拉曼光谱检测在辅助生殖领域的研究进展

辅助生殖技术(ART)的体外受精/胞浆内单精子注射-胚胎移植(IVF/ICSI-ET)需要实验室条件下处理两种配子、体外受精、体外培养形成胚胎或囊胚并挑选质量好的胚胎进行移植,使母亲妊娠,是目前解决不孕不育最有效的手段。因此,客观评估配子及植入前胚胎的质量显得非常重要。拉曼光谱不受被测物形态限制,无需样本制备或标记等复杂操作,属于无损伤检测。由于其具有检测迅速、耗时短、敏感度高及分析准确等特点,因此近年被广泛应用于快速检测蛋白质、核酸和脂类等生物大分子损伤。拉曼光谱技术主要有表面增强拉曼光谱技术、共焦显微拉曼光谱技术和傅里叶变换拉曼光谱技术3种。本文概述拉曼光谱的特点及上述3种主要拉曼光谱技术在生物样品分析方面的应用,探讨拉曼光谱技术应用于对精液、卵子和植入前胚胎质量检测的可能性,在辅助生殖领域具有潜在的应用前景。     

血塞通滴丸长期试验及其影响性考察

目的：通过血塞通滴丸的长期试验，考察产品质量的稳定性，确定药品有效期。方法：以《中国药典》的相关规定为依据，以性状、三七总皂含量及溶散时限作为评价指标，采用长期试验方法，选择3批血塞通滴丸样品进行考察。结果：血塞通滴丸的性状、溶散时限均符合规定，而三七总皂苷含量下降较快，在24个月中，3批样品含量平均下降了15．93％；血塞通滴丸的制备工艺改进后的3批样品含量平均下降了9．55％，较工艺改进前明显提高，样品含量之间有高度统计意义（P＜0．01）。结论：长期试验是考察药品质量非常重要的内容。     

血管内皮生长因子及受体与血液恶性肿瘤

血管内皮生长因子(VEGF)在实体瘤的发生、发展及转移过程起重要作用,但在血液恶性肿瘤中的作用研究较少,本文介绍多种血液恶性肿瘤细胞高表达VEGF,不同程度表达VEGF受体,血液恶性肿瘤患者骨髓血管新生明显,VEGF及受体在血液恶性肿瘤过程亦起重要作用。     

miR-19a和miR-92a在多发性骨髓瘤中的功能及其信号通路分析

目的:利用微小RNA(microR,miRNA)种子序列的反义寡核苷酸研究miR-19a和miR-92a簇在多发性骨髓瘤中的功能及其信号通路分析。方法:实验分为miR-19a种子序列反义寡核苷酸(t-antimiR-19a)组、miR-92a种子序列反义寡核苷酸(t-antimiR-92a)组、随机对照组和空白对照组,通过MTT法检测细胞活力;使用细胞集落形成实验观察集落形成情况;Transwell小室法检测反义寡核苷酸转染细胞的侵袭能力;生物信息学软件miRFocus用来分析miR-19a和miR-92a的靶基因和其参与的信号通路。结果:MTT结果表明t-antimiR-19a和t-antimiR-92a显著抑制RPMI-8266细胞的生长,t-antimiR-19a和t-antimiR-92a的最佳浓度是0.5μmol/L,最佳作用时间是转染后48 h。细胞集落形成实验显示,相比于随机对照组,t-antimiR-19a组和t-antimiR-92a组的细胞形成集落的能力减弱,集落形成抑制率显著降低。Transwell小室实验显示,相比于随机对照组,t-antimiR-19a组和t-antimiR-92a组的侵袭能力减弱,具有侵袭能力的细胞数显著降低。miRFocus软件分析miR-19a和miR-92a参与多条与肿瘤有关的重要的信号通路。结论:miR-19a和miR-92a有可能作为治疗多发性骨髓瘤的潜在靶点。     

对《中国药典》2010版一部六味地黄胶囊的商榷

目的探索六味地黄胶囊合理的制备工艺和质量标准。方法通过对2010年版《中国药典》一部六味地黄胶囊的制备及检验的实际应用,发现一些值得商榷的地方。结果根据《中国药典》生产后的得率过高（247.6%）,定量检验的目标物与原药材不符。结论建议更改生产工艺及质量标准。     

海金护卫散微生物限度检查方法的验证

目的:建立海金护卫散的微生物限度检查方法.方法:测定海金护卫散对5种阳性验证菌株的网收率,并对控制菌的检查方法进行验证.结果:常规法试验时,除枯草芽孢杆菌回收率不足70%外,金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌、黑曲霉回收率均达70%以上;采用培养基稀释法(0.5ml)枯草芽孢杆菌回收率达70%以上.结论:海金护卫散可采用培养基稀释法进行微生物限度检查;控制菌检查可采用常规方法检验.     

RNA-21为靶标的反义寡核苷酸对人白血病K562细胞的抑制作用

目的： 探讨以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸对白血病K562细胞的生长抑制效应及可能的作用机制。方法：依据与microRNA-21序列互补的原理,设计反义寡核苷酸,人工合成并全硫代修饰,在LipofectamineTM 2000介导下,转染K562细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法筛选最佳作用浓度,台盼蓝拒染法检测其对细胞生长抑制的作用,姬姆萨染色观察细胞的形态学变化,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期的变化。利用荧光定量PCR技术检测反义寡核苷酸作用后细胞内microRNA-21表达水平的改变。结果：MTT结果显示反义寡核苷酸有效抑制细胞生长,分别与随机组、空白对照组进行比较有显著差异（P<0.05）,反义寡核苷酸作用的最佳浓度是0.6 μmol/L。台盼蓝拒染法结果显示从转染K562细胞24 h开始,反义寡核苷酸组细胞生长明显受到抑制,抑制效应持续到72 h。姬姆萨染色显示反义寡核苷酸作用K562细胞24 h后,可在细胞中见凋亡小体。流式细胞仪检测结果显示反义寡核苷酸组出现明显的亚二倍体峰,细胞周期无发生明显变化。荧光定量PCR结果显示,反义寡核苷酸可有效抑制细胞内microRNA-21的表达水平。结论：以microRNA-21为靶标的反义寡核苷酸可有效抑制人白血病K562细胞的生长,并显著促进细胞凋亡。     

血管内皮生长因子反义寡核苷酸增强髓系白血病细胞对三尖杉酯碱敏感性

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对急性髓系白血病(AML)、慢性粒细胞白血病(CML)细胞的三尖杉酯碱敏感性的影响及其可能的机制。方法采用以前实验筛选所获得的VEGF最优反义寡核苷酸A7，长度为20个脱氧核糖核苷酸，全硫代修饰；在低血清(2％)条件下，以脂质体介导转染细胞8h，调整培养液血清浓度至10％。24h后加入三尖杉酯碱继续培养至72h，用锥虫蓝拒染法计数活细胞，用ELISA法检测培养液中VEGF蛋白的浓度，用流式细胞仪检测细胞凋亡百分率。结果与随机对照序列联合三尖杉酯碱组相比，VEGF反义寡核苷酸与三尖杉酯碱联用可显著抑制AML、CML细胞存活(AML组存活细胞数下降38％，CML组存活细胞数下降25％)，并下调VEGF蛋白的表达(AML组蛋白表达下降25．44％，CML组蛋白表达下降30．81％)，增加三尖杉酯碱诱导的AML、CML细胞凋亡百分率(AML组凋亡细胞百分率增加48．29％，CML组凋亡细胞百分率增加52．76％)。结论VEGF反义寡核苷酸可提高AML、CML细胞对三尖杉酯碱的敏感性；白血病细胞分泌的内源性VEGF蛋白具有抵抗药物杀伤作用。     

VEGF反义核酸增强HL60和K562细胞对柔红霉素敏感性

研究发现恶性血液病细胞高表达血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF),并不同程度表达VEGF受体[1~2],VEGF在白血病中的作用不够明确,可能是通过自分泌作用机制,促进白血病细胞存活和生长、降低白血病细胞对化疗药物的敏感性等。以前的研究已证实:VEGF反义     

血塞通滴丸中试生产工艺的研究

目的:研究血塞通滴丸的最佳中试生产条件.方法:通过正交试验考察最佳的血中试生产条件.结果:混合搅拌时间为15 min时熔融状态最好:PEG 1 500与 PEG 4 000混合配比为1:4时粘度与硬度最好目无裂纹;主药与基质配比为(2.0～2.5):1时外观光滑圆整,色泽均匀,硬度好,成型率极高.结论:血塞通滴丸中试生产的最佳条件为混合搅拌时间为15 min,PEG 1500与PEG 4 000混合配比为1:4,主药与基质配比为2.5:1.