前列腺癌干细胞分离方法的对比及筛选

背景：前列腺癌干细胞是前列腺癌复发侵袭的重要原因,目前研究难点在于前列腺癌干细胞分离技术效率较低。目的：探索高效地从人前列腺癌PC-3及LNCap细胞株分离前列腺癌干细胞的方法。方法：采用含血清贴壁培养法及无血清悬浮培养法培养PC-3及LNCap细胞株,然后利用流式细胞表面标记CD133及CD44检测两种细胞在不同培养条件下可获取前列腺癌干细胞的比例,同时采用诱导分化实验初步鉴定前列腺癌干细胞特性。结果与结论：PC-3及LNCap细胞能在添加生长因子的无血清培养基中形成悬浮细胞球,接种在含血清培养基后可以诱导分化为贴壁细胞;无血清培养组的CD44^＋/CD133^＋细胞比例：PC-3为0.59%,LNCap为1.71%,含血清培养组中的CD44^＋/CD133^＋细胞比例：PC-3为0.32%,LNCap为0.73%,其中LNCap细胞采用两种方法所获的CD44^＋/CD133^＋细胞均高于PC-3所获的的细胞（P〈0.05）,在两种细胞中无血清悬浮培养和含血清贴壁培养差异无显著性意义（P〉0.05）,但无血清悬浮培养周期长,获得细胞数相对较少,直接影响分选后肿瘤干细胞功能测定。因此可以证实含血清贴壁培养LNCap细胞较无血清悬浮培养法更能高效快捷的获取前列腺癌干细胞。     

儿童手足口病影响因素病例对照研究

目的 探讨儿童手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)发生的影响因素.方法 收集江苏省手足口病哨点监测医院手足口病临床病例396例,肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染的手足口病病例195例,分别进行1:1配对病例对照研究,应用SPSS 13.0软件进行单因素和多因素条件logistic回归分析.结果 多因素条件Logistic回归分析表明,城乡(OR=1.999,95%C/:1.433～2.789)、家庭收入(OR=0.806,95%C/=0.692～0.938)、饭前便后洗手情况(OR=0.719,95%C/=0.590-0.877)、最近1周外出就餐情况(OR=1.914,95%C/=1.019～3.596)、最近1周接触患者史(OR=3.771,95%C/=2.137-6.654)为手足口病临床病例的影响因素;城乡(OR=2.417,95%C/=1.522-3.839)、饭前便后洗手情况(OR:0.693,95%C/=0.517-0.929)、近1周接触患者史(OR=3.942,95%C/=1.808～8.594)为EV71感染的手足口病影响因素.结论 居住地为农村,最近1周患者接触史是手足口病发病的主要影响因素;饭前便后洗手是降低感染机会的保护因素.     

基于人工智能的骨龄辅助评价系统对四川地区完全性生长激素缺乏症患儿骨龄研究

目的探讨采用基于"人工智能(AI)的骨龄辅助评价系统(上海初云医疗科技有限公司与四川大学华西第二医院合作开发)"(以下简称为AI系统)对完全性生长激素缺乏症(CGHD)患儿诊断及骨龄评价准确性。 方法选择2014年7月至2019年11月，于四川大学华西第二医院确诊的66例来自四川地区CGHD患儿为研究对象，纳入研究组。选择同期于病例收集医院儿童保健科进行骨龄测定的67例来自四川地区身高达标儿童作为对照，纳入对照组。对每例受试儿进行左手腕关节正位X射线摄片骨龄测定，由2位医师采用《TW₂骨龄评分法中国未成年人南方标准》(以下简称为TW₂CHN)》与《TW₃骨龄评分法标准》(以下简称为TW₃)，盲法评价受试儿TW₂CHN-桡、尺、掌指骨(RUS)与TW₂CHN-腕骨(carpal)、TW₂CHN-20、TW₃-RUS及TW₃-carpal骨龄(以下简称为5种传统骨龄)，以及以同性别、年龄身高达标儿童5种传统骨龄为标准，计算受试儿5种传统骨龄百分位数。同时，采用AI系统分别对每例受试儿采取TW₂CHN与TW₃法，评价其AI-TW₂CHN-RUS、AI-TW₂CHN-carpal、AI-TW₂CHN-20、AI-TW₃-RUS及AI-TW₃-carpal骨龄(以下简称为5种AI骨龄)及其相应百分位数。以上述5种传统骨龄＋5种AI骨龄(以下简称为10种骨龄)相应的P₅₀、P₂₅、P₁₀、P₃值(统称为P_n值)作为诊断CGHD患儿临界值，分别计算其诊断CGHD患儿的敏感度、特异度、约登(Youden)指数、准确率、阳性似然比、阴性似然比、阳性预测值、阴性预测值。采用Kappa值评价2组受试儿5种传统骨龄百分位数与对应的5种AI骨龄百分位数评价结果的一致性，以及2位医师对2组受试儿TW₂CHN-RUS骨龄百分位数评价结果一致性。绘制上述10种骨龄百分位数诊断CGHD患儿的受试者工作特征(ROC)曲线，并计算曲线下面积(AUC)。采用配对t检验，对2组受试儿TW₂CHN骨龄与TW₃骨龄进行比较。本研究遵循的程序符合2013年新修订的《世界医学协会赫尔辛基宣言》要求。2组受试儿年龄、性别构成比等一般临床资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。 结果①采用10种骨龄的P_n值分别作为诊断CGHD临界值，对133例受试儿CGHD诊断结果显示，除了TW₃-RUS骨龄中，以骨龄≤P₁₀作为诊断CGHD患儿临界值时的诊断准确率最高(85.0%)，TW₂CHN-RUS、TW₂CHN-carpal、TW₂CHN-20、TW₃-carpal、AI-TW₂CHN-RUS、AI-TW₂CHN-carpal、AI-TW₂CHN-20、AI-TW₃-carpal、AI-TW₃-RUS骨龄中，均为以骨龄≤P₂₅作为临界值时，对CGHD的诊断准确率最高，分别为81.9%、75.2%、88.0%、78.2%、75.2%、73.6%、81.2%、72.9%、78.9%。②一致性检验结果显示，2组受试儿TW₂CHN-RUS与AI-TW₂CHN-RUS、TW₂CHN-carpal与AI-TW₂CHN-carpal、TW₂CHN-20与AI-TW₂CHN-20、TW₃-RUS与AI-TW₃-RUS、TW₃-carpal与AI-TW₃-carpal骨龄百分位数评价结果均为中等一致性，Kappa值分别为0.445、0.578、0.570、0.446、0.430(均为P<0.001)。③对2位医师对2组受试儿TW₂CHN-RUS骨龄百分位数评价结果进行一致性检验显示，其Kappa值为0.790(P<0.001)，一致性较高。④绘制10种骨龄百分位数评价结果诊断CGHD的ROC曲线分析结果显示，TW₂CHN-RUS、TW₂CHN-carpal、TW₂CHN-20、TW₃-carpal、TW₃-RUS、AI-TW₂CHN-RUS、AI-TW₂CHN-carpal、AI-TW₂CHN-20、AI-TW₃-carpal、AI-TW₃-RUS骨龄百分位数诊断CGHD患儿的AUC分别为0.932、0.859、0.915、0.895、0.844、0.823、0.805、0.866、0.860、0.764(均为P<0.001)。⑤133例受试儿的TW₃-RUS、TW₃-carpal、AI-TW₃-RUS、AI-TW₃-carpal骨龄，均分别显著低于TW₂CHN-RUS、TW₂CHN-carpal、AI-TW₂CHN-RUS、AI-TW₂CHN-carpal骨龄，并且差异均有统计学意义(t＝21.746、25.287、16.498、9.290，P<0.001)。 结论TW₂CHN法、TW₃法对CGHD患儿骨龄评价及诊断均有临床价值，TW₂CHN-RUS骨龄对于CGDH患儿诊断效能高。四川地区儿童TW₃骨龄较TW₂CHN骨龄低，TW₃法可能不完全适用于四川地区儿童骨龄评价。AI系统对于四川地区CGHD患儿骨龄评价结果与传统骨龄评价结果具有中等一致性，可为临床医师评价受试儿骨龄提供帮助。     

许可慰:把队员的安全保障放在第一位

最担心医疗队员的安全和健康《中国卫生》:医院第二批医疗队出发前,都做了哪些准备工作?许可慰:第二批医疗队在出发前接到的任务是接管协和医院西院区其中的一个重症病区,因此我们在人员方面主要做了以下几方面的安排:首先是医疗队成员以呼吸科。     

濒死期青年肿瘤患者父母照护体验的现象学研究

目的 探究青年肿瘤患者父母在照护濒死期患者时的体验,为制定针对性干预措施提供参考。方法 采用现象学研究,选取19名濒死期青年肿瘤患者的父母照护者进行深度访谈,访谈资料通过Colaizzi 7步分析法进行整理分析。结果 共提炼出4个主题和14个亚主题：身体状况受损(身体负荷过重、健康水平下降、语言表达不畅、行为改变),心理复杂多变(坚强与无助、温暖与孤独、质疑与逃避、敏感与恐惧),支持系统不足(经济支持不足、知识支持不足、家庭支持不足、社会支持不足),灵性关怀缺乏(宗教信仰缺失、死亡教育缺乏)。结论 父母照护濒死期青年肿瘤患者过程中,身心健康受到威胁,医护人员应联合家庭和社会建立支持性关怀系统,为父母照护者提供身心社灵全方位的关怀,从而提高照护能力和改善哀伤情绪。     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子对结肠癌肝转移的促进作用及其可能机制

目的：探讨粒细胞-巨噬细胞集落因子（granulocyte-macrophage colony stimulating factor,GM-CSF）对结肠癌肝转移的促进作用及其可能机制。方法：采用稳定转染方法将GM-CSF 基因以及靶向GM-CSF 的shRNA 分别导入人结肠癌细胞系HCT116 和SW480,用ELISA法检测GM-CSF表达水平。脾内注射结肠癌细胞建立结肠癌肝转移模型,部分模型小鼠隔天腹腔注射不同剂量（3、0.6 μg）的重组人GM-CSF。模型建立后4 周后观察肝大体及肿瘤转移灶,实时荧光定量PCR检测神经钙黏素（Ncadherin）和基质金属蛋白酶2（matrix metalloproteinase 2,MMP2）的表达,Western blotting 检测上皮钙黏素（E-cadherin）的表达。结果：根据GM-CSF表达量建立GM-CSF低、中、高表达细胞系（GMlo、GMint、GMhiHCT116）和GMKDSW480 细胞系。大体和病理结果均显示,接种高表达GM-CSF的HCT116 细胞或外源性给予GM-CSF明显增加小鼠结肠癌肝转移灶数量,而敲低GM-CSF的作用则相反。GM-CSF能够显著上调N-cadherin 和MMP2 的表达,同时下调E-cadherin 的表达（P<0.05）。结论：GM-CSF能够促进结肠癌移植瘤的肝转移,该效应可能与E-cadherin表达的下调和N-cadherin以及MMP2表达的上调有关。     

胸外科储备人才培养的初步探究

本研究以广州医科大学临床医学南山班为基础,成立以兴趣为导向的胸外科学习协作组。实施以早临床、早科研、英语培优计划、以胸外科协作组为核心的多学科诊疗（multiple disciplinary team,MDT）学习协作、裸眼3D胸腔镜系统下加速临床技能培训、新媒体微信公众号运营下推送科研进展培养科研思维等手段对入选学生进行全方位培养。2013至2017级共10位本科生招募进胸外科学习协作组,招募组员在临床技能、科研、升学方面都显示出一定的优势。说明将部分胸外科临床教学与科研思维的培养提前下沉至本科生教育,可以为胸外科储备人才的培养做铺垫,将来可以制定更加详细和个性化的方案因材施教。     

氯化锂-重复低剂量匹罗卡品致大鼠癫痫模型制作

目的:建市氯化锂一重复低剂量匹罗卡品致痫大鼠模型.方法:雄性成年sD大鼠173只.随机分为对照组、非药物干预组和药物干预组.氯化锂3mEq/kg腹腔注射(IP),19h后给予低剂量匹罗卡品10mg/kg,每隔30min 1次,重复2-4次.观察大鼠行为、脑电、模型成功率、死亡率、自发性癫痫发作及其潜伏期和发作的严重程度.结果:氯化锂-重复低剂量匹罗卡品大鼠癫痫模型在匹罗卡品1～4剂后发生癫痫持续状态,痫性发作距离注射时间平均为16min,成功率73%,匹罗卡品用量平均25.9mg/kg,持续90min被终止者死亡率低于10%.自发性癫痫发作平均每天2.4～5.7次,潜伏期平均40天.发作程度均达到Ⅲ级以上的痫性发作,绝大多数为Ⅳ/Ⅴ级,脑电类似人类颞叶癫痫.对照组大鼠均为0级发作.结论:氯化锂-重复低剂量匹罗卡品诱导的大鼠癫痫模型具有制作方便、致痫成功率高和动物死亡率低特点,同人类癫痫持续状态和颞叶癫痫有相似的行为和脑电图改变.     

湖南省肿瘤登记地区2009~2012年恶性肿瘤发病及死亡资料分析

[目的]了解湖南省2009～2012年肿瘤登记地区恶性肿瘤发病死亡情况,为肿瘤防治提供参考数据.[方法]对湖南省2009～2012年肿瘤登记地区恶性肿瘤发病死亡数据进行分析,计算主要肿瘤的发病率、死亡率、顺位、0～74岁累积率等指标,中标率的标准人口采用2000年中国人口普查的人口构成,世标率的标准人口使用的是Segi's世界人口构成.[结果]2009～2012年湖南省6个肿瘤登记点人口人年数1 011.3867万人年,共收集新发病例19 695例,死亡病例12 466例.病理诊断率72.16％,只有死亡证明书比例3.20％,死亡发病比为0.63.全省恶性肿瘤发病率为194.73/10万,中标率为153.62/10万,世标率为149.26/10万,0～74岁累积率为17.37％.城市地区恶性肿瘤发病率为198.22/10万,而农村为193.36/10万(x2=0.06,P＞0.05),城市农村粗发病率比较无统计学差异,但标化率城市高于农村.男性恶性肿瘤发病率为219.18/10万,而女性为168.60/10万(x2=6.46,P＜0.05).男性发病前5位的是肺癌、肝癌、胃癌、结直肠肛门癌、鼻咽癌;女性发病前5位的是肺癌、乳腺癌、宫颈癌、肝癌、结直肠肛门癌.2009～2012年湖南省肿瘤登记地区居民恶性肿瘤死亡率为123.26/10万,中标率为95.10/10万,世标率为92.84/10万,0～74岁累积率为10.97％.城市地区恶性肿瘤死亡率为121.78/10万,农村为123.84/10万,城市死亡率和农村比较相差不大(x2=0.02,P＞0.05),但中标率和世标率城市高于农村.男性恶性肿瘤死亡率为154.11/10万,高于女性的90.28/10万(x2=16.81,P＜0.01).男性死亡率前5位为肺癌、肝癌、胃癌、结直肠癌、鼻咽癌,女性死亡前5位为肺癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、结直肠肛门癌.[结论]肺癌、肝癌、胃癌、结直肠肛门癌、鼻咽癌及女性乳腺癌、宫颈癌等是湖南省发病率、死亡率较高的恶性肿瘤,应作为湖南省恶性肿瘤防治的主要癌种.     

国人Stargardt病患者ABCA4基因突变分析与表型特征

目的通过对眼底黄色斑点症患者ABCA4基因突变分析,分析国人Stargardt病(STGDI)患者中ABCA4基因突变特点及其表型特征。设计回顾性病例系列。研究对象北京同仁医院可疑Stargardt病患者119例,其中17例家族史明确,102例为散发。方法利用PCR扩增DNA直接测序方法检测患者ABCA4基因50个编码外显子及外显子与内含子交界区,并记录患者的表型特征。主要指标ABCA4基因测序结果、家族史、眼底像、相干光断层扫描(OCT)、眼底自发荧光(AF)、视网膜电图(ERG)、视力。结果 119例STGDI患者中110例(92.4%)检测到2个及以上ABCA4基因致病突变,9例(7.6%)检测到1个致病突变。本研究共检出136种突变,其中新发现突变16种。基因突变中55.1%(75/136)为错义突变,15.4%(21/136)为缺失或插入,17.6%(24/136)为剪接位点突变,11.8%(16/136)为无义突变。最常见突变为无义突变p.Y808X,其等位基因频率最高为17次(7.1%)。STGDI患者平均发病年龄(12.85±9.01)岁,平均最佳矫正视力(0.11±0.12)。结论本研究结果拓展了ABCA4基因突变谱。中国人STGDI患者发病年龄早、视力损伤重,且ABCA4基因特点与其他种族明显不同。