静脉吸毒人群经血传播疾病的感染调查

目的　了解温州地区静脉吸毒者经血传播疾病的感染情况。方法　采集静脉吸毒者血液标本 ,分离血清 ,用半巢式PCR检测TTV ,用ELISA检测抗 -HCV、HBsAg、抗 -HBs、HBeAg、抗 -Hbe、抗 -HBc等。 结果　共检测 30 6例 ,TTV、抗 -HCV、HBsAg、抗 -HBs、HBeAg、抗 -Hbe、抗 -HBc的阳性率分别为 7.52 %、42.4 8%、19.61%、44.12 %、7.19%、7.84 %和 41.50%。乙肝五项标志物中一项或以上阳性者 226例 ,感染率为73.86 %。HCV、TTV和HBV同时检出率高。吸毒者不同血型的TTV、HCV、HBV感染率无显著差异。结论　静脉吸毒者是经血传播疾病的高危人群 ,几种疾病可同时或重叠感染 ;共有未经灭菌的注射器可造成交叉感染 ,可能是吸毒者感染这些疾病的主要原因。故应采取控制措施 ,降低吸毒人群感染这些疾病的频率。     

比较脐血与成人外周血中T淋巴细胞亚群分布及其因子产生的差异

目的：探讨脐血与成人外周血中淋巴细胞亚群分布及细胞因子的差异及其与移物抗宿主病（GVHD）发生的关系,方法：采用流式细胞术,三色荧光单克隆抗体标记对脐血和成人外周血中淋巴细胞进行分类,并对其分泌的IL－2,TNF－α和IFN－r进行分析比较,结果：（1）脐血中T淋巴细胞以CD^4 ,CD45RA^ 细胞为主,而成人外周血以CD^ ,CD4R5RO^ 和CD^ 8CD450^ 两种表型为主,（2）脐血淋巴细胞产生IL－2,TNF－α和IFN－r的量明显低于成人外周血淋巴细胞,进一步分析表明,脐血中产生细胞因子的细胞大部分为CD^ 4CD45^ 细胞,而成人外周血中大部分为CD^ 4CD45RO^ 和CD^ 8CD^ 45RO细胞。结论：成人外周血与脐血淋巴细胞不仅存在亚群比例上的差异,而且亚群分泌细胞因子的量也明显减少,脐血干细胞移植的GVHD发生率较低可能与脐血中淋巴细胞亚群的比例不同及分泌细胞因子减少有关。     

Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制Bcl-2基因对鼻咽癌CNE-2细胞的抑制作用

目的观察Hsa-miR-15a/16-1靶向抑制B细胞淋巴瘤/白血病-2基因（B-cell lymphoma gene 2,Bcl-2gene）表达对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma,NPC）CNE-2细胞的生长抑制作用。方法将构建成功的重组质粒pENTR-CMV-EGFP-hsa-mir-15a/16-1经Lipofectamine 2000转染CNE-2细胞,RT-qPCR检测miR-15a/16-1、Bcl-2 mRNA表达水平,流式细胞术和WesternBlot检测Bcl-2、caspase-3蛋白表达水平,CCK-8法分析细胞生长抑制情况,4,6-二脒基-2-苯基吲哚（4,6-diamidino-2-phenylindole,DAPI）染色观察细胞凋亡状况。结果转染后miR-15a表达增高（F=547.525,P均〈0.001）;miR-16-1表达增高（F=99.979,P均〈0.001）;Bcl-2 mRNA表达无明显差别（F=0.220,P〉0.05）;Bcl-2蛋白表达下调,caspase-3蛋白表达增高;细胞在体外凋亡明显;细胞增殖受到抑制,作用呈明显的时效关系。结论 Hsa-miR-15a/16-1对Bcl-2基因的靶向抑制,可体外对CNE-2细胞产生增殖抑制和促进凋亡作用。     

胃黏膜组织中一氧化氮合酶-mRNA与老年胃溃疡的相关性研究

老年人为何在胃酸分泌下降的情况下比青年人更易患胃溃疡，胃黏膜更易遭受外来有害物质的损害．目前尚无定论。本研究旨在通过分析老年消化性溃疡患者胃黏膜组织中原生型一氧化氮台酶信使核糖核酸(cNOS-mRNA)的表达变化．探讨其与老年胃溃疡发生的关系。现报告如下：     

表达CD20scFv-IgGFc-CD28-ζ及CD20scFv-IgGFcT淋巴细胞的建立及其对B细胞淋巴瘤靶向杀伤作用的比较

目的:研究CD20scFv嵌合T淋巴细胞靶向杀伤Daudi细胞时杀伤的效果和T细胞活化情况.方法:将两种质粒转染至PA317细胞中,用转染成功的PA317上清液感染外周血T淋巴细胞后经800 mg/L的G418筛选1周后去杀伤Daudi、K562细胞,分别在不同时点用流式细胞仪检测Daudi细胞AnnexinV的阳性率,用ELISA检测细胞因子IL-2、IFNγ.结果:Daudi细胞Annexin V的阳性率在24 h内两实验组与K562组相比明显增高,而实验组之间没有显著差异.72 h时CD20scFv-IgGFc-CD28-ζ组比CD20seFv-IgGFc组IL-2(1 509.00 ng/L比220.54 ng/L)和IFNγ(912.16 ng/L比251.42 ng/L)的分泌量有显著增高.结论:①两种CD20scFv特异的T细胞在引起Daudi细胞早期凋亡无显著差异,说明在CD20scFv的靶向杀伤过程中CD28-ζ基因可能不主导Daudi细胞的早期凋亡.②CD20scFv-IgGFc-CD28-ζ组IL-2、IFNγ增幅更加明显,说明CD3ζ和CD28嵌合的T细胞可以自身活化而不受MHC的限制,从而增强了T细胞的活化和杀伤等功能.     

风疹病毒宫内感染的实验诊断研究

目的：建立准确、快速的风疹病毒内感染实验诊断方法。方法：将疫苗株病毒稀释后接种Vero细胞，收集不同时段培养上清液和细胞，RT-PCR法检测风疹病毒RNA（培养RT-PCR法）。用直接RT—PCR法和培养RT—PCR检测可疑风疹病毒感染的胎儿组织和羊水标本。结果：直接RT—PCR法可检测模拟羊水标本中15TCID50／ml风疹病毒RNA。培养RT—PCR法在10TCID50的病毒感染后6h的V细胞和感染后24h的培养上清液中检出风疹病毒RNA。直接RT—PCR法和培养RT—PCR法检测4例足月产胎儿羊水均阴性；1例引产胎儿羊水直接RT—PCR法阴性，培养RT—PCR法在接种细胞后24h检出风疹病毒RNA。结论：培养RT—PCR法是一个快速、特异、灵敏的实验室诊断风疹病毒宫内感染的方法。     

含有小鼠CD40、IgG2aFc基因片段腺病毒的构建及检测

目的:构建载有小鼠CD40-IgG2aFc-IRS-GFP融合基因片段的腺病毒载体,并检测其转染293细胞后的融合蛋白表达及出毒情况.方法:提取小鼠CD40、IgG2aFc基因片段构建PDC316-IgG2aFc-IRS-GFP质粒,测序成功后包装构建Ad5-PDC316-CD40-IgG2aFc-IRS-GFP,转染293细胞.出毒后大量复制病毒并纯化,测定病毒滴度,体外感染细胞观察病毒复制及分泌目的蛋白情况并检测目的蛋白表达量.结果:成功构建了质粒及病毒,体外感染显示该病毒能有效地感染细胞并表达蛋白(荧光显示),检测目的蛋白表达量随时间点及浓度增加而增加.当病毒浓度增加到一定程度时目的蛋白表达趋于无明显差异性.结论:构建小鼠融合基因片段并成功转入细胞内、分泌表达目的蛋白是可行的,为进一步研究该病毒在大鼠体内感染及表达CD40Ig、大鼠肝移植模型免疫耐受及其机制的研究奠定基础.     

苦参碱诱导多发性骨髓瘤RPMI8226细胞凋亡及其对细胞黏附分子表达的影响

为了探讨苦参碱诱导多发性骨髓瘤（MM）RPMI8226细胞凋亡及其对细胞黏附分子表达的影响,将苦参碱与RPMI8226细胞共培育,采用CCK-8法观察细胞生长,Annexin V-FITC/PI双染色流式细胞仪检测细胞凋亡,PI单染色法检测细胞周期,双染色流式细胞仪检测细胞膜表面CD44、CD44v6、CD54和CD106的表达。结果表明,苦参碱对RPMI8226细胞具有明显的生长抑制作用,呈量效和时效关系;苦参碱能诱导RPMI8226细胞凋亡,其发生率随着药物浓度增加而增加;细胞周期分析显示G0/G1期细胞相对增多,S期相对减少,但G2/M期细胞数无明显改变;苦参碱作用于RPMI8226细胞48小时导致CD44和CD54表达减少,但CD44v6和CD106表达无明显改变。结论：苦参碱通过诱导凋亡和细胞周期阻滞抑制RPMI8226细胞的生长,同时降低CD44、CD54等细胞黏附分子表达。