肝癌Huh7干细胞样细胞的富集培养及鉴定

目的：建立一种体外有效富集、培养和鉴定具有肝癌干细胞特征的细胞亚群的方法。方法：采用成球培养法利用肿瘤干细胞样细胞（cancer stem cell, CSC）分化培养基对肝癌Huh7细胞进行富集培养,获得的干细胞样细胞于体外进一步扩增获得肝癌干细胞球。流式细胞术检测Huh7干细胞样细胞表面肿瘤干细胞标志物EpCAM、CD90和CD133的表达,平板克隆集落形成实验和裸鼠成瘤实验分别检测Huh7细胞和Huh7干细胞样细胞的克隆集落形成能力、体内成瘤能力。结果：Huh7细胞成球培养3~7 d后即可形成肝癌干细胞样细胞球,获得的干细胞样细胞具有自我更新和增殖能力,其EpCAM阳性细胞比例较Huh7细胞明显增加\[（99.6%±0.31）% vs（0.12%±0.05）%,P<0.01\],但两种细胞CD90\[(0.11%±0.06)% vs (0.09%±0.07)%, P>0.05\]和CD133\[(0.17%±0.08)% vs (0.15%±0.05)%, P>0.05]表达差异无统计学意义。Huh7干细胞样细胞克隆集落形成数量明显多于Huh7细胞\[（188.67±12.5）vs （79±16.7）个,P<0.01\];当接种量为5×104个细胞时,与接种Huh7细胞的对照裸鼠相比,接种Huh7干细胞样细胞的裸鼠成瘤时间更短（11 vs 30 d）,成瘤率更高（100% vs 16.67%）;接种5×105数量级的细胞时,实验组成瘤体积\[（171.90±10.94）vs（86.39±11.21）mm3, P<0.01\]和瘤体质量\[（2.98±0.82）vs（0.32±0.17）g, P<0.01\]均明显大于对照组。结论：利用成球培养法能够从Huh7肝癌细胞系中富集培养获得Huh7肝癌干细胞,其具有比Huh7细胞更强的成瘤能力。     

中西药联合的合理性和配伍禁忌

目前中西药联合是临床的一大特色,中药治标治本结合西药疗效,合理搭配可减小西药的毒副作用,两者联合扬长补短,缩短疗程,尤其对疑难杂症,可取得意想不到的疗效。但配伍不当,反而起到反作用。掌握其药理作用,合理配伍,为临床做出贡献。     

磁刺激对脊髓内源性神经干细胞增殖分化影响

目的 探讨磁刺激对脊髓内源性神经干细胞（NSCs）增殖分化的作用。 方法 将46只Wistar大鼠分为正常组、对照组和治疗组,对照组和治疗组采用改良的Allen重物坠落法造成大鼠脊髓损伤（SCI）模型,治疗组于SCI后24 h开始,每天给予脉冲磁刺激,频率为0.5 Hz,强度为1.44 T,每次30个脉冲,每天1次,连续7 d。应用BBB运动功能评分评价磁刺激治疗后大鼠运动功能的改善,采用免疫组织荧光化学技术检测脊髓神经上皮干细胞巢蛋白的表达,采用免疫荧光三标技术结合激光共聚焦显微镜检测微管相关蛋2（MAP2）/巢蛋白/4,6 二乙酰基 2 苯基吲哚（DAPI）的表达。 结果SCI后,治疗组大鼠运动功能改善明显,治疗组脊髓中央管室管膜、室管膜下区、损伤病灶周围和血管周围巢蛋白阳性细胞数较对照组多（P<0.05）,且尽管总体细胞数量有限,在上述部位的MAP2/巢蛋白双标阳性细胞数多于对照组。 结论磁刺激可以促进脊髓内源性NSCs的激活,并有可能诱导其向神经元细胞分化,该诱导分化作用是否在神经再生方面具有实质性意义值得进一步深入研究。     

硬膜外脊髓电刺激电压及频率变化对正常大鼠脊髓反射的

目的研究正常大鼠麻醉状态下S1脊髓节段不同电压及频率硬膜外脊髓电刺激（ESCES）所诱发的脊髓反射,探讨ESCES诱发脊髓反射的发生机制及来源。 方法选取成年雌性Sprague Dawley大鼠10只,麻醉后手术将电极植入S1脊髓节段,予以波宽200 μs、电压强度分别为400,600,1200 mV的单脉冲ESCES; 1200 mV时,频率分别为50,60,80,100 Hz 的ESCES。以同心圆针电极记录大鼠后肢半腱肌肌腹的肌电信号,观察所诱导脊髓反射的特点。 结果能引起大鼠半腱肌反应的阈值为300 mV。3种电压强度的ESCES能诱导出2种潜伏期成分的脊髓反射,较低的400,600 mV电压强度可诱发出长潜伏期成分,潜伏期分别为（5.27±0.36） ms和（5.19±0.67）ms;较高的1200 mV电压强度可诱发出短潜伏期成分,潜伏期为（2.57±0.23）ms。4种较高频刺激均可诱发出脊髓反射,但刺激后期都出现了脊髓反射脱落后不规律出现,部分大鼠出现了较高频刺激后期脊髓反射完全消失。50 Hz频率的ESCES所诱发脊髓反射的潜伏期和波宽分别为（4.46±1.07）ms和（7.33±1.00）ms,与另外3种频率所诱发脊髓反射相比差异有统计学意义（P<0.05）。 结论不同电压的ESCES可诱导出不同来源的脊髓反射。长潜伏期成分可能是兴奋脊髓背根传入神经后引起的单突触反射;短潜伏期成分可能是直接兴奋脊髓内的运动神经元或运动纤维后向下传导引起的肌肉兴奋电反应。4种较高频ESCES所诱发的不规律出现的脊髓反射,可能是一种单突触反射。较高频刺激时脊髓反射的不规律出现可能与较高频刺激的抑制作用有关。     

糖尿病肾病的中医治疗

糖尿病肾病（DN）是糖尿病常见的并发症之一,也是导致终末期肾病的常见原因之一。临床研究显示,DN一旦进展至临床蛋白尿阶段便难以逆转,全面代谢控制是防治DN的基础,但目前临床尚乏十分有效的防治方法。笔者查阅了近年中医治疗该病的有关文献,对DN的治疗从辨证论治、专方专药及单味药、提取物等方面以综述,以期更好地指导DN的防治。     

68株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药性分析

目的了解本院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的感染状况及其对临床常用抗生素的耐药特点。方法按常规方法分离金黄色葡萄球菌,用MicroScan A／s-4自动细菌鉴定系统进行鉴定和药敏试验,用苯唑西林药敏纸片在MH平板上以K—B琼脂扩散法来判定MRSA。结果分离出MRSA68株,占金黄色葡萄球菌（SA）感染总数的55．74％;全部对万古霉素敏感;对利福平耐药率较低;对其他抗生素耐药率都很高。结论MRSA分离率及耐药率相当高,因此,应合理选用抗生素治疗及控制好院内感染。     

826例汶川地震住院伤员伤情特点及救治分析

目的 分析汶川地震住院伤员的伤情特点及救治,为类似自然灾害所致伤员的救治提供参考.方法 利用<创伤数据库系统>V3.0收集录入的四川大学华西医院和德阳市第一和第二人民医院收治的地震伤员资料,对伤员一般情况、伤情特点和治疗措施进行分析比较.结果 共收集资料较为完整、符合要求的伤员826例,其中男410例,女416例;年龄1～102岁,平均45.8岁.其中31～60岁伤员占总数的50.2%.有职业记录的477例中,农民占43.8%(209/477),工人占15.7%(75/477),在校学生占14.1%(67/477).钝器伤(53.2%)、挤压/掩埋(22.5%)和跌倒/坠落(15.0%)为前3位致伤原因.德阳市两家医院收治的伤员入院时间主要集中在地震后4 d内,占92.1%;华西医院收治的伤员入院时间主要集中在震后3～9 d(81.7%).骨科伤员占伤员总数的59.2%.伤员的AIS主要集中在1～3分的区域.严重多发伤(ISS>16分)发生率为8.2%.入院后接受内固定术120例(34.1%),清创缝合术103例(29.3%)及外固定术55例(15.6%).肢体离断术22例(6.3%),颅内手术仅2例(0.6%).结论 地震导致的建筑物倒塌是主要致伤机制,伤员以骨伤较多.损伤多在AIS 1～3分范围,严重多发伤较少.伤员接受专业救治时间普遍较晚,伤员后送分流较迟,提示对特大自然灾害所致伤员的早期救治和及时高效后送救治的能力亟待加强.     

胸腔置管引流注射高聚生治疗难治性恶性胸腔积液23例分析

目的：观察应用高聚生治疗难治性恶性胸腔积液的临床疗效和不良反应。方法：对23例临床难治性恶性胸腔积液进行胸腔引流,经2～3d引流干净全部胸水后经导管注入高聚生100ng,同时处理相关不良反应。4～7d1次,按疗效重复引流给药,1个月后评价疗效和相关不良反应。结果：23例患者中完全缓解6例,部分缓解13例,有效率82．6％（19／23）。主要不良反应包括轻微胸痛、发热反应等。结论：高聚生治疗难治性恶性胸腔积液有明显疗效,不良反应患者可以耐受,值得临床推广应用。     

IL-4对IL-1β诱导的大鼠系膜细胞增殖的抑制作用观察

目的 观察IL-4对IL-1β诱导的大鼠系膜细胞增殖过程中前列腺素B(PGB)的释放及环氧化酶2(COX-2)mRNA和蛋白表达的抑制作用,探讨IL-4抗肾小球硬化的机制。方法 采用体外培养的大鼠系膜细胞(MC),MTT法检测IL-1β促系膜细胞增殖的时效和量效关系,设立空白对照组、IL-1β组、IL-4 IL-1β组、NS-398组、NS-398 IL-1β组、吲哚美辛组、吲哚美辛 IL-1β组,采用酶联免疫吸附法检测各组MC培养上清中PGB的含量,应用RT-PCR和Western blot检测各组COX-1和COX-2 mRNA及蛋白表达水平。结果 IL-1β在12、24、48h,浓度为0．1～100ng／ml时均有促MC增殖的作用,其中以孵育24h、浓度为2ng／ml时作用最强。IL-4、NS-398、吲哚美辛均能抑制IL-1β诱导MC产生PGB,IL-4的抑制作用(抑制率84．9％)强于NS-398(抑制率56．5％),吲哚美辛(抑制率41．2％)的抑制作用最弱。RT-PCR和Western blot显示IL-4和NS-398均能明显抑制COX-2 mRNA和蛋白的表达,吲哚美辛能抑制COX-1和COX-2 mRNA及蛋白表达,但对COX-2的抑制作用较弱。结论 IL-4能显著抑制IL-1β诱导的系膜细胞增殖,下调COX-2的表达,减少PGB的产生,从而发挥抗肾小球硬化的作用。     

冠心病患者应用潘生丁试验的对比分析及护理

目的为了认识冠心痛无症状心肌缺血的危险性.方法运用潘生丁试验将120倒冠心病患者分两组进行对比分析.结果试验中有症状组出现典型心绞痛率显著高于无症状组,而两组心肌缺血程度及阳性栓出率无明显差异.结论无症状心肌缺血应引起高度重视,本文详细介绍了试验的方法及护理配合.