阿尔茨海默病患者β淀粉样肽40人单链抗体在大肠杆菌的表达和纯化

目的:重组表达并纯化抗β淀粉样肽40的人单链抗体,为被动免疫治疗阿尔茨海默疾病提供研究材料。方法:实验于2004-08/2005-03在核医学实验室完成。自制人单链抗体基因。将从人噬菌体单链抗体文库中筛选获得的抗β淀粉样肽40人单链抗体基因,克隆到pET22b( )质粒,转化BL21-gold大肠杆菌,经0.5mmol/L异丙基硫代-β-D半乳糖苷诱导表达抗β淀粉样肽40的人单链抗体。采用Ni2 -NTA-树脂柱亲和纯化尿素变性的包涵体内表达产物,经柱上复性,含咪唑缓冲液洗脱获得人单链抗体。应用Westernblot和酶联免疫吸附实验鉴定纯化的抗β淀粉样肽40的人单链抗体。用Branford法测定纯化抗体的浓度。结果:①抗β淀粉样肽40人单链抗体基因长度约为750bp,重组表达产物相对分子质量33000。②经过一次亲和柱纯化,从细菌包涵体中纯化出高纯度的抗β淀粉样肽40人单链抗体。③酶联免疫吸附实验分析表明纯化单链抗体和β淀粉样肽40结合的A595nm高于对照,差异显著(0.59±0.06,0.12±0.02,P<0.05),表明从包涵体中纯化出来β淀粉样肽40人单链抗体保持了结合抗原的免疫活性。纯化β淀粉样肽40人单链抗体浓度为96mg/L。结论:抗β淀粉样肽40的人单链抗体在大肠杆菌系统得以重组表达,利用亲和层析成功获得高纯度的重组单链抗体。     

含末端半胱氨酸人表皮生长因子受体2亲和体的68Ga标记和显像

目的 在含末端半胱氨酸的人表皮生长因子受体2(HER2)亲和体的羧基末端甘氨酸-甘氨酸-甘氨酸-半胱氨酸(GGGC)的半胱氨酸残基标记68Ga,探讨该标记物用于乳腺癌模型小鼠的HER2显像.方法 通过基因工程制备含末端半胱氨酸的HER2亲和体,应用1,4,7,10-四氮环十二烷-1,4,7-三乙酸-10-马来酰亚胺乙基乙酰胺(MMA-DOTA)在半胱氨酸巯基上耦联DOTA.新洗脱的68Ga液和DOTA-HER2亲和体在90℃下反应,完成标记.标记产物经过C18柱纯化、乙醇洗脱后用于细胞结合分析和microPET显像.细胞结合分析采用表达HER2的乳腺癌细胞MBA-MD-361,动物模型采用该乳腺癌细胞接种的BALB/c裸鼠模型.于4只荷乳腺癌小鼠尾静脉注射3.7 MBq68Ga标记亲和体,分别于注射后20、60 min进行micmPET显像,随即将动物处死,取出心脏、肿瘤、肌肉、骨骼测质量,并用γ计数仪测量放射性,计算肿瘤与肝脏、肌肉、骨骼、心脏的放射性比值.结果 HER2亲和体纯度在95％以上,68Ga标记亲和体的放化纯为97％.应用HER2阳性细胞测出亲和体的亲和力KD值为1.5 nmoL/L.MicroPET显像示,68Ga标记亲和体进入荷瘤鼠血液循环系统后,很快结合于HER2阳性肿瘤,主要从泌尿系统清除.注射68Ga标记亲和体后,肿瘤与肝脏、肌肉、骨骼、心脏的放射性比值分别为17.4±1.0、35.1±10.9、20.7±6.2和20.9±4.0.结论 68Ga亲和体标记成功,适用于HER2阳性肿瘤的PET显像.     

卫生微生物无菌操作实验室设计建造探讨

目前 ,我国各级卫生防疫部门依法承担食品、化妆品、饮用水等健康相关产品的检验工作 ,其中微生物检验结果作为产品安全性和卫生学指标之一 ,为卫生监督执法和卫生学评价提供依据与技术支持 ,因此必须要求检验结果客观、公正、科学、准确。无菌操作实验室作为微生物检验工作中重要的实施场所 ,其设计建造与布局是否达到无菌操作要求 ,直接关系检验结果的准确性。随着社会发展 ,卫生检验工作任务日益增多 ,无菌操作实验时间延长 ,传统无菌室已不能满足需要和保证检验结果质量 ,因此 ,新型无菌室设计建造非常必要。根据成都市疾控中心新建的无…     

18F-FDG注射残留放射性活度影响因素的分析

目的分析18F-FDG药物注射过程中影响其注射后残留放射性活度的因素,以指导临床放射性药物的分装。方法收集2017年10月至12月在首都医科大学附属北京世纪坛医院核医学科行PET/CT检查的患者100例,按其注射药物的体积和放射性活度分组,用放射性活度计记录注射后注射器针筒、注射器针头、三通及头皮针残留的放射性活度以及空气中的放射性本底,并对总残留放射性活度和注射药物的放射性浓度进行曲线拟合。采用SPSS 17.0统计学软件进行正态分布检验及Spearman相关性分析。结果注射后注射器针筒、注射器针头、三通及头皮静脉针残留的放射性活度的中位数（四分位距）分别为1.59（0.93）、3.35（3.43）、1.70（0.92）MBq,总残留放射性活度为7.09（4.31）MBq;总残留放射性活度与18F-FDG注射药物的放射性浓度呈正相关（r=0.594,P < 0.01）,对其进行曲线拟合,放射性浓度 < 600 MBq/mL为宜。结论对18F-FDG浓度进行稀释,降低其放射性浓度能减少总残留放射性活度,精确注射药物活度,同时能够降低对工作人员的受照剂量。     

供应室护士的职业危害和防护

结合国内国际消毒供应的发展趋势,从医院的实际情况出发,对消毒供应室护士职业危害因素进行分析,阐述在消毒供应室护士的职业危害的必然性和防护的必要性,提出防护措施,对保障消毒供应室护士职业安全有非常重要的意义。     

68Ga枸橼酸制备及炎症显像

目的 67Ga枸橼酸被应用于感染和炎症的定位闪烁显像,但因其核素半衰期长,临床上应用逐渐减少,而68Ga枸橼酸具有理想的半衰期.本研究将枸橼酸标记68 Ga,探讨68 Ga枸橼酸PET显像对细菌性感染检测的可行性.方法 直接将枸橼酸钠和68Ga混合,室温放置15min完成标记.将标记产物用生理盐水稀释,用薄层层析分析标记产物的放射性化学纯度.用PET观察68Ga枸橼酸在正常小鼠体内的生物分布变化.用金黄色葡萄球菌感染小鼠左腿腓肠肌,4天后尾静脉注射68Ga枸橼酸,注射后不同时间显像观察68Ga枸橼酸在炎症模型小鼠体内的生物分布变化.结果 68Ga枸橼酸的标记在15min内完成,标记率达到96％以上,不需要进一步纯化即可应用于PET显像.正常动物的PET显像表明,68 Ga枸橼酸主要分布于心脏,通过膀胱排泄.炎症模型小鼠的研究表明,随时间延长,68Ga枸橼酸的放射性在细菌感染处摄取逐渐增高.结论 用一种简单方法制备成68Ga枸橼酸,初步研究表明68Ga枸橼酸能够对小鼠金黄色葡萄球菌感染引起的炎症显像.     

阿尔茨海默病Aβ40人单链抗体在毕赤酵母的表达

目的 重组表达抗Aβ40的人单链抗体,为被动免疫治疗阿尔茨海默疾病提供研究材料。方法 将从人噬菌体单链抗体文库中筛选获得的抗Aβ40人单链抗体基因,突变BamHI酶切位点,克隆连接到T载体,经过PCR和酶切鉴定。EcoRI和NotI双酶切pT-scFvAβ40质粒,连接到经过同样酶切的pPIC9K载体构建pPIC9K-scFvAβ40质粒,经过基因测序验证。线性化pPIC9K-scFvAβ40,转化GS115毕赤酵母,经0．5％甲醇诱导表达抗Aβ40的人单链抗体。结果 基因测序证实pPIC9K-scFvAβ40序列正确,转化GS115获得重组菌株。经过0．5％甲醇诱导,重组菌株分泌表达分子质量大小约为33kD的蛋白质。结论 成功构建pPIC9K-scFvAβ40质粒,Aβ40的人单链抗体在毕赤酵母系统得以重组表达。     

由客户抱怨体检排队时间长所引起的实验室质量改进实例

目的:解决一起客户抱怨。方法:采用计划评审技术。结果:增加采血人员,实施了质量改进。结论:应用精细化管理思路,可以提高实验室质量改进效果。     

细胞凋亡显像剂18F-ML-8的合成及显像研究

目的 通过减少已报道凋亡显像剂ML-10侧链的长度提高分子的脂溶性,探索其放化标记的自动化合成过程及对显像作用的影响。方法 使用国产PET-MF-2V-IT-I合成模块,通过亲核、碱水解两步简单的反应,即可得到¹⁸F-ML-8,产物可以依次通过ICH-Al₂O₃-C18柱的达到纯化的目的,对氟化反应的温度和时间做了正交实验以确定最佳反应条件,并且还进行了相应的生物学实验初步评价。结果 从¹⁸F离子计算合成¹⁸F-ML-8需要25min,放化收率为55%±4%（n=10）,结果未经衰变矫正,¹⁸F-ML-8注射液的放化纯度不小于99%,比活度为38.5±11.2GBq/μmol（n=10）。结论 使用多功能合成模块完成“一锅法”自动化合成¹⁸F-ML-8,操作简便,质控符合相关放药质量管理条例规定,可以满足临床显像的要求。     

自发NIDDM中国地鼠主要器官重量与长度变化研究

应用直接法观察测定了自发NIDDM中国地鼠主要器官重量与长度，并与正常对照近交系动物进行了对比分析，结果表明：同性自发NIDDM中国地鼠心、肝、肾平均绝对重与相对重量均高于正常对照近交系(P＜0．05或＜0．01)，其胃肠消化道亦长于正常对照近交系中国地鼠．其中以小肠最为显著(P＜0.01)。提示：自发NIDDM中国地鼠心、肝、肾重量及小肠长度变化可能与NIDDM发病有关。