GFP-hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中的表达与定位

目的：构建GFP—hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP／hDaxx并在巨噬细胞中表达，为研究hDaxx对巨噬细胞凋亡及分泌活性的影响提供实验基础。方法：将hDaxx cDNA片段亚克隆入载体pEGFP，构建GFP—hDaxx融合蛋白真核表达载体。将质粒pEGFP/hDaxx转染巨噬细胞，Western blotting鉴定表达产物，荧光显微镜观察GFP—hDaxx融合蛋白在细胞内的表达与定位。结果：成功构建了GFP—hDaxx融合蛋白真核表达载体pEGFP／hDaxx，GFP—hDaxx融合蛋白在巨噬细胞中表达并定位于细胞核。结论：pEGFP／hDaxx在巨噬细胞中即时高表达GFP—hDaxx融合蛋白并定位细胞核。     

腺病毒2型E1B 55KD癌蛋白与hDaxx相互作用

目的：研究腺病毒（adenovirus，Ad）2型E1B 55KD癌蛋白（Ad2 E1B55 KD）与人Daxx(humanDaxx，hDaxx)的相互作用及作用部位。方法：利用共免疫沉淀反应研究Ad2/5E1B 55KD与hDaxx的结合反应，通过酵母双杂交体系测定两种蛋白质的相互作用。结果：酵母双杂交试验结果显示Ad2E1B 55KD通过C端58个氨基酸（amino acid，aa）与hDaxx结合并发生相互作用。共免疫沉淀反应和Western blot结果证实Ad2/5E1B 55KD能在细胞内外与hDaxx直接结合。结论：Ad2E1B 55KD与hDaxx结合并发生相互作用。     

HSV-1早早期蛋白0对巨噬细胞凋亡及分泌活性的影响

目的研究人单纯疱疹病毒Ⅰ型（HSV-1）早早期蛋白0（ICP0）对巨噬细胞（MΦ）凋亡及分泌活性的影响,为进一步研究ICP0蛋白在HSV-1致病机制中的作用奠定实验基础。方法将真核表达载体PT7-110转染MΦ,以抗ICP0抗体为一抗作Western blot检测其表达。在转染48 h后以ELISA法分析各组培养基中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）产生水平,并收集MΦ经流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡。结果 ICP0能够刺激MΦ产生TNF-α和IL-6,且能诱导MΦ发生凋亡。结论 HSV-1 ICP0高表达可诱导MΦ发生凋亡并上调其分泌细胞因子TNF-α和IL-6。     

表皮葡萄球菌gyrA基因突变与耐氟喹诺酮类药物的关系

目的 探讨gyrA基因突变与表皮葡萄球菌耐氟喹诺酮类药物中的作用。方法 从149株取自临床的葡萄球菌中，筛选出对6种喹诺酮类药物交叉耐药的7株表皮葡萄球菌，3株敏感株，扩增gyrA基因，对产物进行SSCP、酶切、测序分析。结果 3株耐药株均有251位C→T突变，导致其编码的84位丝氨酸转变为苯丙氮酸，1株耐药株出现107位C→G突变，致其编码的36位脯氨酸转变为丙氨酸，2株耐药株中出现190位T→G及223位T→C突变，为无义突变，3株敏感株及1株耐药株未发现突变。结论 表皮葡萄球菌耐氟喹诺酮类药物与gyrA基因突变有关，但还可能存在其他机制。     

性病患者性病病原体感染的研究

以２６１７份性病阳性标本中查出淋球菌（Ｇｃ）１１６０例（４４．３３％）、解脲支原体（Ｕｕ）７４６例（２８．５１％）、人型支原体（Ｍｈ）３８２例（１４．７５％０、沙眼衣原体（Ｃｔ）３５３例（１３．４９％）、人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）２８８例（１１．００％）、念珠菌（Ｃｄ）１８４例（７．０３％）、阴道毛滴虫（Ｔｖ）５８例（２．２２％）、单纯疱疹病毒（ＨＳＶ）５６例（２．１４％）及梅毒螺旋体（Ｔｐ）感染者３     

从临床标本中定量检测泌尿生殖道支原体耐药性的研究

目的比较抗生素对临床标本中泌尿生殖道支原体抗菌作用。方法采用直接肉汤药盘法定量测定了临床标本中２１１株解脲脲原体（Ｕｕ）和５４株人型支原体（Ｍｈ）对８种抗菌药物的耐药性。结果２１１株Ｕｕ对四环素、强力霉素、氧氟沙星、环丙沙星、米诺环素、阿奇霉素、罗红霉素、交沙霉素耐药率分别为３８４％、２３２％、２０７％、６５４％、５１６％、０％、０９％及５７％；５４株Ｍｈ对四环素、强力霉素、氧氟沙星、环丙沙星、米诺环素、阿奇霉素、罗红霉素、交沙霉素耐药率分别为５９２％，４８．１％，３３３％，７５９％，５００％，１００％，１００％及２７８％。耐四环素的Ｕｕ株对强力霉素、环丙沙星、米诺环素都有交叉耐药，但对阿奇霉素、罗红霉素、交沙霉素无交叉耐药，耐四环素的Ｍｈ株对强力霉素、氧氟沙星、环丙沙星、米诺环素和交沙霉素有显著性交叉耐药。结论提示泌尿生殖道脲原体的耐药性监测，对指导临床治疗具有重要意义。     

淋病患者合并感染与药物敏感性研究

用培养法和ＰＣＲ法对１００例淋球菌阳性患者混合感染并行药物敏感性研究，结果显示；Ｃｃ＋Ｕｕ，Ｇｃ＋Ｍｈ，Ｇｃ＋Ｃｔ，Ｇｃ＋Ｔｖ，Ｇｃ＋Ｃｄ，Ｇｃ＋Ｕｕ＋Ｍｈ，Ｇｃ＋Ｕｕ＋Ｃｔ，Ｇｃ＋Ｍｈ＋Ｃｔ，Ｇｃ＋Ｕｕ＋Ｍｈ＝Ｃｔ，Ｇｃ＋Ｃｔ＝Ｕｕ＝Ｔｖ混合感染阳性率为３５％，２５％，１９％，１％，３％，２１％，１３％，５％，３％，１％。男性淋病患者混合感染率与女性患者相比，差异无显著性。     

病案教学法在医学微生物学教学中的应用及体会

针对医学微生物学与临床医学的紧密联系性,精心收集有关的临床病案,在医学微生物学教学中探索以病案分析为中心的教学法。结果发现病案教学法在调动学生学习的积极性和主动性、培养学生的创造性思维能力、提高临床实践能力和自学能力等方面显著优于传统的教学模式。     

hDaxx高表达抑制地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡

目的利用真核表达载体pEGFP/hDaxx在HeLa细胞中高表达hDaxx,研究hDaxx对HeLa细胞凋亡的影响.方法将pEGFP/hDaxx转染HeLa细胞,Western-blotting鉴定GFP-hDaxx融合蛋白的表达,荧光显微镜观察GFP-hDaxx融合蛋白在细胞内的表达及定位,用地塞米松诱导HeLa细胞凋亡,细胞用Giemsa染色后,观察细胞形态变化并计算HeLa细胞凋亡率.结果GFP-hDaxx融合蛋白在HeLa细胞中成功表达并定位于细胞核.地塞米松对照组与pEGFP对照组凋亡率无显著性差异(P＞0.05),而pEGFP/hDaxx组凋亡率显著降低(P＜0.01),即hDaxx即时高表达降低地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡率.结论Daxx为调控蛋白,GFP-hDaxx融合蛋白在HeLa细胞中表达并定位于细胞核,且hDaxx即时高表达抑制地塞米松诱导的HeLa细胞凋亡.