基于UPLC/Q-TOF MS/MS的稳心颗粒主要成分分析及鉴定

[目的]采用超高效液相色谱-四级杆-飞行时间质谱(UPLC/Q-TOF MS/MS)技术,对稳心颗粒中的化学成分进行初步分析。[方法]采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),以乙腈-水(含体积比0.1%甲酸)为流动相梯度洗脱,流速为0.3 mL/min,电喷雾电离源,正/负离子双模式检测,通过UPLC/Q-TOF MS/MS所得到的化合物分子量以及MS/MS碰撞解离碎片,结合文献报道,对稳心颗粒的主要化学成分进行分析鉴定。[结果]结合文献报道和一级MS、二级MS/MS高分辨质谱数据,对其中68个化合物进行了初步鉴定,结果显示,稳心颗粒成分以糖类、皂苷类、黄酮类为主,其中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1丰度较高。[结论] UPLC/Q-TOF MS/MS技术是鉴定中药复方成分的有效手段,本研究首次利用该技术对稳心颗粒的主要成分进行定性分析,为阐明该复方药效物质基础、探讨其作用机制及其质量控制提供了有效的科学依据。     

体外培养恒河猴外周血单核巨噬细胞的研究

目的：建立一种简单、经济、高效地培养恒河猴外周血单核巨噬细胞（monocyte-derived macrophage,MDM）的方法。方法：用肝素钠抗凝管采集健康成年中国恒河猴（Macaca mulatta）全血,密度梯度离心法分离外周血单核细胞（peripheral blood mononuclear cells, PBMCs）。同时用无抗凝剂采血管采集同一只猴外周血,自凝后分离血清。将猴PBMCs置于CELLBIND Surface的96孔（0.8×106个细胞/孔）或48孔培养板（3×106个细胞/孔）中,用含不同百分比的猴自体血清或胎牛血清（fetal calf serum,FCS）的RPMI 1640培养液培养24h后洗弃未贴壁细胞,加入含有猴自体血清或FCS的新鲜培养基继续培养7天后观察细胞形态学。分化良好的猴单核巨噬细胞贴壁能力强,占据板底大部分区域。胞体形态多样,多数呈长梭形。用巨噬细胞标记受体（CD14）抗体染色判断细胞纯度。并用细菌内毒素（LPS）刺激分化的巨噬细胞,检测巨噬细胞炎性因子的表达。此外,用猴艾滋病毒（SIVmac17E-Br、SIVmac251）和人-猴嵌合体艾滋病毒（SHIV KU-1）感染分化良好的猴巨噬细胞,检测病毒在猴巨噬细胞中的复制。结果：在含2%猴自体血清的RPMI 1640培养条件下,大多数（>85%）猴单核细胞能在24h内贴壁,体外分化5-7天后,猴巨噬细胞纯度大于96%。相比而言,含较高浓度（4%,8%或10%）猴自体血清或FCS的RPMI 1640 培养基对猴单核细胞的贴壁和分化作用较差。分化良好的猴巨噬细胞对LPS刺激敏感,可产生多种巨噬细胞炎性因子。此外,这些细胞对SIV或SHIV均易感,产生感染性病毒。结论：含2%猴自体血清的RPMI 1640培养基适于原代猴单核细胞的贴壁和分化。该方法简单、花费少,无需生长因子,且分化效果好,是培养猴艾滋病毒及开展相关免疫学实验的重要手段。     

中枢毒蕈碱受体对大鼠迷走神经传出放电活性的影响

目的 探讨中枢毒蕈碱受体(M 受体)对大鼠迷走神经传出放电活性的影响.方法 取健康成年雄性SD 大鼠,随机分为6 组(每组6 只):加兰他敏组、中枢M 受体拮抗组、新斯的明腹腔组、新斯的明侧脑室组、M1 受体激动组及M2 受体拮抗组.将迷走神经放电信号引导至BL-420F生理仪持续记录,其中采样速率1 kHz/s,滤波范围100~1 000 Hz.稳定记录神经放电信号10 min(作为基础值)后,按照上述分组注射相应药物,并持续记录迷走神经传出放电活性60 min.整个放电观察周期内,每隔10 min 为时间点,记录放电频率和峰值,并进行统计学处理.结果 传出放电频率于加兰他敏注射后17 min 开始明显增加,持续至观察期结束.期间最高值为(516±40)Hz,最低值为(249±26)Hz,与给药前相比差异均有统计学意义(P<0.05).腹腔注射加兰他敏前给予硫酸阿托品干预处理后,各时间点放电频率和峰值与给药前比较无明显改变(P>0.05),放电图内仅观察到散在爆发电位.腹腔注射新斯的明前10 min 内观察,迷走神经传出放电频率和峰值记录无明显变化(P>0.05).侧脑室注射新斯的明前10 min 内观察,放电频率和峰值无明显变化(P<0.05).放电频率于新斯的明注射后13 min 开始明显增加,持续至观察期结束,与给药前相比差异均有统计学意义(P<0.05).侧脑室注射MCN-A-343 前10 min 内观察,放电频率和峰值记录无明显变化.放电频率于MCN-A-343 注射后12 min 开始明显增加,持续至观察期结束,与给药前相比差异均有统计学意义(P<0.05).侧脑室注射美索曲明前10 min 内观察,迷走神经传出放电频率和峰值无明显变化,注射美索曲明后8 min左右,放电峰值显著增加,持续48 min 后回落至注射药物前水平,期间各时间点,与给药前相比差异均有统计学意义(P<0.05).放电频率于美索曲明注射后17 min 开始明显增加,持续至观察期结束.与给药前相比差异均有统计学意义(P<0.05).结论 通过抑制中枢胆碱酯酶而提高乙酰胆碱含量,可增强迷走神经的传出活性;此过程可能是由中枢M1 受体介导的;而中枢M2 受体则可能抑制迷走神经传出活性.     

手术治疗前跗管综合征8例

2004年9月～2008年8月,我院对8例前跗管综合征患者行手术治疗,报道如下. 1 材料与方法 1.1 病例资料本组8例,男7例,女1例,年龄19～51岁.     

免钉合、双网片交叠腹腔镜完全腹膜外疝修补治疗腹股沟疝

腹腔镜完全腹膜外疝修补（TEP）复发率低、恢复快，是目前腹腔镜腹股沟疝修补的主流术式。手术时钉合固定植入的网片、防止网片移位被认为是防止术后复发的关键操作，但机械钉合可导致神经损伤、腹股沟区顽固性神经性疼痛及其他严重并发症。对此，我们在总结本中心150余例TEP手术的基础上设计了免钉合、网片交叠腹腔镜完全腹膜外疝修补手术，成功进行了22例，取得了满意的近期效果，现报告如下。[第一段]     

X-线引导下胃造瘘术在晚期食管癌患者中的临床应用

目的探讨X-线引导下胃造瘘术在治疗晚期食管癌中临床意义。方法分析笔者收治的15例晚期食管癌患者行X-线引导胃造瘘术的临床资料。结果 15例均一次顺利完成操作,用时约5～10 min。术后出现造瘘管周渗血1例,术后出现造瘘口感染3例,均经及时处理后治愈;患者均未出现严重发症。结论 X-线引导下胃造瘘术具有简单、方便、安全性高、并发症少的特点,可作为失去手术机会的晚期食管癌患者行胃肠道营养的途径。     

低位负压吸引提高经皮肾镜取石术效率的临床研究

目的探讨低位负压吸引超声碎石清石系统在肾结石治疗中的临床应用价值。方法25例。肾结石患者随机分成2组,对照组15例采用EMS三代超声碎石清石系统进行经皮肾镜碎石术,改良组10例采用低位负压吸引超声碎石清石系统进行经皮。肾镜碎石术。对两组清石时间、术中出血量、结石清除率、出血、感染和住院天数等进行比较分析。结果两组患者均顺利完成手术,无1例穿刺失败或中转开放手术。改良组清石时间（开始碎石取石到取石结束）、术中出血量明显少于对照组（P〈0．05）。而两组患者的结石清除率、出血和感染等并发症、住院天数差别无显著性（P〉0．05）。结论低位负压吸引超声碎石清石系统可以提高清石效率,减少清石时间及手术时间。     

理筋手法联合中药熏洗技术治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效研讨

目的探讨采用理筋手法配合中药熏洗技术治疗膝关节骨性关节炎的临床疗效。方法将符合诊断的膝关节骨性关节炎患者36例分别纳入治疗组(n=18)和对照组(n=18)。治疗组患者使用理筋手法联合中药熏洗技术进行治疗,对照组口服塞来昔布胶囊治疗,然后观察两组患者膝关节骨性关节炎的临床症状改善情况,采用疼痛视觉模拟评分法(VAS)及日本骨科协会(JOA)提出的膝关节骨性关节炎疗效评定法的评分进行数据统计。结果治疗组患者膝关节疼痛程度的VAS评分及低于对照组患者;日本骨科协会(JOA)提出的膝关节骨性关节炎疗效评定法的评分均高于对照组患者,治疗的总有效率高于对照组患者,P0.05。结论理筋手法联合中药熏洗技术治疗膝关节骨性关节炎的临床效果显著,可明显改善膝关节骨性关节炎患者的临床症状。     

转录因子KLF5介导乳腺癌细胞获得性耐药的作用机制

目的:探讨Kruppel样因子5(KLF5)介导乳腺癌获得性耐药的作用机制。方法:间歇刺激法构建对紫杉醇(PTX)耐受的乳腺癌耐药细胞株MDA-MB-231/PTX(MM-231/PTX),并采用细胞计数法(CCK8)检测亲本及耐药细胞的半数抑制浓度值(IC50)及耐药指数(RI),采用流式细胞术分析细胞周期,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测乳腺癌亲本细胞及耐药细胞株中KLF5及抗凋亡蛋白Survivin的表达水平,采用染色质免疫共沉淀(ChIP)法检测KLF5与Survivin基因启动子之间的相互作用。构建KLF5蛋白表达载体质粒pcDNA3. 0-KLF5,含Survivin基因启动子的报告基因质粒pGL3-Basic-Survivin-promoter,采用荧光素酶报告基因法检测KLF5对Survivin基因启动子活性的影响。结果:成功构建对PTX耐受的乳腺癌耐药细胞株MM-231/PTX,细胞的RI为18. 04,并且耐药细胞株对PTX的细胞周期阻滞作用并不敏感;耐药细胞株中KLF5和Survivin蛋白的表达水平均比亲本细胞中明显升高(P<0. 05);ChIP结果显示,KLF5能够结合到Survivin基因的启动子上;荧光素酶报告基因实验结果表明,KLF5能够增强Survivin基因启动子的活性。结论:KLF5能够增强Survivin基因的启动子活性,增加Survivin的转录表达,这可能是乳腺癌获得性耐药的主要原因。