人血小板生成素在大肠杆菌中的高效表达

目的：人血小板生成素（ＴＰＯ）在大肠杆菌中的高效表达。方法：利用ＰＣＲ技术,扩增出了（１－１７４个氨基酸的）人血小板生成素ｃＤＮＡ,并将其克隆到ｐＧＥＸ－１λＴ载体中,构建了融合蛋白表达质粒。重组子用限制性内切酶酶切鉴定。表达产物ＳＤＳ－聚丙烯胺凝胶电泳（ＳＤＳ－ＰＡＧＥ）。结果：限制性内切酶酶切鉴定表明重组子含有正确的（１－１７４氨基酸）ＴＰＯｃＤＮＡ片段;表达产物经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ相对分子质量     

泛素连接酶Smurf1与接头蛋白TRAF1相互作用并介导其泛素化降解

目的研究泛素连接酶Smurf1与接头蛋白TRAF1之间的相互作用,并检测TRAF1蛋白水平是否受Smurf1调控。方法在HEK293T细胞中共表达TRAF1与Smurf1,通过免疫共沉淀测定二者结合,并检测与Smurf1共表达时TRAF1蛋白水平变化,最后用AP-1报告基因测定TRAF1功能是否受Smurf1调控。结果 TRAF1可以特异性地与Smurf1相互作用,其在细胞内的蛋白水平可以被Smurf1所降低,而且TRAF1在AP-1报告基因中的抑制功能可以被Smurf1逆转。结论 TRAF1与Smurf1相互作用导致TRAF1在细胞内的蛋白水平降低而且在AP-1通路中的抑制作用减弱。     

微管结合蛋白NuSAP的组织表达谱分析

目的探讨微管结合蛋白NuSAP的组织分布特征。方法利用组织斑点杂交和Northern杂交分析NuSAP在多种组织中的分布情况,RT-PCR分析NuSAP在多种肿瘤细胞系中的mRNA水平,Western印迹分析NuSAP在多种肿瘤细胞系中的蛋白水平。结果 NuSAP的组织表达谱分析表明该基因在胸腺、胎肝、骨髓中高表达,提示NuSAP在造血免疫中可能发挥重要功能;在多数肿瘤细胞中均可检测到NuSAP的表达,为分析该基因的功能提供了线索。结论本研究揭示了NuSAP是一种组织特异性的微管结合蛋白,可能在造血/免疫组织中发挥重要功能,研究结果对肿瘤、免疫等疾病的防治具有一定的科学意义。     

巨噬细胞刺激蛋白及其受体的发现和研究

酪氨酸磷酸化在调节细胞增殖、分化过程中甚为重要,许多生长因子受体属蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTKs)家族,它们可自身磷酸化或使相应配基的氨基酸磷酸化,参与信号转导等重要过程。在了解已知PTKs家族成员的基础上,人们还在继续寻找新的PTKs成员。最近由于与肝细胞生长因子(hepa-tocyte growth factor,HGF)具50％同源性的     

PCR技术应用进展

多聚酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术自从1985年问世以来,就以其简便、快速、灵敏、特异等特点受到了分子生物学家们的普遍重视,目前该技术已应用于传染病、遗传病诊断、肿瘤癌基因的研究及基因工程的分子克隆等诸多方面。近两年,国内利用PCR技术的分子生物学研     

细胞因子在放射医学及辐射防护中的应用

细胞因子在放射医学及辐射防护中的应用贺福初，宫锋细胞团子的研究已持续十几年。近年来ｄ于分于生物学尤其是基因重组技术的应用，３基础和临床方面的研究取得了长足的进展。Ｅ前一般将细胞因子分成三类：（１）造血生长Ｂ子：如ＧＭ－ＣＳＦ（ｓｒａｎｕｌｏｃｖｔｅ－...     

人分化相关基因Ndr3的克隆、组织表达谱及亚细胞定位研究

目的 :研究人源分化相关新基因Ndr3的克隆、组织表达谱及亚细胞定位。方法 :采用电子拼接和PCR扩增技术 ,从人 2 2周孕龄胎肝cDNA文库中获得与人Ndr1基因同源的一段表达性序列标签 ,继而从成人脑cDNA文库分离出Ndr3的全长cDNA ;采用点杂交分析和多组织Northern杂交分析方法 ,确定其组织表达谱 ;将其亚克隆入绿色荧光蛋白表达载体pEGFP_N1,用脂质体介导法转染COS_7细胞 ,确定其亚细胞定位。结果与结论 :Ndr3的全长cDNA为 2 879bp ,其开放阅读框 (ORF)编码 375个氨基酸 ,染色体定位为 2 0q12_11.2 3。Northern杂交和点杂交分析显示 ,NDR3在脑组织和睾丸中高表达 ,在肾、心肌和前列腺中有一定量的表达 ,在胚胎组织的表达较低 ,在 8种人肿瘤细胞中的表达极低。与绿色荧光蛋白融合表达的实验结果显示 ,该蛋白定位于核外胞浆内     

白细胞介素18在肺癌细胞的表达及其在肿瘤转移中功能的初步探讨

目的 检测白细胞介素18(IL-18)在肺巨细胞癌高、低转移株的差异表达，探讨IL-18在肺巨细胞癌转移中介导的作用。方法 采用半定量RT-PCR或Western blot技术，检测IL-18在肺巨细胞癌高、低转移株的差异表达；构建IL-18 cDNA的重组质粒，测序分析其序列同源性；同时把IL-18基因导入肺巨细胞癌低转移株，观察IL-18对肿瘤细胞体外转移能力和转移表型的影响。结果 同肺巨细胞癌低转移株相比，IL-18 mRNA和蛋白均只能在肺巨细胞癌高转移株检测到；从肺巨细胞癌高转移株扩增出的IL-18 cDNA序列与文献报道^[1]完全一致；此外，将IL-18基因导入肺巨细胞癌低转移株后，稳定转染株细胞可正确表达IL-18融合蛋白，且转染细胞的体外迁移能力显著上调，为空对照组的3倍左右，而上皮细胞间黏附分子E-cadherin蛋白表达显著下调，为空对照组的50％左右。结论 肺巨细胞癌高转移株可组成性表达IL-18，且IL-18可能通过下调E-cadherin表达促进肺巨细胞癌细胞的转移。     

抗人LSECtin单克隆抗体的制备与初步鉴定

目的:制备抗肝脏、淋巴结窦内皮细胞C型凝集素(LSECtin)单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:采用原核表达的LSECtin免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA法筛选分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,采用蛋白印迹、间接免疫荧光、流式细胞术和免疫组化染色法鉴定mAb的特异性。结果:共获得8株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株。mAb的Ig亚类均为IgG,效价达1∶106~1∶107。这些mAb均可识别转染3T3细胞膜上的人LSECtin,6株mAb可特异识别肝脏窦内皮细胞。结论:成功地制备8株抗LSECtin的mAb,经免疫印迹、流式细胞术和免疫组化染色检测,这些mAb的特异性良好,为研究LSECtin的功能提供了有力的试剂。