胚胎干细胞源性肝卵圆细胞的体外研究

肝卵圆细胞对肝脏生长发育有重要意义。已建立的啮齿类动物肝卵圆细胞诱导实验模型使人们对啮齿类动物肝卵圆细胞的认识有了很大的提高，诱导过程烦琐耗时，显然不适用于人类。现将本研究结果报道如下     

半成熟树突状细胞在胚胎干细胞源性肝细胞移植中诱导耐受的研究

目的 在小鼠胚胎干细胞(ESC)源性肝细胞移植中,应用半成熟树突状细胞(smDC)诱导免疫耐受.方法 绿色荧光蛋白(GFP)标记的129小鼠ESC按前期方法向肝细胞诱导分化,129小鼠smDC亦按前期方法由骨髓单核细胞诱导获得.smDC注入BALB/C小鼠3d后,再将ESC分化的肝细胞移植入BALB/C小鼠肝被膜下.检测肝转氨酶、外周血白细胞介素-2(IL)-2和IL-10水平变化,观察移植细胞生长及淋巴细胞浸润情况.结果 移植后7d,smDC组肝功能指标丙氨酸转氨酶(ALT)为212.58 U/L,较对照组512.27 U/L明显改善(P＜0.05),7d和14 d外周血IL-10水平较对照组明显升高,而IL-2水平较对照组明显降低(P＜0.05).移植细胞存活率在14、21 d smDC组较对照组明显增高,CD4 +T细胞浸润较对照组明显减轻.结论 在ESC源性肝细胞异基因移植中,smDC预输注可诱导部分免疫耐受,有望作为一种良好的移植耐受原应用于ESC分化细胞移植研究中.     

青少年性健康与性教育现状调查分析

2003年3月,浙江省教育厅、浙江省计划生育委员会联合下发了《浙江省中小学人口与青春期性健康教育指导纲要》。为了全面落实《纲要》的精神,温州市计生委组织相关单位和人员在市区范围内开展青少年性健康与性教育现状调查。     

胚胎干细胞源性肝样细胞移植治疗急性肝功能衰竭模型小鼠

背景:采用胚胎干细胞源性肝样细胞进行移植治疗时,诱导分化的肝样细胞致瘤性及其对肝脏生化代谢的影响有待观察.目的:评价胚胎十细胞源性肝样细胞移植对急性肝功能衰竭模型小鼠的治疗效果.设计:随机对照观察.单位:中山大学附属第一医院.材料:实验于2005-01/2006-102在中山大学附属第一医院中心实验室完成.选用转染绿色荧光蛋白基因的小鼠D3-ES细胞(129系小鼠分离建系),由中山大学眼科中心黄冰教授馈赠.选用40只清洁级6周龄D3-129系小鼠,雌雄不限,由中山大学实验动物中心提供,许可证号码为SCXK(粤)2004-0011,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.转化生长因子、碱性成纤维细胞生长因子、肝细胞生长因子为美国Gibco BRL公司产品.方法:[1]利用转化生长因子、成纤维细胞生长因子和肝细胞生长因子联合诱导小鼠D3-ES细胞分化为肝样细胞,将细胞悬液以2.0×10(6)只注入20只小鼠肝包膜下,其余20只小鼠作为对照组,仅给予生理盐水注射.[2]注射后24h,采用5 μL/20g四氯化碳腹腔注射,诱发两组小鼠急性肝功能衰竭,观察小鼠生存质量及平均生存时间:急性肝功能衰竭24 h,取小鼠后腔静脉血进行总胆红素、谷丙转氨酶、白蛋白、血糖、凝血酶原时间等肝功能指标检测;小鼠死亡后取肝脏标本,观察有无肿瘤生成,应用苏木精-伊红染色和免疫组化观察移植细胞生长和白蛋白表达情况.主要观察指标:[1]小鼠生存质量及平均生存时间.[2]肝功能指标检测结果.[3]移植细胞体内生长及肿瘤形成情况.结果:[1]小鼠生存质量及平均生存时间:诱发急性急性肝功能衰竭后,对照组先出现共济失调等中枢神经系统症状,对照组14只及移植组8只出现腹水.对照组平均存活时间短于移植组,差异有统计学意义(23,62 h,P<0.05).[2]小鼠肝功能指标检测结果:对照组及移植组总胆红素及谷丙转氨酶较造模前升高,白蛋白及血精较造模前低,凝血酶原时间较造模前延长,差异有显著性意义(P<0.01),移植组总胆红素及谷丙转氨酶较对照组下降,血糖较对照组高,凝血酶原时间较对照组短,差异有显著性意义(P<0.05).[3]移植细胞体内生长及肿瘤形成情况:移植组小鼠死亡后取肝脏标奉做病理切片观察,发现肝脏组织结构无明显改变,无肿瘤形成,移植细胞与小鼠肝样细胞形成很好的排列连接并表达白蛋白.结论:胚胎干细胞源性肝样细胞移植能改善急性肝功能衰竭模型小鼠生活质量,延长小鼠生存时间,移植细胞对肝脏生化代谢起到了较好的支持作用.     

钙离子对海藻酸钠自组装行为影响的AFM研究

利用氯化钙试剂掺入海藻酸钠溶液中诱导分子链聚集形成自组装膜，研究钙离子对海藻酸钠自组装膜结构的影响。运用原子力显微镜(Atomic force microscope，AFM)对不同浓度海藻酸钠在钙离子作用下的自组装膜进行成像，并结合红外谱图分析。当海藻酸钠浓度在0．01mg／m1和0．1mg／m1时，5m／m1 Ca^2 能很好的诱导海藻酸钠自组装膜，这种自组装结构呈现出典型的“蛋盒结构”。无机小分子通过与同种大分子的表面活性基团相互作用可以诱导高分子物质的自组装，这种自组装结构是一种非平衡状态下的耗散结构，自组装结构受高分子本身的性质与浓度、加入的小分子试剂的浓度、基片的性质以及外界温度等因素的影响。     

磷脂自组装膜的原子力显微镜研究进展

利用磷脂自组装膜在分子水平上研究生物分子的结构和性能,在生物学和仿生学方面有重要研究意义.以原子力显微镜(AFM)为重要的研究工具,综述了磷脂自组装膜的表面形貌、生长动力学的研究进展以及磷脂自组装膜在生物大分子如蛋白质、DNA和酶等的高分辨率AFM成像中的应用.     

人骨髓间质干细胞骨架超微结构与功能研究

目的：探讨原子力显微镜（AFM）在研究干细胞表面形貌、超微结构及细胞骨架等方面的应用，讨论MSCs 超微结构与功能的关系。方法：利用AFM 对培养了1 d及5 d的人骨髓间质干细胞（MSCs）的骨架和超微结构进行研究。结果：在AFM 下观察到了用电镜或其它显微方法所难以观察到的MSCs 许多独特的形态结构，如细胞膜骨架、伪足、细胞边缘的微丝及细胞间纤维等。结论：通过利用AFM 对MSCs观察表明，MSCs 的形态特征独特，细胞骨架明显，这种形态结构特征与其功能如多向分化潜能是相适应的，为MSCs 进一步分化为其它组织细胞作了结构上的准备。MSCs 在修复组织损伤中的应用前景十分广阔。AFM 是研究MSCs 骨架与超微结构的有力工具。     

罗丹明123介导的光动力学疗法预防急性移植物抗宿主病的实验研究

目的：探讨Rh123介导的光动力学疗法(PDT)预防异基因造血干细胞移植急性移植物抗宿主病(aGVHD)的可行性及安全性。 方法： 以C57B/6小鼠为供鼠，BALB/c小鼠为受鼠，建立小鼠异基因骨髓移植的aGVHD模型；混合脾脏淋巴细胞培养(MLC)加Rh123孵育，接受氩离子激光30 mW/cm2照射3 min，再与供者骨髓混合移植给受鼠，观察受鼠移植后造血重建、aGVHD发生情况及病理改变、生存率；流式细胞仪检测MLC细胞CD3+CD69+阳性率。 结果： 光动力学治疗组的aGVHD发生减少，肝、皮肤、肠道病理程度减轻，生存率显著高于未经光动力学治疗组；光动力学处理后的混合淋巴细胞培养24 h后，CD34+CD69+表达明显下降。 结论： Rh123介导的光动力学疗法可有效预防小鼠异基因骨髓移植的aGVHD。     

华蟾素对乳腺癌细胞株MCF-7的杀伤作用研究

目的研究华蟾素诱导人类乳腺癌MCF-7细胞的凋亡作用。方法利用CCK-8法检测华蟾素对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用;用流式细胞术检测细胞的凋亡抑制率;利用倒置荧光显微镜观察细胞整体形态的变化;利用原子力显微镜(AFM)高分辨率、高灵敏度的特点,从纳米尺度上进一步观察细胞形貌及超微结构的变化。结果 CCK-8结果显示,华蟾素对MCF-7细胞的生长有明显的抑制作用,且随着剂量的增加(6.25～50 mg.L-1)而增大,当浓度为50 mg.L-1时,抑制率达到(68.40±1.02)%。采用流式细胞术对细胞凋亡的检测结果也表明华蟾素浓度为50 mg.L-1时,细胞晚期凋亡率最大,可达到(55.5±1.2)%。AFM与对照组相比,药物作用后,细胞开始坍塌变矮、细胞变小,周围呈月牙状或环状,浓度最大时,细胞中间出现较大孔洞。结论华蟾素能有效抑制MCF-7细胞的生长增殖并诱导其凋亡。利用AFM在单细胞水平上分析华蟾素对MCF-7细胞的作用,使分析结果更加全面。     

铬(Ⅵ)存在下谷胱甘肽的电化学检测

目的探讨铬 (Ⅵ )与还原型谷胱甘肽 (GSH)之间的作用机制 ,并建立一种GSH的电化学检测方法。方法采用循环伏安法研究GSH与铬 (Ⅵ )相互作用 ,从而影响铬 (Ⅵ )在金电极上的电响应。结果在含 0 .0 0 1mol/LH2 SO4的 0 .1mol/LNaNO3 溶液中铬 (Ⅵ )离子在金电极表面于 +0 .2V(Vs .SCE)有一较强的还原峰 ,当溶液中加入少量GSH时 ,该峰电流下降 ,并且随着GSH的不断加入峰电流逐渐减小 ,在一定的浓度范围内GSH加入量与峰电流的下降呈线性关系 ,据此建立了一种GSH的电化学检测方法 ,其线性范围为 7.0× 10 -8～ 1.0× 10 -9mol/L ,检测限为 1.0× 10 -9mol/L ,RSD为 0 .4 %。结论获得灵敏、简便、快速的间接的GSH电化学分析方法。