柯萨奇B1病毒VP1基因在大肠杆菌中的表达

目的：在大肠杆菌中表达柯萨奇B1（CVB1）病毒VP1蛋白。方法：用限制性酶切方法将CVB1 VP1基因从pMD18-T-VP1上切下，连续至pQE30构建原核表达系统pQE30-VP1，经酶切和PCR验证后转化至大肠杆菌BL21（DE3），用IPTG诱导目的基因表达，SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western-blot检测VP1蛋白的表达，结果：酶切，PCR证明构建的原核表达系统携带方向正确的CVB1 VP1基因。SDS－PAGE和Westernblot;实验均可于33．0kDa处见到目的条带。结论：CVB1 VP1基因在大肠杆菌的成功表达开发新的血清学检测试剂提供了基础。     

人乳头瘤病毒和人子宫颈鳞状上皮细胞癌关系的超微结构与基因分子

以人乳头瘤病毒(HPV)DNA为探针,通过核酸杂交方法,检测宫颈癌病人活体细胞DNA中的病毒相关序列,用透射电镜观察癌细胞的形态特点。32例宫颈癌组织中23例与HPV16型探针杂交呈阳性反应,阳性率为72％。杂交阳性的癌细胞核内小体的出现率增加。     

EB病毒核酸片段与嗜菌体DNA重组方法的研究——Ⅰ.重组核酸的获得和鉴定

本文报告EB病毒核酸片段与嗜菌体M_(13)mp8 DNA重组和鉴定方法的研究,来源于细菌质粒的EB病毒核酸片段与嗜菌体DNA重组并在大肠杆菌中繁殖。从嗜菌体中分离单链和双链的核酸,用凝胶电泳和核酸杂交实验分析鉴定重组的核酸。     

乙型肝炎病毒e抗原的纯化及其在人血清抗体检测中的应用

目的方法利用ＺｈｏｕＪｉａｎ教授提供的重组质粒ＤＮＡｐＢＶ２２０／ｅＡｇ，转染ＤＨ５α细胞，经３０℃培养３小时，４２℃培养６小时温度诱导后，提取乙型肝炎病毒ｅ抗原（ＨＢｅＡｇ）。经ＤＥＡＥ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦａｓｔＦｌｏｗ层折纯化后免疫打点分析，收集阳性蛋白。经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳，考马斯亮蓝Ｇ２５０染色，显示为单一的蛋白带，用免疫印迹法（Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ）和免疫打点（ｌｍｍｕｎｏｄｏｔ）法，确定表达产物的特异性。将纯化的ＨＧｅＡｇ用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）和免疫条。方法基检测人血清中的相关抗体。结果经４９例乙型肝炎病毒ｅ抗体（ＨＢｅＡｂ）阳性病人血清检验证实了其特异性。结论免疫条方法较ＥＬＩＳＡ方法更敏感、特异。     

特异性细胞毒性T细胞检测方法的建立及其在重组痘苗病毒活疫苗细胞免疫研究中的应用

报道了用ＣＢＡ／Ｊ小鼠、Ｌ９２９细胞及ＭＴＴ比色法建立的特异性细胞毒性Ｔ细胞（ＣＴＬ）的检测方法及其在重组痘苗病毒活疫苗细胞免疫研究中的应用。通过检测痘菌病毒特异性初发ＣＴＬ的动态变化及其二次反应ＣＴＬ，表明，本法能较好地检测初发及二次反应ＣＴＬ水平的变化。用本法检测了不同启动子控制下的表达Ｅｐｓｔｅｉｎ－Ｂａｒｓ（ＥＢ）病毒膜抗原（ＥＢＶ－ＭＡ）的重组痘菌病毒ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ、以及与表达人白细胞介素－２的重组痘苗病毒联合免疫时的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ。结果表明，Ｐ７５００启动子表达的ＥＢＶ－ＭＡ比Ｐ１１０００启动子表达的ＥＢＶ－ＭＡ诱导的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ高，但无显著性差异。当上述重组痘苗病毒与表达人白细胞介素－２的重组痘苗病毒联合免疫时，均能使二者的ＥＢＶ－ＭＡ特异性ＣＴＬ增高，但增高幅度本身及其二者之间均无显著性差异。     

人乳头瘤病毒与大肠癌相关性研究

大肠癌是常见的消化道恶性肿瘤 ,近年来我国大肠癌发病率和死亡率有呈逐年上升趋势 ,但其病因及发生机制目前并不十分清楚。许多证据表明 ,人乳头瘤病毒 (ＨＰＶ)与人类肿瘤关系密切 ,因此ＨＰＶ与大肠癌的关系目前也越来越受到关注。为了解大肠疾病中ＨＰＶ感染情况 ,以明确ＨＰＶ与大肠癌的关系 ,作者对 1 1 2例结肠镜活检标本进行了ＨＰＶ检测 ,结果报道如下。1　材料与方法1 .1　ＰＣＲ模板ＤＮＡ制备　通过结肠镜检查 ,获取11 2例标本 ,用甲醛溶液固定 ,石蜡包埋保存。所有标本同时行病理检查确定诊断 ,其中大肠腺癌 4 6例 ,大肠腺瘤 1…     

STRUCTURE AND EXPRESSION OF EPSTEIN-BARR VIRUS MEMBRANE ANTIGEN IN RECOMBINANT VACCINIA VIRUS

The Epstein-Barr virus membrane antigen was constructed and inserted into vaccinia virus, Tian-tan strain in order to study the effect of this virus on EB infection and tumorogenesis. The EBV-derived membrane antigen was expressed under the control of a 7.5 K promoter of vaccinia virus. The antibody against the membrane antigen of EB virus was produced on rabbits vaccinated with recombinant vaccinia virus.     

抗人巨细胞病毒中和性人源基因工程抗体的研究

目的 研究抗人巨细胞病毒(HCMV)人源基因工程抗体。方法 采用噬菌体表面展示技术。首先从HCMV感染者外周血中分离淋巴细胞，提取RNA，逆转录后用特异性引物扩增轻、重链基因。然后插入噬菌体载体pComb3，构建噬菌体抗体库。使用纯化的HCMV病毒裂解物对噬菌体抗体库进行4轮富集，然后通过ELISA筛选阳性克隆，并对获得的克隆进行功能鉴定。结果 克隆和表达了3株抗HCMV人源Fab抗体，经ELISA证明均具有抗原结合活性，间接免疫荧光试验证明具有较高的特异性，最后通过病毒中和试验证明其中2株具有中和活性。结论 获得2株抗HCMV人源Fab抗体，具有一定的中和活性，为下一步研究抗HCMV人源全抗体奠定了基础。     

基因工程表达的EB病毒抗原在鼻咽癌及高危人群诊断中的应用

196 7年Ｈｅｎｌｅ证明在鼻咽癌病人的血清中存在ＥＢ病毒特异性的ＩｇＡ抗体 ,近 30年来 ,检测ＥＢ病毒壳抗原的ＩｇＡ抗体是鼻咽癌血清学诊断和高危人群筛查的主要方法 ,广泛地用于临床诊断和前瞻性血清流行病学研究 ,在早期发现、早期治疗、提高生存率上起了重要作用( 2 ) 。但是 ,至今仍使用Ｂ95 8细胞涂片 ,以间接免疫荧光或免疫酶方法检查血清中的抗体。检测方法繁琐 ,细胞中ＥＢ病毒其他相关抗原的干扰 ,影响检测的特异性和敏感性。Ｌｕｋａ等人1984年建立了ＥＬＩＳＡ检测血清中抗体 ,其敏感性较细胞涂片检测方法提高 10 0～ 10 0 …     

人肉瘤病毒病因和免疫研究的新进展

 在动物肿瘤的研究中,主要成绩之一是证明了某些自发的肿瘤是由病毒引起的。已发现的动物肿瘤病毒有一百多种,包括核糖核酸病毒(RNA病毒)和脱氧核糖核酸病毒(DNA病毒)。