PCNA表达与肺癌细胞株凋亡的关系

 目的　探讨肺癌细胞株增殖细胞核抗原 (PCNA)的表达与肺癌细胞株凋亡的关系。方法　用三氧化二砷 (As2 O3 )诱导肺癌细胞株GLC 82凋亡。运用细胞培养、MTT、流式细胞技术 (FCM )检测及逆转录聚合酶链式反应 (RT PCR)检测PCNA表达在细胞凋亡过程中的变化及相互关系。结果　三氧化二砷可明显抑制GLC 82细胞增殖 ,使细胞周期阻滞于G2 /M并随后凋亡 ,PCNA表达受到抑制。结论三氧化二砷诱导GLC 82凋亡过程中 ,PCNA表达受到明显抑制。对于耐药性肿瘤 ,PCNA活性的抑制可能代表一种新的化疗策略。     

缺氧诱导丝裂原因子对胎肺形态发育及表面活性蛋白表达的影响

目的 探讨缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced mitogenic factor,HIMF)对胎肺形态发育及表面活性蛋白B(surfactant protein B,SP-B)、表面活性蛋白C(snrfactant protein C,SP-C)表达的调控作用.方法 体外分离、培养小鼠第13.5天胎肺组织,分为HIMF处理组:在培养基中添加重组HIMF蛋白,终浓度为100 nmol/L;对照组培养基中不加任何处理.分别在培养0、48、72 h后,每组每时间点选取20例胎肺采用倒置显微镜和HE染色观察胎肺形态学和组织学的改变,采用Western印迹、免疫组化、实时逆转录-聚合酶链反应技术检测胎肺组织中SP-B和SP-C的蛋白、mRNA表达水平变化.结果 HIMF处理组培养48、72 h后,肺泡数目分别为(14.37±0.85)和(18.41±1.24)个/高倍视野,肺泡分支的数目分别为(2.51±0.35)和(3.28±0.51)个/高倍视野,均较对照组相应时间点[分别为(8.09±0.92)、(9.54±0.78)、(1.45±0.32)和(1.69±O.43)个/高倍视野]增加,差异有统计学意义(P<0.05).对照组胎肺体外培养72 h后,SP-B、SP-C蛋白表达较少,染色强度弱,主要定位于Ⅱ肺泡上皮细胞;HIMF处理组可见Ⅱ型肺泡上皮细胞内SP-B、SP-C弥漫表达,以靠近肺组织边缘为甚.HIMF处理组培养48和72 h后,胎肺组织中SP-B、SP-C蛋白和mRNA水平均较对照组相应时间点增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论 HIMF可能通过上调胚胎组织中SP-B和SP-C的表达,促进胎肺形态发育,为进一步研究HIMF在胚胎肺泡发育和成熟中的作用奠定了基础.     

反复自然流产孕妇流产组织中人细小病毒B19的检测意义

目的探讨HPV B19感染与反复自然流产(RSA)的关系。方法建立人细小病毒B19巢式PCR检测方法,检测RSA孕妇流产组织和正常妊娠人工流产组织中HPV B19 DNA。结果检测HPV B19的巢式PCR方法具有很好的特异性和敏感性;42例RSA孕妇流产组织中HPV B19 DNA阳性率26.2%(11/42),40例正常妊娠人工流产组织中HPV B19 DNA阳性率2.5%(1/40),两组HPV B19感染率差异有统计学意义(x2=9.20,P<0.01)。不同流产次数组HPV B19 DNA阳性率差异无统计学意义(x2=0.06,P>0.05)。结论HPVB19感染可能与反复自然流产的发生有关。     

脑脊液肠道病毒RT-PCR检测对病毒性脑炎患者的临床意义

的了解脑脊液肠道病毒（EV）逆转录-聚合酶链式反应（RT—PCR）检测对病毒性脑炎患者的临床诊断和治疗意义。方法回顾分析2000～2003年进行了脑脊液EVRT—PCR检测的43例患者的临床特征，包括临床症状、体征、脑脊液生化常规及其他病毒病原体检查、头颅影像学和脑电图检查，并进行统计学分析。结果脑脊液EVRT—PCR阳性者18例，占41．9％，男性较多，多发病于7～9月。脑脊液EVRT-PCR阳性者的临床症状与阴性者无明显差异，但脑脊液蛋白和细胞数较高，可同时合并血中其他病毒（单纯疱疹病毒、巨细胞病毒）抗体阳性。结论肠道病毒引起的病毒性脑炎发病率高，并可合并其他病毒感染，EVRT-PCR检查结果可指导临床诊断和针对性用药。     

Analysis of Specific Th1/Th2 Helper Cell Responses and IgG Subtype Antibodies in Anti-CD4 Monoclonal Antibody Treated Mice with Autoimmune Cardiomyopathy

The cytokine repertoire of ADP/ATP carrier-specific humoral immune responses and the cytokine-dependent anti-ADP/ATP carrier antibody IgG subclasses were examined in a cohort of ADP/ATP carrier-immunized BALB/c mice treated with anti-CD4 monoclonal antibody. Eighteen male BALB/c mice （6–8 weeks old） were randomized into 3 groups： dilated cardiomyopathy （DCM） group, DCM-tolerance （Tol） group and control group. The mice in DCM group were immunized with the peptides derived from human ADP/ATP carrier protein for 6 months and mice in the control group were sham-immunized, while the mice in DCM-Tol group were immunized with ADP/ATP carrier protein and anti-CD4 McAb simultaneously. Serum autoantibody against ADP/ATP carrier and IgG subclasses were measured by ELISA, intracellular cytokines IFN-γ and IL-4 of Th cells were moni- tored with flow cytometry, and splenic T cell cytokines IFN-γ, IL-2, IL-4 and IL-6 were detected by using real-time fluorescent quantitative PCR. The results showed that the autoantibody against ADP/ATP carrier was found in all mice in DCM group, and the antibody level, serum IgG1 and IgG2a subclasses, cytokines in T cells and Th cells were all elevated in DCM group, as compared with those in control group （P〈0.01）. On the other hand, in DCM-Tol group, the autoantibody level and contents of all the cytokines were significantly different from those in DCM group （P〈0.01）, and were close to those in control group. And the levels of IgG1, IgG2a, IgG2b and IgG3 were influenced, to varying degrees, by anti-CD4 McAb as compared with those in DCM group. All these four types of IgG subclasses were substantially decreased in DCM-Tol group as compared with DCM group. It is concluded that the treatment with anti-CD4 McAb could prevent the activation of T cells, reverse the abnormal secretion of cytokines and the imbalance between Th1/Th2 cell subsets and abnormal production of autoantibody against ADP/ATP carrier, and eventually avoid myocardial injuries.     

构建一种高产量小胶质细胞体外纯化培养的方法

背景：小胶质细胞在一些神经系统疾病如帕金森病、阿尔茨海默病中有重要作用。体外原代培养是进行小胶质细胞功能研究的基础，但目前常用的一些经典培养方法存在步骤繁琐、产量过低的问题。目的 建立一种简易高产量的原代小胶质细胞体外纯化培养方法。设计：以细胞为单一样本的探索性研究。单位：华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科。材料：实验于2004-04／10在协和医院中心实验室完成，新生(出生ld)昆明小鼠10只，雄性。方法：改进的培养方法以McCarthy等的经典培养方法为基础，通过提高初次接种密度。减少细胞离心过滤过程，进行不换液的营养缺失培养等重要改进，并使用低浓度胰酶一乙二胺四乙酸消化法分离纯化小胶质细胞，经MAC-1抗体免疫化学染色标记，计算MAC-1抗原阳性细胞，观察小胶质细胞培养的产量和纯度。主要观察指标：①倒置显微镜观察小胶质细胞形态。②免疫组织化学鉴定比较两种方法下小胶质细胞纯度、激活状态。结果：经典的McCarthy培养方法小胶质细胞培养周期为20d，产量为2&;#215;10^5个／瓶，细胞纯度为95％～97％；改进的方法小胶质细胞培养周期为15d，产量为1&;#215;10^6个／瓶，得到的小胶质细胞纯度为96％～98％。与经典的McCarthy培养方法比较，改进的方法周期短，产量提高了3～10倍。两种方法培养的小胶质细胞纯度和细胞激活状态没有明显差别。结论：新方法得到的小胶质细胞纯度与激活状态均与经典方法相似，但由于其步骤简单，周期短和有效提高了培养产量，为进行小胶质细胞功能特性以及在神经修复中作用的深入研究提供了良好的方法学基础。     

ELISA及免疫印迹法检测抗肌球蛋白抗体的比较

目的 比较ELISA和免疫印迹法检测抗肌球蛋白抗体的优缺点和临床应用价值。方法 采用猪心肌组织中提取的心肌肌球蛋白作抗原,以ELISA和免疫印迹法检测48例扩张型心肌病（DCM）和40例冠心病患者血清中的抗肌球蛋白抗体;同时与人工合成的肌球蛋白重链抗原对比。结果 ELISA和免疫印迹法对DCM组抗肌球蛋白抗体检测的阳性率相近（50％对43．8％）,但后者能区分针对抗原亚单位的抗体,前者则不能。猪心肌肌球蛋白与人工合成多肽的ELISA检测结果具有高度的相关性（P＜0．01）。结论 以人工合成肌球蛋白重链作抗原,采用ELISA检测抗肌球蛋白抗体既有助于DCM与冠心病的鉴别诊断,又简便易行。     

AT1-受体多肽诱导大鼠免疫损伤反应及其药物干预的研究

目的探讨AT1-受体多肽诱导大鼠的免疫反应和药物干预效果.方法 30只雄性大鼠分为三组免疫组(Immunity,Im)和免疫加药物(AT1-受体拮抗剂-科素亚)干预组(Immunity+Losartan,Im-L)各12只,以每只150 μg AT1-受体细胞外第二带合成肽剂量与载体牛血清白蛋白偶联后加上福氏佐剂免疫大鼠;对照组(Control)6只,假性免疫,"免疫液"与免疫组一样,但不含有AT1-受体细胞外第二带合成多肽.采用尾套法检测大鼠鼠尾收缩血压(SBP)和心率(HR);ELISA法检测血清抗AT1-受体细胞外第二带合成肽抗体;观察心脏、肾脏、脑和腹主动脉组织光镜和心脏、肾脏组织电镜的病理变化以及心脏、肾脏重与体重比值;试验期12周.结果 Im-L组大鼠鼠尾收缩血压明显下降,与Control组和Im组有显著性差异;鼠心率、光镜病理和心脏、肾脏重与体重比值三组间比较未见明显差异;Im和Im-L组有抗AT1-受体细胞外第二带合成肽抗体产生,其O.D值明显增高,与被免疫前比较有显著性差异(P<0.01),Im和Im-L组阳性检出率高达100%;电镜检测在Im组可见左室心肌细胞线粒体增多、肿胀,嵴溶解消失,基质密度明显降低,甚至呈囊泡状,肌丝排列不整,肌原纤维溶解、断裂以及在肾脏组织见肾小管上皮细胞内溶酶体增多;电镜检测在Im-L组也可见左室心肌细胞损害但较Im组明显减轻;在Control组则未观察到明显的组织细胞损害改变.结论 AT1-受体细胞外第二带多肽可以诱导大鼠产生抗AT1-受体细胞外第二带多肽抗体并导致心肌和肾脏组织的免疫损伤;科素亚具有阻滞抗AT1-受体细胞外第二带多肽抗体导致组织免疫损伤的作用和组织保护效应.     

抗CD4单抗干预实验鼠自身免疫性心肌病的T细胞信号转导机制(英文)

目的：探讨抗L3T4单克隆抗体对BALB/c小鼠实验性自身免疫性心肌病的治疗作用及T细胞信号转导机制。方法：以ADP/ATP载体肽免疫小鼠建立自身免疫性心肌病模型。3个月后，向小鼠体内注入抗L3T4单抗，以清除CD4+T细胞，并以无关抗体为对照。通过实时荧光定量PCR检测小鼠T细胞中信号分子（p56lck、p59fyn和Zap-70）和细胞因子（IFN-γ、IL-2和IL-4）的表达；通过免疫组化技术分析各组小鼠T细胞内CD45的表达。结果：给予抗L3T4单抗治疗的DCM小鼠T细胞内信号分子（p56lck、p59fyn和Zap-70）和细胞因子（IFN-γ、IL-2和IL-4）表达均减少，CD45的表达也明显减少。相反，以无关抗体免疫小鼠并不能对其产生保护作用，T细胞信号分子、CD45和细胞因子的表达也不被抑制。结论：抗L3T4单抗可以抑制ADP/ATP载体肽诱导的小鼠DCM过程中的T细胞信号分子和细胞因子的表达，可能起到治疗作用。     

肠病毒感染及抗ADP/ATP载体抗体在病毒性心脏病发病中的意义

目的 :探讨肠病毒感染与抗二磷酸腺苷 /三磷酸腺苷 (ADP/ ATP)载体抗体在病毒性心脏病发病中的意义。方法 :应用逆转录聚合酶链式反应 (RT- PCR)和免疫转印法对临床诊断为病毒性心肌炎 (VMC)和扩张型心肌病 (DCM)患者进行肠病毒核糖核酸 (RNA)及抗 ADP/ ATP载体抗体的检测。结果 :RT- PCR方法检测肠病毒 RNA,VMC组 (n =74) 4 2例 (56.8% )阳性 ,DCM组 (n=2 6) 1 1例 (42 .3% )阳性。与健康组 (n =30 )比较具有显著性差异 (分别 P <0 .0 1 ,P <0 .0 5) ;肠病毒感染与 DCM患者心脏功能降低有明显相关性。免疫转印法检测 VMC(n =34)和 DCM(n =2 6)患者血清抗 ADP/ ATP载体抗体 ,VMC组 2 3例 (67.6% )阳性 ,DCM组 1 2例 (46.2 % )阳性 ,而健康组均为阴性 ;抗 ADP/ ATP载体抗体和肠病毒 RNA的检出相关 (r=0 .442 )。结论 :肠病毒RNA和抗 ADP/ ATP载体抗体在病毒性心脏病患者中检出具有相关性 ,对临床上出现前驱感染和心脏症状的患者 ,及时进行肠病毒 RNA、CVB- Ig M、抗 ADP/ ATP载体抗体的检测 ,有助于 VMC和 DCM的早期诊断。