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目的 为进一步研究临床应用癌-睾丸抗原GAGE-1诱导特异性抗肿瘤免疫反应,对GAGE-1基因进行克隆、体外原核重组表达及蛋白分离纯化。方法 运用RT-PCR技术从人QGY-7701肝癌细胞株中扩增GAGE-1基因片段,插入原核表达载体pGEX-6p-1中,构建重组表达质粒pGEX-6p-1-GAGE-1,并导入大肠杆菌BL21,IPTG诱导目的蛋白表达;经包涵体透析复性及GST柱亲和层析纯化目的蛋白,SDS-PAGE电泳分析鉴定。结果 扩增得到GAGE-1基因5’端251 bp片段,与GeneBank公布的序列一致,构建的PGEX-6p-1-GAGE-1原核表达质粒经IPTG诱导,在大肠杆菌中表达分子量约35.7 kD的GST-GAGE-1融合蛋白,纯化后蛋白纯度为90%以上。结论 成功构建PGEX-6p-1-GAGE-1重组表达质粒,并成功表达纯化了GST-GAGE-1融合蛋白,为进一步深入研究GAGE蛋白奠定了基础。 相似文献
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目的观察肝癌相关抗原kineetin基因重组蛋白(kinectln—MBP)致敏的树突状细胞(DC)对T细胞增殖活化能力的影响。方法从正常人外周血中分离单个核细胞,用rhGM—CSF、rhIL-4联合诱导扩增DC;用kinectin-MBP(kinectin—MBP组)、麦芽糖结合蛋白(MBP组)分别致敏DC,对照组不处理。采用ELISA法检测细胞上清液中的IL-12、IFN-γ,MTT法检测各组DC刺激自体T淋巴细胞增殖的能力。结果kinectin—MBP组上清液中IL-12、IFN-γ含量分别为(615.32±7.93)、(544.28±7.17)pg/ml,MBP组分别为(382.13±5.21)、(308.46±6.44)pg/ml对照组组分别为(299.40±10.22)、(228.03±6.70)pg/ml,三组相比,P均〈0.05。kinectin—MBP组T淋巴细胞增殖指数为53.14±0.62,MBP组为22.14±0.31,对照组为10.86±0.65,三组相比,P均〈0.001。结论体外诱导扩增的DC经kinectin-MBP致敏后具有很强的刺激自体T细胞增殖的能力。 相似文献
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肝细胞癌动力素抗体的血清学分析 总被引:3,自引:0,他引:3
运用重组克隆抗原表达的血清学鉴定 (SEREX)技术[1] ,我们曾报道从广西肝细胞癌 (HCC)患者血清中筛选出系列相关抗原 ,其中一种抗原与人类动力素 (kinectin)结构同源[2 4] 。本研究进一步检测HCC患者和正常人血清中的动力素抗体 ,以了解动力素抗体在HCC患者血清中出现的意义。一、材料与方法取病理确诊的 32例HCC患者 (来自广西医科大学附属第一医院外科 )及经体检证明的 5 0例健康者 (来自广西医科大学学生 )血清。无外源基因插入的λ噬菌体转染大肠杆菌 ,硝酸纤维素膜印迹噬菌斑 ;将 1∶4 0 0稀释的HCC患者和正常人血清浸泡于印… 相似文献
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肿瘤是严重威胁人类健康的疾病之一, 其诊断和治疗一直是人们关注的焦点.近年来, 肿瘤的发病率和死亡率呈明显上升趋势, 传统的治疗方法仍存在各种问题, 故寻找新的诊疗手段已势在必行.目前, 肿瘤免疫治疗已经成为该研究领域的热点之一. 相似文献
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目的:研究热休克蛋白90 (heat shock protein 90,HSP90)抑制剂格尔德霉素(geldanamycin,GA)对人肝癌细胞株BEL7404的凋亡作用,并探讨其用于肝癌治疗的可行性.方法:体外培养BEL7404细胞株,以GA作用处理;噻唑兰比色(MTT)法检测GA对BEL7404细胞株的增殖抑制作用;吖啶橙荧光染色法及Annexin V-EGFP/PI双染法、透射电镜等方法研究GA对BEL7404细胞株的凋亡作用;流式细胞仪检测BEL7404细胞株的细胞周期变化.结果:GA对BEL7404细胞株具有增殖抑制作用,呈时间剂量依赖关系;GA各剂量组作用24 h凋亡率均明显高于阴性对照组(6.31±0.82)%;流式细胞仪检测各剂量组GA均可使BEL7404细胞株细胞周期阻滞于G0/G1期.结论:抑制HSP90的功能可引起肝癌细胞增殖抑制和凋亡,HSP90有可能成为肝癌治疗的新靶点. 相似文献
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目的观察胸腔镜下单操作孔手术与开胸手术治疗原发性自发性气胸(PSP)伴肺大疱形成的效果。
方法通过回顾性收集2008年1月至2015年12月52例PSP伴肺大疱形成患者分成两组,A组30例[电视胸腔镜(VATS)下单操作孔肺大疱切除术],B组22例(常规开胸手术),比较两组的住院时间、术前和术后的血气分析[动脉血氧分压(PaO2)、动脉血二氧化碳分压(PaCO2)]、术后胸腔积液、胸顶残气、漏气、肺不张、肺部感染、术后复发等相关并发症。
结果与B组比较,A组的住院时间(t=1.312,P=0.036)、术后血气分析PaO2(t=60.206,P=0.038)、PaCO2(t=32.025,P=0.009)、胸腔积液(t=2.035,P=0.042)、肺部感染(t=1.095,P=0.041)差异有统计学意义(P< 0.05),治疗效果A组明显优于B组;与B组比较,A组的术后胸顶残气、漏气、肺不张、术后复发,差异无统计学意义(P> 0.05)。
结论采用VATS下单操作孔肺大疱切除术治疗PSP安全、有效,具有创伤小,并发症少,优于常规开胸手术治疗,能够在最短时间治愈PSP。早期VATS下单操作孔肺大疱切除术治疗PSP可作为优先治疗,具有可能性、必要性,具有较高的临床应用价值。 相似文献
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