筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原的研究

目的筛选日本血吸虫童虫早期诊断抗原及其表位.方法制备日本血吸虫可溶性童虫抗原(SSA),经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及Western blot后分别与日本血吸虫感染后10、21、42天兔血清进行酶联免疫印迹试验(EITB),筛选出能被早期感染血清所识别的抗原组分.用日本血吸虫感染后21天血清从噬菌体12随机肽库中筛选、富集、纯化、扩增与早期感染兔血清有高亲和力的噬菌体克隆,经动物实验初步评估其对日本血吸虫感染的早期诊断效果.结果SDS-PAGE显示SSA的总条带数多于可溶性成虫抗原(SAWA),但大多为共同抗原.EITB结果显示SSA共出现12条早期反应抗原带,其中97 kDa和47 kDa抗原分子只能被感染后10天兔血清特异性识别;SAWA仅出现7条反应带,未显示只能被感染后10天兔血清识别的期特异性抗原分子.挑选出3个与感染后21天兔血清具有高亲和力的单克隆噬菌体,混合后分别用于检测感染日本血吸虫10、21 d鼠血清中IgG特异性抗体,阳性检出率分别为48.8%和64.4%.结论SSA中的97 kDa和44 kDa抗原分子及3个噬菌体随机12肽抗原模拟表位可能具有日本血吸虫感染早期诊断价值.     

日本血吸虫角化不良蛋白(DKC1)基因克隆与表达

<正>目的:本课题组前期的研究结果显示,在宿主因子作用下,日本血吸虫母胞蚴角化不良蛋白(DKC1)基因呈现差异表达。本研究克隆、表达DKC1基因,为后期研究日本血吸虫DKC1基因的功能奠定基础。方法:通过搜寻DKC1基因的完整开放阅读框(ORF),设计并合成引物,利用PCR技术扩增目的基因片段,双酶切,并将其与PET-28a(+)载体连接,转化入DH5a大肠杆菌,经PCR扩增并测序鉴定后,抽提重组质粒,再将其转化入表达菌BL21大肠杆菌中。PCR鉴定阳性重组克隆后,IPTG诱导表达,SDS-PAGE方法检测表达结果,收集、纯化重组蛋白。     

寄生虫酚氧化酶的研究进展

酚氧化酶(Phenoloxidse ,PO)广泛存在于无脊椎动物、脊椎动物、植物、细菌和真菌等生物体内,人们已从多种动物体提取纯化并鉴定了PO。依据PO的不同,其分子质量、最适温度、最适pH、激活剂、抑制剂和催化功能均有所不同。本文就寄生虫酚氧化酶的命名、生化特性、组织学定位、生理功能和分子生物学等方面的研究进展作以下综述。1　命名据国际生化联合会(InternationalUnionofBiochemistry ,IUB :1984)命名委员会统计[1] ,该酶在动物、植物、细菌和真菌的命名不同。它们属于同一组酶,根据其底物不同可分为若干种:儿茶素氧化酶、酚氧化酶…     

日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原54kD等抗原保护力的鉴定

用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ制得的日本血吸虫未成熟虫卵可溶性抗原ＳＩＥＡ ５４ＫＤ抗原免疫小鼠,用尾蚴击感染后,其肝内的总虫卵成熟卵的比例与对照组小鼠比较有显著的减少。ＳＩＥＡ５４ＫＤ抗原分子地的免疫有很强抗雌虫生殖和抗胚胎发育效果,因此可望作为日本血吸虫抗病疫苗修选分子。     

赞比亚孕妇的镰状细胞特质、疟疾和贫血

早已发现,镰状细胞特质者对严重疟疾有一定的抵抗力,但某些试验表明,镰状细胞特质对孕妇并无作用。本研究旨在探明镰状细胞特质,经产状态,疟疾对孕妇贫血的影响。作者选择两组病例,第1组为424例社会经济地位低下的赞比亚孕妇;第2组为155例分娩的妇女,其中107例来自第1组。按产次分为初产妇与经产妇。所有病例均记录生育史,进行镰状细胞定性试验,确定Hb值,血检疟原虫。静脉采血5ml,置于盛有0.1 ml乙二胺四乙酸(EDTA)的塑料瓶内,充分混合24小     

蟑螂取食行为及灭蟑饵剂研究进展

蟑螂是多种病原体携带者和过敏与哮喘的重要诱发因子,也是卫生害虫防治的重要目标。早期蟑螂防治大量采用触杀药剂滞留喷洒,在防治蟑螂同时可能引起室内化学农药污染。颗粒毒饵、胶饵、膏剂等胃毒饵剂利用蟑螂主动取食行为定点施药,效率高、对环境影响小,逐渐成为蟑螂防治的主要手段。据中国农药信息网统计,截至2008年9月在中国有效登记、标称可以灭蟑螂的卫生杀虫剂品种274个,     

肝基质与/或β-巯基乙醇对日本血吸虫细胞影响

目的研究肝基质与β-巯基乙醇分别及联合作用对日本血吸虫培养细胞的影响。方法冷消化法将虫龄为18 d的日本血吸虫童虫制成细胞悬液,联合法接种于普通小盖玻片和预先铺敷肝基质的小盖玻片上。前者被随机分为对照组与β-巯基乙醇组,后者被分为肝基质组与β-巯基乙醇 肝基质联合处理组(简称联合组)。培养第1~4周,分别对各组细胞进行乳酸脱氢酶(LDH)染色,光镜下观察分析。结果培养第1周细胞的LDH活性最强;随着培养时间的延长,LDH活性逐渐降低。培养前2周,β-巯基乙醇组与联合组细胞的LDH活性相近,肝基质组与对照组的相近,前者强于后者,差异有统计学意义(P<0.05)。培养第3周始,肝基质组培养细胞的LDH活性最强,与其余组比较,差异有统计学意义(P<0.05);其余组之间两两比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论肝基质对日本血吸虫培养细胞LDH活性的促进作用比β-巯基乙醇稳定、长效;两者联合无协同作用。     

花生四烯酸及其代谢产物在寄生虫感染中的信使作用

花生四烯及其代谢产物可在细胞外作为第一信使产生细胞效应,亦作为新兴的第二信使在细胞内信息传递中有重要意义。在体内外参与多个病理生理过程,并且在寄生虫侵染宿主的过程中也发挥重要的作用。     

弓形虫P24基因细胞内定位载体重组质粒的构建

目的　构建编码弓形虫 RH株 P2 4基因的细胞内定位载体并进行其序列测定。　方法　弓形虫 RH株腹腔接种小鼠 ,收集腹水 ,Trizol试剂盒抽提基因组 RNA;根据基因库 P2 4基因序列设计合成引物 ,采用 RT- PCR法扩增编码P2 4的基因片段 ,经低熔点琼脂糖法回收并纯化 ;将 P2 4基因定向克隆到细胞内定位载体 p CMV/ myc系列 :p CMV/myc/ cyto(胞质定位 )、p CMV/ myc/ nuc(核定位 )、p CMV/ myc/ mito(线粒体定位 )及 p CMV/ myc/ ER(内质网定位 )。转化大肠杆菌 TOP10感受态细胞 ,在氨苄青霉素阳性 L B培养基平板上筛选出阳性克隆。重组子经双酶切 ,PCR鉴定 ,最后对重组子进行序列测定。　结果　 RT- PCR方法从弓形虫 RH株扩增 5 72 bp的 P2 4基因片段 ,分别构建重组质粒p CMV/ myc/ cyto- P2 4、p CMV/ myc/ nuc- P2 4、p CMV/ myc/ mito- P2 4和 p CMV/ myc/ ER- P2 4 ,酶切和 PCR鉴定产物大小与预期值相符合 ,序列测定分析进一步表明所克隆的基因为编码 P2 4抗原的基因片段。　结论　成功构建编码弓形虫表面抗原 P2 4基因真核细胞内定位载体重组质粒 p CMV/ myc/ cyto- P2 4、p CMV/ myc/ nuc- P2 4、p CMV/ myc/ mito- P2 4和p CMV/ myc/ ER- P2 4