响

目的研究蛋白酶体抑制剂MG-132对喉癌Hep-2细胞增殖和凋亡的影响,及其与顺铂(DDP)联合应用对喉癌细胞的毒性作用。方法以Hep-2细胞为实验对象,分别用0、1、2.5、5、10、20μmol/L的MG-132干预Hep-2细胞48h;另用2.5μmol/L MG-132分别干预细胞0、12、24、48、72h。将细胞分为4组:对照组(不做处理)、MG-132组(加入终浓度1μmol/L的MG-132)、单用DDP组(分别加入终浓度为10、20、40、80μmol/L的DDP)及MG-132+DDP组(加入1μmol/LMG-132和10、20、40、80μmol/L的DDP),各组干预细胞48h。利用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法、流式细胞术(FCM)检测细胞增殖抑制率及凋亡率的变化。结果MTT检测结果显示MG-132可有效抑制Hep-2细胞的增殖,呈浓度(r=0.944,P<0.01)及时间依赖性(r=0.945,P<0.01),48h时的半数抑制量(IC50)=2.50μmol/L;与单用DDP比较,MG-132联用DDP后对细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.05)。DDP的IC50由62.22μm...     

肿瘤坏死因子受体p55和p75在甲状腺癌组织中的表达及其意义

目的:研究肿瘤坏死因子受体(tumor necrosis factor receptor,TNFR)p55和p75在甲状腺癌组织中的表达及其与临床病理因素之间的关系,从而探索两型受体在甲状腺癌组织中的作用及意义.方法:应用免疫组织化学SP法检测41例甲状腺癌中TNFRp55和TNFRp75的表达情况,并以9例甲状腺腺瘤及7例腺瘤旁形态学正常的甲状腺组织作为对照.结果:①甲状腺癌组织中TNFRp55和TNFRp75的表达水平显著高于甲状腺腺瘤组及正常甲状腺组(P＜0.001),而它们在甲状腺腺瘤和正常甲状腺组织中的表达水平无显著性差异(P＞0.05).②两型受体的表达与甲状腺癌的组织学类型密切相关,在乳头状癌组织中的表达水平高于滤泡状癌组织(TNFRp55,P＜0.05;TNFRp75,P＜0.001);而与甲状腺癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、包膜是否受侵、淋巴结有无转移等临床病理因素无关.③在甲状腺癌组织中两型受体的表达呈正相关(r=0.77,P＜0.001).结论:TNFRp55和TNFRp75在甲状腺癌中协同高表达,参与了甲状腺癌的发生、发展过程.它们可以作为甲状腺癌诊断与鉴别诊断的病理学指标之一,但不能用来评估甲状腺癌的生物学行为及预后.     

肿瘤坏死因子受体2在喉鳞癌裸鼠模型中的表达及意义

目的:利用脂质体转染肿瘤坏死因子受体2(TNFR2)于喉鳞癌裸鼠模型中,探讨转染的最佳剂量及时间.方法:构建喉鳞癌裸鼠模型,将不同剂量TNFR2于不同时间转染至模型中,利用流式细胞术及免疫组织化学法测定TNFR2的表达.结果:鳞状细胞癌荷瘤裸鼠的瘤组织基本不表达TNFR2.转染TNFR2后,48 h蛋白表达达高峰,主要为细胞膜表达.给瘤体内转染5 μg TNFR2效果最佳,蛋白表达水平最高.结论:TNFR2的最佳转染剂量为5 μg,48 h可达高峰.此结果为喉鳞癌的基因治疗提供了依据.     

肿瘤坏死因子受体相关因子2在甲状腺癌中的表达

目的 研究肿瘤坏死因子受体相关因子2(tumor necrosis factor receptor associated factor2,TRAF2)在甲状腺癌组织中的表达情况及其与细胞凋亡之间的关系.方法 应用免疫组织化学SP法检测41例甲状腺癌(乳头状癌33例,滤泡状癌8例)以及9例甲状腺腺瘤中TRAF2的表达情况,并以7例腺瘤旁形态学正常的甲状腺组织作为对照;同时应用TUNEL检测细胞凋亡.结果 ①在正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤和甲状腺癌组织中TRAF2均有表达,表达阳性率(灰度值)分别为47.15%(125.03±14.91)、66.67%(116.11±12.67)和80.49%(105.11±10.9),表达程度呈明显上升趋势,灰度值经统计学分析表明TRAF2在癌组织中的表达显著高于在腺瘤及正常甲状腺组织中的表达(P均＜0.001),而在后两组间的表达程度无统计学差异;②在乳头状癌中的表达明显高于在滤泡状癌中的表达(P＜0.01);③在正常甲状腺及甲状腺腺瘤中均未检测到细胞凋亡,在甲状腺癌组织中有少量凋亡细胞,且凋亡与TRAF2的表达程度呈负相关(r=-0.49).结论 TRAF2在甲状腺癌中高表达,抑制癌细胞凋亡,可能是甲状腺癌细胞对TNF所诱导凋亡活性不敏感的重要原因之一.抑制TRAF2的产生或活性,可能为甲状腺癌,特别是乳头状甲状腺癌的临床治疗提供一个新靶点.     

喉癌Gli1的表达及其与VEGF表达关系的研究

目的:探讨喉癌Gl i 1蛋白的表达及其与临床病理因素以及VEGF表达之间的关系,为喉癌的诊断和治疗提供新方法和靶点。方法:采用免疫组织化学方法,检测Gl i 1和VEGF蛋白在10例喉癌旁黏膜组织和40例喉癌组织中的表达情况,对Gl i 1在喉癌中的表达与VEGF以及喉癌临床病理因素的关系进行统计分析。结果:癌旁喉黏膜Gl i 1蛋白阳性表达评分为(1.50±0.70),喉癌组织中Gl i 1蛋白表达阳性表达评分为(4.60±3.52),喉癌Gl i 1蛋白表达较癌旁黏膜显著增高,两者有极显著差异,P<0.01。结论:Gl i 1蛋白在喉鳞癌发生、发展以及侵袭与转移中有重要作用,其机制之一可能是促进VEGF表达。     

HIF-1α反义寡核苷酸对喉鳞状细胞癌hep-2细胞放疗的增效作用

目的：通过HIF-1α反义寡核苷酸转染hep-2细胞株,观察细胞凋亡及对放疗的反应情况。方法：体外培养人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株,脂质体介导反义寡核苷酸转染,6h后4Gy7射线照射。低氧培养24h后RT—PCR检测HIF-1α mRNA表达,流式细胞仪检测HIF-1α蛋白水平及细胞凋亡率,MTT检测细胞存活情况。结果：低氧使人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放射的敏感性下降;低氧并未影响HIF-1αmRNA的表达,HIF-1α蛋白在低氧6h时表达已开始升高,低氧36h时达高峰,之后表达逐渐下降;放射刺激对HIF-1α蛋白表达差异无统计学意义（P〉0．05）;各浓度的反义寡核苷酸转染组降低HIF-1α的转录及蛋白水平;MTT结果显示随反义核苷酸浓度增高,其增殖抑制效应越强（P〈0．05）,正义对照核苷酸及脂质体对照没有显著的抑制效应（P〉0、05）,但转染浓度在400nmol／L以上时,正义对照也表现出一定的增殖抑制作用（P〈0．05）;放疗后反义寡核苷酸转染组蛋白表达下降明显,较对照组及单纯放射组细胞凋亡率增加（P〈0．01）。结论：低氧环境下人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放射有抵抗作用,这种抵抗作用与低氧时HIF-1α蛋白表达上调有关,而放射本身并未上调HF-1α蛋白的表达;HIF-1α反义寡核苷酸转染hep-2细胞株能够降低HIF-1α蛋白表达,提高低氧环境下人喉鳞状细胞癌hep-2细胞株对放疗的敏感性。     

共刺激分子CD28、CD137在喉癌患者T淋巴细胞中的表达及其与细胞免疫功能失调的关系

目的探讨共刺激分子CD28、CD137与喉癌患者细胞免疫功能状况的关系。方法应用梯度离心法分离并纯化外周血和肿瘤浸润淋巴细胞（tumor infiltrating lymphocyte,TIL）,流式细胞术检测喉癌患者外周血T细胞CD8^＋、CD8^＋CD28^＋、CD8^＋CD28^-、CD28^＋细胞亚群分布和双香豆素（phytohemagglutinin,PHA）刺激前后患者外周血T细胞及TIL中CD137的表达。结果喉癌患者CD8^＋T细胞比率为（32.11±5.07）%,CD8^＋CD28^-T细胞比率为（21.03±5.69）%,均明显高于正常对照组（均P〈0.01）;CD28^＋T细胞比率为（45.53±4.51）%,CD8^＋CD28^＋T细胞比率为（12.70±3.41）%,均明显低于正常对照组（P均〈0.01）。CD137^＋T细胞活化增殖能力与CD28的阳性表达呈明显的正相关,喉癌患者外周血T细胞和TIL在未受PHA刺激时CD137^＋T细胞比率分别为（1.90±0.71）%和（3.52±1.64）%,明显高于正常对照组（P均〈0.01）。但经PHA刺激48小时后,外周血和TIL中CD137^＋-48h/CD137^＋-0h值为分11.48±4.03和10.39±3.02,均明显低于正常对照组,P均〈0.01。结论共刺激分子CD28在CD8^＋T细胞亚群中的表达失调使免疫效应性CD137^＋T细胞活化增殖能力下降,是引起喉癌患者细胞免疫功能紊乱的重要原因之一。 还原     

Skp2 siRNA表达载体构建及其对喉鳞状细胞癌细胞Skp2基因表达的抑制作用

目的:应用RNA干扰技术,构建针对Skp2的siRNA表达载体,抑制喉鳞状细胞癌细胞Skp2基因的表达。方法:根据设计siRNA的原则,针对人Skp2的mRNA序列,设计并合成编码siRNA的2条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆到真核表达载体pGPU6/Neo中构建重组体pGPU6Skp2,转化DH5α菌株,提取质粒进行酶切鉴定后,进行序列测定。然后转染重组质粒至Hep2细胞中,应用流式细胞术检测Skp2基因的表达。结果:将合成的DNA序列退火后克隆到载体上,经酶切和测序鉴定确实为所需序列。pGPU6Skp2转染细胞后,Skp2基因在蛋白水平的表达量受到明显抑制。结论:成功构建了针对人Skp2的siRNA表达载体,通过转染Hep2细胞,可有效抑制细胞Skp2的表达,为后续基因治疗研究奠定了实验基础。