hsa-miR-655靶向调控绝经后骨质疏松症肾阴虚证关联基因CLCF1的实验研究

目的研究靶向调控绝经后骨质疏松症肾阴虚证关联基因CLCF1的microRNAs。方法通过生物信息学预测可能与CLCF1基因3'非编码区(3'Non encoding area,3'UTR)作用的miRNAs;将人工合成的野生型和突变型CLCF1基因3'UTR区序列克隆至荧光素酶报告质粒;将重组荧光素酶报告载体和miRNAs表达载体共转染293T细胞,用双荧光素酶检测试剂盒测定荧光素酶活性,验证miRNA对CLCF1基因翻译水平的抑制作用。结果生物信息学预测结果显示,CLCF1基因3'UTR与hsa-miR-655、hsa-miR-300、hsa-miR-381、hsa-miR-374c、hsa-miR-515等5个miRNAs存在互补结合位点;双荧光素酶实验结果表明,与对照组比较,hsa-miR-655组荧光活性下调至33.09%,差异有显著性意义(P=0.001),当使用突变型CLCF1基因3'UTR,荧光活性上调至67.22%,说明hsa-miR-655对CLCF1 3'UTR的基因表达水平有显著抑制作用;与对照组比较,hsa-miR-374c和hsa-miR-515组荧光活性分别下调27.27%(P=0.000)和27.74%(P=0.006),二者对CLCF1 3'UTR的基因表达水平有一定抑制作用;hsa-miR-300和hsa-miR-381组与对照组相比,荧光活性分别下调6.35%(P=0.213)和9.89%(P=0.127),二者对CLCF1 3'UTR的基因表达无明显抑制作用。结论 hsa-miR-655通过靶向结合CLCF1 mRNA的3'UTR区,在转录后水平负性调控绝经后骨质疏松症肾阴虚证关联基因CLCF1的表达。     

绝经后骨质疏松症肾阴虚证的免疫蛋白相关研究

目的探讨绝经后骨质疏松症肾阴虚证与LRG1、SRC蛋白表达变化的关联性。方法随机选择绝经后骨质疏松症患者,中医辨证肾阴虚证组25例,30例健康绝经后妇女为对照组,Western-blot法检测外周血LRG1、SRC的蛋白表达。结果肾阴虚证组LRG1蛋白表达水平(1.2391±1.5860)高于对照组(0.8033±0.7485),有升高趋势,差异无统计学意义(Z=-0.085,P=0.933),肾阴虚证组SRC蛋白表达水平(0.7873±0.6275)与对照组(0.3712±0.4064)比较,差异有统计学意义(Z=-2.874,P=0.004)。结论骨质疏松症肾阴虚证与SRC蛋白表达升高相关联。     

别让孩子透过“镜片”看世界

日益增多的“四眼小博士” 放眼望去,小学课堂里“四眼小博士”们看着黑板的认真劲儿可谓一个赛过一个,可这鼻梁上架的眼镜片也是一个比一个厚。以前,小学生戴着眼镜还会被人多瞅上几眼,现在早已经见怪不怪了。如今,眼镜店里去验光的小孩子越来越多,当他们还不知道世界的美好时,就要透过厚厚的镜片来认识世界。小小年纪就被近视缠上了身,这以后的麻烦事儿还会少吗？吃饭、出行都有诸多不便,甚至为眼底病变埋下潜在风险。     

三叉神经营养性综合征1例

报告1例三叉神经营养性综合征。55岁男性患者,右三叉神经第2分支支配区域患带状疱疹,3周后仍有局部疼痛,且右鼻翼部皮损进行性溃烂。查体:右鼻翼6mm×4mm大小三角形溃疡,神经系统检查示右眼裂至口裂之间皮肤痛、温觉减退。5个月后复诊,右颜面部皮肤仍瘙痒,右鼻翼溃疡未缩小。诊断:三叉神经营养性综合征。     

BCL-2凋亡基因多态性与潮汕食管鳞癌的关联研究

目的：初步探究B细胞淋巴瘤因子2基因-938(C/A)位点的多态性和潮汕食管鳞癌患者临床表型、易感性、淋巴结转移风险的关系。方法本研究收集了110例潮汕食管鳞癌患者(2012年1月至2014年12月)的癌组织标本以及相关临床资料和110例健康人群的正常食管黏膜标本。采用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性分析(PCR-RFLP)技术,分析两组中BCL-2基因-938(C/A)位点多态性;采用流式细胞术及细胞免疫荧光技术,分析食管鳞癌细胞周期和凋亡情况,对BCL-2蛋白的表达进行定量分析。采用χ2检验比较不同基因组BCL-2基因-938(C/A)多态性位点基因型的分布频数与食管鳞癌临床分期及淋巴结转移的关联,BCL-2蛋白表达与食管癌蛋白肿瘤病理特征的关系。结果将食管鳞癌的一些临床表型进行关联分析,对照组AA基因型频率显著高于试验组(P<0.05)。将试验组按不同临床特征分层后的基因型频率分布提示,TNM分期为I期+II期者,其AA基因型频率明显高于TNM分期为Ⅲ期+Ⅳ期者,差异具有统计学意义(P<0.05),表明含AA基因型的患者病情轻于不含此基因型的患者。结论 BCL-2的表达高低与食管癌患者的病情严重程度呈现正相关,且BCL-2的高表达与食管癌患者的不良预后有关。     

预计困难插管患者使用Airtraq喉镜、Shikani喉镜和Macintosh喉镜行气管插管的比较

目的 探讨Airtraq喉镜、Shikani喉镜和Macintosh喉镜在预计困难插管患者中行气管插管的应用价值.方法 行全麻插管手术预计困难插管患者75例,随机分为Airtraq喉镜组(A组)、Shikani喉镜组(S组)和Macintosh喉镜组(M组),三次内插管成功者入选本研究,每组25例.记录插管时间,麻醉诱导前(T1)、诱导后(T2)、插管结束即刻(T3)和插管后3 min(T4)时的MAP和HR.同时观察各组患者的声门暴露程度以及有无咽喉损伤.结果 A组插管时间最短,其次为S组,M组最慢,A组明显短于S组和M组(P＜0.05).A组插管成功率高于S组和M组(P＜0.05).与T2时比较,T3、T4时M组MAP明显升高、HR明显增快(P＜0.05).T3、T4时M组MAP高于A组,HR快于A组(P＜0.05).A组声门完全显露率最高,其次为S组,M组最低,A组明显优于S组和M组(P＜0.05).A组咽喉损伤发生率低于M组(P＜0.05).结论 在预计困难插管条件下,与Shikani喉镜和Macintosh喉镜比较,使用Airtraq喉镜可以缩短插管时间,提高插管成功率,减少气管插管时心血管应激反应,维持血流动力学稳定,降低咽喉损伤的发生率.     

绝经后骨质疏松症肾阴虚证差异表达基因CLCF1 蛋白表达研究

目的 研究绝经后骨质疏松症肾阴虚证与CLCF1、ASBl和PROK2基因蛋白表达的相关性。方法 病例对照方法,中医辨证肾阴虚证组29例,28例健康绝经后妇女为对照组,Western blot法检测外周血CLCF1、ASB1和PROK2蛋白表达水平。 结果 骨质疏松症肾阴虚组CLCF1蛋白表达水平（0.483±0. 151 )明显低于对照组（0.706± 0.255),P = 0.0001,统计学有非常显著性差异;肾阴虚组ASB1和PROK2蛋白表达与健康对照组比较,差异均无统计学意义（P>0.05>。结论 骨质疏松症肾阴虚证CLCF1蛋白表达水平显著低于健康对照组,骨质疏松症肾阴虚证与CLCF1蛋白下调存在关联。     

人工冬虫夏草对肺纤维化模型早期肺泡炎阶段的干预作用

目的:探讨人工冬虫夏草对博莱霉素诱导大鼠肺纤维化早期肺泡炎阶段的干预作用。方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组(两组均NS灌胃)、强的松组(强的松6 mg·kg-1·d-1灌胃)和虫草菌液组(虫草菌液5 g·kg-1·d-1灌胃),每组各10只。气管内注射博莱霉素建模。肺组织标本进行病理形态学观察及肺泡炎评分;肺泡灌洗液(BLAF)进行细胞总计数及炎症细胞分类计数;BLAF上清检测乳酸脱氢酶(LDH)、髓过氧化物酶、嗜酸粒细胞阳性离子蛋白(ECP)、白介素(IL)-5含量;免疫组化检测肺组织肿瘤坏死因子(TNF)-α表达。结果:与正常组比,模型组肺组织肺泡炎评分升高(P<0.01),BLAF细胞总数、中性粒细胞、淋巴细胞、嗜酸粒细胞比例以及BLAF中的LDH、ECP、IL-5含量明显升高(P<0.05),肺组织TNF-α表达增加(P<0.01);与模型组比,强的松和虫草菌液组肺泡炎评分减少(P<0.01),BALF中细胞总数、淋巴细胞、中性细胞和嗜酸粒细胞比例减少以及LDH、ECP、IL-5含量降低(P<0.05),肺组织TNF-α表达下调(P<0.01)。结论:虫草菌液能减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化早期肺泡炎,可能是通过下调IL-5、TNF-α表达,减少嗜酸粒细胞浸润而实现的。     

续苓健骨方对骨质疏松模型大鼠骨密度及骨生物力学的影响

目的：研究续苓健骨方对骨质疏松模型大鼠骨密度、骨生物力学指标的影响。方法将40只SD雌性大鼠按随机数字表法分为假手术组、模型组、钙尔奇D组和续苓健骨方组各10只。除假手术组外,其余各组制备骨质疏松模型。造模后30 d开始灌胃给药,钙尔奇D组大鼠灌胃钙尔奇D混悬液0.126 g/kg;续苓健骨方组灌胃续苓健骨方药液15 g/kg;假手术组和模型组灌胃等体积生理盐水,1次/d。给药12周后取材。采用双能X射线检测左胫骨骨密度,三点弯曲法行骨生物力学检测。结果续苓健骨方组骨密度[(0.244±0.022)g/cm2比(0.195±0.017)g/cm2]较模型组增高(P＜0.01),且明显高于钙尔奇 D组[(0.244±0.022)g/cm2比(0.223±0.013)g/cm2];续苓健骨方组断裂点荷载[(0.072±0.036)kN 比(0.041±0.015)kN]、应力[(843.754±428.722)N/mm2比(482.084±176.646)N/mm2]较模型组增高(P＜0.05)。结论续苓健骨方可提高骨质疏松模型大鼠的骨密度,改善骨生物力学性能。     

hsa-miR-655靶向CLCF1基因对人成骨肉瘤MG63 细胞OPG/RANKL系统表达的影响

目的探讨hsa-miR-655通过靶向调控心肌营养素样细胞因子1(cardiotrophin-like cytokine factor 1,CLCF1)基因表达,对人成骨肉MG63细胞系增殖、护骨素(osteoprotegerin,OPG)和核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of NF-κB ligand,RANKL)表达的影响。方法通过hsa-miR-655慢病毒转染MG63细胞进行功能获得实验。实验分阴性对照组(NC组)和hsa-miR-655过表达组(OE组),荧光显微镜和流式细胞术(flow cytometry analysis,FCM)评估转染效率,Cell Counting Kit-8(CCK-8)法检测细胞增殖能力,FCM检测细胞周期分布,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测hsa-miR-655、CLCF1、OPG和RANKL mRNA的水平,蛋白质印迹法(Western blot)检测CLCF1、OPG及RANKL蛋白的变化。结果荧光显微镜和FCM显示对照组和miR-655过表达组感染效率为80%以上;qRT-PCR结果显示,相对于对照组,过表达组MG63细胞hsa-miR-655表达上调,差异有统计学意义(P=0.0004);CLCF1 mRNA水平未见明显变化(P=0.0986);过表达组OPG(P=0.0384)、RANKL(P=0.0007)mRNA均有所上调,差异具有统计学意义(P0.05);Western blot结果显示,过表达组CLCF1蛋白水平表达下调(P=0.0053);与对照组比较,过表达组OPG(P=0.0021)、RANKL(P=0.0002)蛋白均上调,而OPG/RANKL比值却降低(P=0.0078),差异具有统计学意义(P0.05);CCK-8细胞增殖实验结果显示,miR-655过表达后抑制MG63细胞增殖;FCM检测细胞周期结果显示,miR-655过表达后MG63细胞G0/G1期细胞比例增加,S期减少,差异具有统计学意义(P0.05)。结论hsa-miR-655通过负调控CLCF1基因的表达,抑制MG63细胞的增殖,下调OPG/RANKL的比值。