蜗轴切除术后囊泡膜谷氨酸转运体阳性终末在豚鼠耳蜗核内的变化

目的研究豚鼠行单侧蜗轴切除术后双侧蜗神经核复合体内囊泡膜谷氨酸转运体（vesicular glutamate transporter．VGluTs）表达的变化情况,以明确VGluTs阳性终末在第一级听觉中枢中的分布情况及功能。方法将正常成年豚鼠行单侧内耳蜗轴切除术,手术前、后行听觉脑干诱发电位（ABR）检测,术后1周应用免疫组织化学染色ABC法观察双侧脑干蜗神经核内VGluTs阳性终末的分布及变化情况。结果正常豚鼠蜗神经前腹侧核、后腹侧核、背侧核内均可见丰富的VGluTl阳性终末分布,腹侧核内可见阳性终末环绕神经元胞体形成密切接触。VGluT2阳性终末主要分布于蜗神经背侧核中间层及腹侧核边缘小细胞壳区。豚鼠单侧蜗轴切除术后一周．手术同侧蜗神经腹侧核内VGluT1阳性终末几乎全部消失。与对侧及对照组蜗神经腹侧核对比鲜明。蜗神经核内VGluT2阳性终末在蜗轴切除术后一周未发现明显变化。结论蜗神经腹侧核内大量的Ⅰ型囊泡膜谷氨酸转运体（VGluT1）阳性终末起源于同侧耳蜗螺旋神经节：VGluT1是研究初级听觉传人通路中谷氨酸能神经元终末的良好标志;VGluT1和VGluT2在听觉传导系统及听觉中枢中的分布有差异,提示了功能上的不同。     

肽段在肿瘤治疗应用中的展望

近年来,随着组合化学（Combinatorial Chemistry)的发展,人们确定了许多肿瘤抗原及其优势决定簇,在此基础上设计的以小肽段为核心的肿瘤疫苗及治疗性药物,在体内外实验中取得了极大的成功,有些已经开始应用于临床。     

STAT3反义寡核苷酸联合放疗对喉癌Hep-2细胞周期的影响

目的 探讨STAT3反义寡核苷酸(STAT3 ASODN)联合放疗对人喉癌Hep-2细胞增殖及周期的影响.方法 体外培养Hep-2细胞,被STAT3 AS-ON转染后,将所有细胞分为放疗组与未放疗组,放疗组根据转染复合物的不同分为反义 放疗组、正义 放疗组及单纯放疗组(放疗对照组),未放疗组分为反义组、正义组及空白对照组;各组于37 ℃温箱内继续培养,放疗组Hep-2细胞于培养24 h后给予5 Gy 60Co γ射线照射后,与未放疗组再继续培养24 h,流式细胞术检测细胞周期情况.结果 反义 放疗组作用于Hep-2细胞后G0/G1期细胞比例(73.13±3.94)较正义 放疗组(55.39±2.69)及单纯放疗组(54.61±3.69)明显提高(P＜0.01),S期细胞比例(22.09±2.83)较正义 放疗组(30.60±2.27)及单纯放疗组(31.31±1.89)明显下降(P＜0.01);反义 放疗组增殖指数(PI值)(0.269±0.394)与正义 放疗组(0.446±0.269)及单纯放疗组(0.454±0.327)相比明显下降(P＜0.01).结论 STAT3 AS-ON联合γ射线作用于Hep-2细胞后,可以抑制G1-S期的转化,同时,细胞增殖抑制作用明显增强.     

XIAP反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞化疗增敏作用的研究

目的 通过X染色体连锁的凋亡抑制蛋白(XIAP)反义寡核苷酸(antisense oligonucleotides,ASODN)转染喉癌Hep-2细胞,探讨其对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡及化疗敏感性的影响.方法 体外培养人喉鳞状细胞癌Hep-2细胞,应用脂质体法进行XIAP ASODN基因转染,荧光显微镜下观察计算转...     

Stat3反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞放疗增敏作用的分子机制

目的 探讨Stat3反义寡核苷酸(antisense oligodnucleotides,ASODN)联合放疗对喉癌Hep-2细胞的作用及其机制.方法 Hep-2细胞株传代培养,分别进行以下处理:无处理、60Co照射5Gy、不同浓度Stat3 ASODN转染Hep-2细胞、不同浓度Stat3 ASODN转染联合放疗,倒置荧光显微镜下观察细胞形态学改变.结晶紫法检测各组作用24h后的细胞增殖抑制率.流式细胞学检测不同浓度Stat3 ASODN转染联合放疗后细胞周期的变化及不同浓度Stat3 ASODN转染组、200nmol/L Stat3 ASODN转染组联合放疗前后对Stat3、p-Stat3、cyclin D1、p21和cdk4蛋白表达的影响.结果 荧光显微镜下Stat3 ASODN转染联合放疗组细胞形态改变显著,出现明显的病变.对细胞增殖抑制的作用差异显著,与单纯放疗和单纯ASODN转染组相比差异具有统计学意义(P＜0.01).流式细胞学检测显示:随着Stat3 ASODN转染浓度的增加,Hep-2细胞G0/G1期比例上升,S期比例下降;Stat3、p-Stat3及cyclin D1、cdk4蛋白荧光指数呈一致性降低趋势,而p21蛋白荧光指数呈升高趋势,其中Stat3、p-Stat3、p21蛋白表达组间差别具有统计学意义(P＜0.05).Pearson相关性分析结果 显示:Stat3与p-Stat3呈显著正相关(r=0.986,P＜0.01)、与cdk4呈显著正相关(r=0.910,P＜0.05),与p21呈负相关(r=-0.981,P＜0.05);p-Stat3与cdk4呈正相关(r=0.949,P＜0.05),与p21呈负相关(r=-0.917,P＜0.05);p21与cdk4之间呈现一定的负相关性(r=-0.973,P＜0.01);细胞抑制率的变化与Stat3、p-Stat3蛋白荧光指数的变化呈负相关(r=-0.989、r=-0.971,P＜0.01).结论 Stat3 ASODN转染喉癌Hep-2细胞,通过下调Stat3蛋白的表达而对细胞周期蛋白进行调控,从而引起细胞周期分布的改变,达到增强放疗敏感性的作用.     

免疫磁珠分选与顺铂富集喉癌Hep-2细胞系中肿瘤干细胞的比较

目的比较免疫磁珠分选（MACS）及化疗药物顺铂（DDP）筛选富集喉癌Hep-2细胞系肿瘤干细胞的效果。方法以CD133MACS、DDP作用两种方法来富集喉癌Hep-2细胞系中的肿瘤干细胞,并以流式细胞术（FCM）检测处理后CD133^＋细胞的百分率。同时观察细胞形态学的改变,判断两种方法分选后细胞对后续实验的影响。结果经FCM检测,MACS分选喉癌Hep-2,CD133^＋细胞得率为64．33％,不同浓度DDP作用于喉癌Hep-2细胞48h,FCM检测CD133^＋细胞有不同的得率,其中质量浓度为4μg／ml时,所得CD133^＋≥细胞百分率最高,为50．7％。MACS与DDP各组比较差异均有统计学意义（P〈0．01）;两种方法处理后MACS组细胞的存活状态要好于DDP组。结论MACS分选纯度较高,对细胞损伤小,适合后续培养;但分选前耗时长,每次分选仅能用于一种Marker。DDP筛选简单易行,符合临床肿瘤干细胞（CSC）抵抗化疗的模式。但阳性细胞得率与细胞毒性成正比。MACS和DDP筛选肿瘤干细胞各有其优势及适用范围,实验中可根据不同目的来确定所用筛选方法。     

STAT3反义寡核苷酸联合放疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察STAT3反义寡核苷酸(STAT3 AS-ON)联合放疗对喉癌Hep-2细胞增殖、凋亡的影响.方法:体外培养Hep-2细胞,应用STAT3 AS-ON转染Hep-2细胞后,将培养细胞按是否进行放疗分为未放疗组与放疗组,未放疗组根据转染复合物的不同分为反义组、正义组及空白对照组,而放疗组分为反义+放疗组、正义+放疗组及放疗对照组.根据转染复合物的浓度(100、200、400 nmol/L)又将对应各组分为反义100、反义200、反义400、正义100、正义200、正义400组.其中放疗组Hep-2细胞给予γ射线(5 Gy)照射.MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡率.结果:反义+放疗组的细胞存活率明显低于正义+放疗组和放疗对照组(P＜0.01),且随着STAT3 AS-ON转染浓度的增加而降低,反义+放疗组的细胞凋亡率明显高于正义+放疗组和放疗对照组(P＜0.01),而正义+放疗组和放疗对照组相比差异无显著性意义(P＞0.05).结论:STAT3 AS-ON联合γ射线作用于Hep-2细胞后,细胞增殖抑制和诱导凋亡作用明显增强,表明选择性阻断细胞内STAT3信号转导通路联合放疗可能为喉癌的综合治疗提供新的途径.     

Survivin反义寡核苷酸对喉癌Hep-2细胞放疗的增敏作用

目的探讨SUrvivin在放疗诱导喉癌细胞凋亡中的作用以及Survivin反义寡核苷酸（antisenseoligonucleotide,ASODN）技术对HeP-2细胞株增殖、凋亡及其放疗敏感性的影响。方法人工合成硫代SurvivinASODN,通过脂质体法转染人喉鳞状细胞癌Hep一2细胞株后,采用：①流式细胞法测定SurvivinASODN转染Hep一2细胞的转染率;②RT-PCR法检测基因转染后SurvivinmRNA的表达情况变化;③流式细胞仪检测射线照射后细胞凋亡率及Survivin蛋白的变化。结果①各浓度带FITC标记的SurvivinASODN转染细胞后6小时,取转染细胞制成的单细胞悬液,于流式细胞仪进行检查,发现转染效率均为94％～98％;②各浓度SurvivinASODN作用于Hep-2细胞24小时后,均出现SurvivinmRNA的表达下调,并呈剂量依赖关系,同时伴有细胞凋亡率的升高;③放疗~DSurvivinASODN转染组细胞凋亡率均显著高于单纯放疗组细胞凋亡率（P〈0．05）,随着SurvivinASODN剂量的增加,细胞凋亡率逐渐增加（P〈O．01）。放疗加ASODN转染组细胞Survivin蛋白表达率低于单纯放疗各组细胞Survivin蛋白表达率（P〈0．05）。各实验组与对照组中凋亡率的变化与Survivin蛋白荧光指数的变化呈负相关。结论喉癌细胞对放疗的抵抗作用与Survivin蛋白的表达水平有关,Survivin反义寡核苷酸转染Hep-2细胞株能够提高细胞对放疗的敏感性。     

抗生育剂量雷公藤糖浆对小鼠细胞免疫功能的影响

抗生育剂量雷公藤糖浆对小鼠细胞免疫功能的影响①路秀英贾太和李彬徐铮修贺明孙辉臣（白求恩国际和平医院，石家庄０５００８２）①本课题受国家计划生育委员会资助作者简介：路秀英，女，３１岁，医师，硕士中药雷公藤对男性生殖功能有明显抑制作用，停药后生育力有可复...