A型肉毒抗毒素ELISA方法的建立及验证

目的:建立定量检测A型肉毒抗毒素效价的酶联免疫吸附法(ELISA法),并进行验证。方法:以A型肉毒类毒素为包被抗原包被酶标板，封闭后加入稀释的血清样品，以辣根过氧化物酶标记的兔抗马IgG(IgG-HRP)作为酶标抗体，加入四甲基联苯胺显色剂(TMB)显色10～15 min, 2 mol·L^-1硫酸终止反应，于酶标仪上读取A_{450 nm}值，以标准曲线样品浓度的对数(X)为横坐标，A_{450 nm}值(Y)为纵坐标绘制标准曲线，将待测血清样品A_{450 nm}值代入曲线方程即可得到血清样品浓度，乘以稀释倍数即为血清样品效价。结果:在优化的条件下，该方法具有较高的特异性，除了与A型肉毒抗毒素血清反应外，对B、C、D、E、F型肉毒抗毒素血清均无交叉反应；在线性范围50～400 mIU·mL^-1时线性关系良好，r>0.990 0;准确度介于80%～120%;精密度(重复性和中间精密度)RSD<20%;采用该方法测定20批A型肉毒抗毒素血清的效价范围在525～2 450 IU·mL