扩张型心肌病小鼠Th1/Th2细胞亚群及其相关细胞因子的分析

目的:探讨体液免疫在扩张型心肌病发病机制中的重要性。方法:以线粒体腺苷酸转位酶(adeninenucleotidetranslocator,ANT)合成肽免疫液免疫小鼠建立扩张型心肌病动物模型(DCM组) ,运用三色荧光标记流式细胞术检测其脾淋巴细胞中Th细胞亚群分布,ELISA法检测其血清细胞因子IFN γ、IL 4、IL 2、IL 6、TNF α的表达及其抗ANT自身抗体的产生。以不含肽的免疫液免疫小鼠为对照组。结果:DCM组小鼠Th1及Th2细胞亚群较对照组均有增多,以Th2更为显著,且Th1/Th2比值明显低于对照组(P均<0 0 1) ;IL 4、IL 6和TNF α表达明显增高,而IFN γ和IL 2却较对照组明显降低(P均<0 0 1) ;抗ANT自身抗体均为阳性,对照组为阴性。结论:ANT合成肽诱导扩张型心肌病时Th细胞均被激活,Th2细胞介导的体液免疫应答在该病发病机理中起着优势作用。     

草木犀石油醚提取物对NF-κB和血红素氧合酶1表达的影响

目的: 探讨草木犀的石油醚提取物在炎症中的作用.方法: 通过LPS干预RAW264.7 细胞系建立炎症细胞模型, 免疫细胞化学法检验NF-êB的表达及分布变化, 实时荧光定量RT-PCR法检测血红素氧合酶1(HO-1)的基因表达, Western blot法测定HO-1的蛋白表达量.结果: 免疫细胞化学法结果显示药物干预时胞质被染为棕色, NF-êB多分布在胞质未被激活; 仅有LPS干预时, 胞核被染为棕色, NF-êB集中分布在细胞核表达增强.药物提取物干预后HO-1的mRNA表达水平明显升高, 且呈剂量依赖型关系; Western blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平也明显升高.结论: 草木犀的石油醚提取物通过抑制NF-êB的激活, 同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用.     

血清抗AT_1-受体自身抗体在难治性高血压患者中的病理作用及临床干预研究

目的 :本文探讨了抗AT1 -受体的自身抗体在难治性高血压中的存在及临床干预措施和效果。方法与结果 :根据美国JNC -Ⅵ的诊断标准 ,收集了 58例难治性高血压病人 ,96例非难治性高血压病人及 40例正常血压对照者 ;性别及年龄因素匹配。人工合成AT1 -受体胞外第二环肽片段作为抗原 ,以ELISA法检测入选病人及对照组血清中的抗AT1 -受体抗体 ,在上述 3组病例中 ,抗体的阳性率分别为 43 % ,1 0 4%及 7 5 % ,在难治性高血压组抗体阳性率具有显著性差异 (P <0 0 5)。对抗体阳性的难治性高血压病人 ,随机分为血管紧张素 -Ⅱ拮抗剂治疗组及ACE抑制剂治疗组 ,进行了为期 6个月的临床随访 ,观察了两组病人在血压降低值、抗体变化及高血压并发症方面的差异 ,共得到有效病例数 48例 ,发现血管紧张素 -Ⅱ拮抗剂组的血压降低值优于ACE抑制剂组 ,且血压控制稳定。结论 :抗AT1 -受体自身抗体可能是导致部分高血压病人血压控制困难的原因之一 ,其机制可能与抗AT1 -受体自身抗体对AT1 -受体的激动活性有关 ,使用血管紧张素 -Ⅱ拮抗剂氯沙坦可有效地阻断AT1 -受体的各种激动途径 ,对抗AT1 -受体自身抗体阳性的难治性高血压病人具有更大的使用价值     

靶向血管内皮生长因子的siRNA表达框架对喉癌细胞株Hep-2细胞生长的抑制作用

目的研究培养Hep-2细胞中，靶向血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的小干扰RNA表达框架（small interference RNA expression cassettes，SECs）对肿瘤细胞生长的影响，检测VEGF基因表达的情况，筛选最佳干扰序列，探讨RNAi技术在肿瘤基因治疗中的应用前景。方法根据siRNA靶序列设计原则，设计出VEGF4个位点的干扰序列，然后进行合成，即为siRNA表达框架的下游引物。由于干扰试剂盒中采用RNA介导的u6聚合酶Ⅲ启动子和改良的终止序列，从而在靶细胞内可以高水平及精确地表达siRNA。我们将4个位点的PCR产物分别转染指数生长期的Hep-2细胞，48h开始观察和检测所产生的RNA干扰的效果。结果形态学检测：转染后的1366位点的细胞可见皱缩、变圆并开始脱落，而其他三个位点的细胞形态学上未见明显的改变；逆转录-聚合酶链反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，与对照组相比，1366位点细胞VEGF mRNA明显被抑制，吸光度为0．05，而其他三个位点的抑制效果不显著，吸光度分别是0．25、0．30和0．18。Western blot分析表明：与其他三个位点相比，1366位点的VEGF蛋白表达明显减弱；流式细胞仪检测表明：1366位点转染细胞的凋亡率为43％，而其他三个位点转染细胞的凋亡率改变不明显，分别为8．9％、6．5％和11．2％；本实验重复性强，同样的实验重复三次结果一致。结论研究表明靶向VEGF的1366位点的siRNA表达框架能高效抑制喉癌细胞株Hep-2细胞的生长。     

自身免疫性心肌病抗心肌线粒体腺嘌呤核苷异位酶抗体的动态变化

目的:观察自身免疫性心肌病(AIC)小鼠模型和病毒性心脏病(VHD)患者血清抗心肌线粒体腺嘌 呤核苷异位酶(ANT)抗体的演变规律。方法:建立ANT合成肽AIC小鼠模型,ELISA法定期监测小鼠血清抗 ANT抗体,观察心肌病理变化;对不同病程VHD患者血清进行抗ANT抗体检测。结果:AIC小鼠模型抗ANT 抗体阳性率随着病程延长,呈先上升后下降趋势,病理检查结果提示心肌组织有慢性炎症的改变。在不同病程 VHD患者中,血清抗ANT抗体阳性率也呈现先升高后降低的变化,临床随访发现12.9%病毒性心肌炎转化为 扩张型心肌病。AIC小鼠模型与不同病程VHD患者血清抗ANT抗体演变具有一致性(r=0.53,P>0.05)。 结论:抗ANT抗体水平的变化与心肌病进程相关。     

细胞打印的可行性研究

目的:探讨初步建立一个细胞打印系统,进行细胞无损伤打印的可行性。方法:常规培养人类宫颈癌细胞株Hela细胞,收获后做成细胞悬液代替喷墨封装入墨盒,改装喷墨打印机进行细胞打印,检测打印后细胞的活性,并与未经打印组细胞对照。结果:经过喷墨打印后细胞能够快速、精确的定位于目标区域,并且能够维持正常细胞形态、保持生物活力并继续生长、分裂增值。结论:细胞无损伤打印是可行的,为进一步的器官打印研究提供依据、探索方法。     

抽动-秽语综合征儿童巨细胞病毒感染的意义初探

儿童抽动-秽语综合征（Tourette＇s syndrome，TS）近年发病有增多的趋势，严重影响患儿的学习和生活，其发病原因至今未明，病毒感染可能是发病机制之一。人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）易导致儿童感染，为此我们对86例TS儿童和50例正常儿童进行了外周血淋巴细胞HCMV pp65抗原与血浆HCMV DNA定量检测，以规探讨HCMV感染与儿童TS的关系。     

Growth-inhibiting and Apoptosis-inducing Effects of Tanshinone Ⅱ A on Human Gastric Carcinoma Cells

To explore the effects of Tanshinone ⅡA on the proliferation, apoptosis and gene ex- pression of p53 and bcl-2 in human gastric carcinoma MKN-45 cells. Cell count and MTT assay were used to study the proliferation-inhibiting effect of Tanshinone ⅡA on MKN-45 cells. The effect of Tanshinone ⅡA on the cell cycle and apoptosis of MKN-45 cells were examined by propidium io- dide (PI) staining and flow cytometry. Semi-quantitative RT-PCR was used to further verify the ex- pression of p53 and bcl-2 gene after exposure to Tanshinone ⅡA in MKN-45 cells. The results showed that Tanshinone ⅡA significantly inhibited the growth and proliferation of MKN-45 cells in a dose- and time-dependent manner (P<0.05). Tanshinone ⅡA arrested MKN-45 cells in G2/M phase which led to an obvious accumulation of G2/M phase cells while decreased number of G0/G1 phase cells. This resulted in apoptosis of MKN-45 cells and the apoptosis rate was as high as 43.91% after treatment with 2.0 μg/mL TanshinoneⅡA for 96 h. It was also found that Tanshinone ⅡA up-regulated expression of p53 gene and down-regulated expression of bcl-2 gene. The cytostatic and antiproliferative effect of Tanshinone ⅡA makes it a promising anticancer agent for the treatment of gastric carcinoma.     

肺组织特异性基因HIMF的克隆及其真核表达载体的构建

目的 克隆小鼠肺组织特异性表达基因缺氧诱导丝裂原因子(hypoxia-induced itogenic factor,HIMF),并构建其真核表达载体.方法 采用 Western blot 法检测 HIMF 基因在小鼠不同脏器中的表达;从小鼠肺组织中提取总RNA,采用 RT-PCR 法扩增全长 HIMF cDNA ,克隆至 T 载体后进行核酸序列分析,并将其正向插入到真核表达载体pcDNA3.1/Zeo( )的限制性内切酶位点 EcoR Ⅰ ;重组子在阳离子脂质体 Lipofectamine 2000 的介导下瞬时转染胚胎纤维母细胞 NIH/3T3、肺Ⅱ型上皮细胞 MLE-12、血管内皮细胞 SVEC4-10,用 Western blot 及 RT-PCR 法检测细胞HIMF表达水平.结果 HIMF特异性表达于小鼠肺组织,而其他脏器未见表达.成功克隆了小鼠 HIMF 全长 cDNA(336 bp),与 GenBank 报道的序列一致.真核表达载体 pcDNA3.1-HIMF 转染细胞后,细胞内 HIMF mRNA 和蛋白水平均显著增高(P<0.01).结论 从小鼠肺组织中克隆出 HIMF 这一组织特异性基因,为深入研究 HIMF 的生物学功能及其在肺部疾病靶向性生物治疗中的作用奠定了基础.     

抗L3T4单抗早期干预对心肌病小鼠细胞因子的影响

目的研究早期应用抗L3T4单抗对心肌病小鼠血清和心肌组织中细胞因子的影响，探讨抗L3T4单抗治疗自身免疫性心肌病的机制。方法用含有人线粒体ADP／ATP载体肽的免疫液免疫近交系Balb／C小鼠建立类扩张型心肌病模型（心肌病组）；以不合肽免疫液免疫小鼠作为对照组；在同时用含有ADP／ATP载体肽的免疫液免疫小鼠的前1d连续3d以400μg抗L3T4单抗免疫小鼠获得单抗组。采用流式细胞术检测小鼠脾脏中CD44T细胞内IFN-γ／IL-4的表达；以ELISA法检测其血清中IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-6和TNF-α水平；实时荧光定量PCR法检测其心肌细胞因子基因表达。结果心肌病组小鼠血清IFN-γ和IL-4水平明显高于对照组，而单抗早期干预使其生成受到抑制，此结果与流式细胞仪检测到的T细胞内IFN-γ和IL-4水平相-致；血清中IL-2含量在3组小鼠差异均无显著性；TNF-α则在单抗组显著高于对照组和心肌病组。从心肌组织中细胞因子表达情况来看，心肌病组各种细胞因子合成均增多，而早期应用单抗能够抑制其基因表达。结论抗L3T4单抗能够阻断绝大部分细胞因子的生成，从而能够治疗实验鼠自身免疫性心肌病。