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21.
抗L3T4单抗对线粒体腺苷酸转移酶多肽诱导小鼠心肌病的免疫治疗 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 :探讨抗L3T4单克隆抗体对线粒体腺苷酸转移酶 (adeninenucleotidetranslocator ,ANT)多肽诱导的小鼠心肌病是否有治疗作用。方法 :15只雄性Balb/c小鼠分为 3组 :①免疫应答组 (n =5 ) :予ANT多肽免疫诱导心肌病的产生 ;②免疫治疗组 (n =5 ) :先予ANT多肽免疫 ,喂养 3个月后再给予抗L3T4单抗进行治疗 ;③对照组 (n =5 ) :以不含ANT合成肽的空白免疫液免疫小鼠。采用ELISA法检测血清抗ANT多肽抗体动态变化 ,实验结束时在光镜和电镜下观察小鼠心肌组织的病理改变 ,计算组织中的胶原纤维容积分数。实验期半年。结果 :免疫应答组小鼠体内均有ANT抗自身抗体的产生 ,且抗体的光密度值 (A )明显增高 ,与对照组相比差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ;免疫治疗组小鼠经抗L3T4单抗治疗后自身抗体出现反应性下降 ,其A值与免疫应答组及对照组比较差异均有统计学意义 (均P <0 .0 1) ;对照组抗体检测为阴性。病理结果显示 ,免疫应答组小鼠心肌组织出现弥漫性纤维化 ,心肌细胞线粒体和肌丝有明显损害 ,心肌胶原纤维容积分数明显高于对照组(P <0 .0 1) ;免疫治疗组小鼠心肌组织的病理改变略轻于免疫应答组 ,心肌胶原纤维容积分数介于免疫应答组和对照组之间 ;对照组心肌组织基本正常。结论 :ANT多肽可诱导小鼠产生抗AN 相似文献
22.
目的观察替比夫定体外对乙型肝炎病毒(HBV)复制的抑制作用。方法HBV复制子pHBV1.3质粒转染Huh7细胞,在转染细胞培养液中加入不同浓度的替比夫定,然后在不同时间段观察替比夫定的抗病毒作用。用ELISA检测培养上清中HBsAg、HBeAg水平,用荧光定量PCR(FQ—PCR)检测培养上清中HBVDNA拷贝数,用Southern blot分析转染细胞中HBV复制中间体。结果替比夫定减少了培养上清中HBsAg、HBeAg的表达及HBVDNA拷贝数,抑制了转染细胞中HBV复制中间体的形成。替比夫定对HBV复制子体外复制的抑制作用依赖于药物浓度及作用时间。结论替比夫定在体外对HBV有较强的抑制作用。 相似文献
23.
乙型肝炎病毒感染性复制子构建及其意义 总被引:1,自引:1,他引:0
目的 构建乙型肝炎病毒(HBV)感染性复制子表达载体,建立HBV体外复制细胞模型,分析其复制特性及对抗病毒药物的敏感性。方法 以质粒pHBV-dimer为模板,采用PCR结合限制性酶切的方法分步将1.3拷贝HBV基因组克隆到pCR2.1载体。将构建的pHBV1.3质粒转染Huh7细胞,ELISA检测不同时间HBsAg、HBeAg的表达,Southern Blot和Northern Blot分析HBV复制中间体、转录物。并利用该细胞模型进行阿德福韦抗病毒研究。结果 成功构建了HBV感染性复制子表达质粒,该质粒上HBV基因能在Huh7细胞中进行有效复制、转录和表达,并能在体外短期传代12 d。阿德福韦能体外抑制该HBV复制子的复制,抑制程度依赖于药物浓度。结论 新构建的HBV感染性复制子表达载体可介导高水平病毒复制,可用于HBV复制机制和抗病毒等方面的研究。 相似文献
24.
目的 建立稳定高表达UroplakinII(UPII)基因的人膀胱癌细胞株。方法 采用分子克隆技术构建含全长UPII结构基因的真核表达载体 ,进行酶切鉴定、核酸序列分析 ,并将其在阳离子脂质体Lipofectamine 2 0 0 0的介导下转染UPII基因缺陷型膀胱移行细胞癌 (TCC)细胞株EJ ,经G418筛选获得抗性亚克隆细胞株 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)、Westernblotting方法对亚克隆细胞株进行UPII基因表达鉴定。结果 所获UPII基因真核表达载体pcDNA3 UPII转染EJ细胞后 ,通过G418持续压力筛选 4周获得亚克隆细胞株EJ/UPII ;RT PCR、Westernblotting均未检测到EJ细胞的UPII基因表达 ,而EJ/UPII细胞中UPIImRNA和蛋白表达水平显著增高 (P <0 .0 1)。结论 通过基因转染方法建立了稳定高表达UPII基因的膀胱TCC细胞株 ,为进一步探讨UPII基因在膀胱TCC生物学行为中的作用及其靶向生物治疗策略奠定了基础。 相似文献
25.
目的RNA干扰是近年来研究基因功能的重要工具。本研究是在培养HELA细胞中,体外化学合成siRNA(small interfering RNA)对柯萨奇B3病毒(Coxsackievirus B3,CVB3)的影响,探讨RNA干扰的抗病毒效应与其应用前景。方法根据siRNA靶序列设计原则,设计了一段针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA,并在体外通过化学合成形成siRNA。同时合成一段与CVB基因组序列无关的阴性对照siRNA。用CVB3感染培养HELA细胞,将其分为3组,即siRNA组(n=8),阴性siRNA组(n=8),病毒对照组(n=8),分别观察转染后第1天到第5天的细胞病变,并与未感染CVB3的空白对照组进行比较;采用RT-PCR技术检测感染CVB3各组的病毒RNA片断,观察病毒RNA与内参GAPDH的OD比值;用免疫荧光技术检测各组CVB3蛋白的表达。结果RT-PCR检测各组CVB3病毒5’端非编码区(5’UTR)RNA,siRNA组与阴性siRNA组和病毒对照组比较无明显变化(P〉0.05);免疫荧光检测各组CVB3病毒蛋白也未见显著差异;细胞病理效应(cytophatic effects,CPE)各组问未见明显差异。结论本文选择针对编码CVB3病毒VP4蛋白基因组的siRNA未能抑制CVB3病毒复制。 相似文献
26.
慢性乙型肝炎是长期影响人类健康的一大难题,全球约有3.5亿人血清中携带乙型肝炎病毒表面抗原。我国的感染情况严重,携带率占总人口的10%以上。目前临床治疗慢性乙型肝炎的主要方法依然是干扰素(IFN)结合核苷类药物,虽然患者对重组IFN的应答率有所增加,但还是不能令人满意。慢性乙型肝炎患者对IFN治疗出现应答差异的原因还不十分清楚。为此,我们检测了慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)诱导抗病毒IFN-α的能力,并分析α干扰素治疗前后不同应答者的α干扰素受体1(IFNAR1)的表达,试图从机体自身的免疫细胞来探讨出现差异的机制。 相似文献
27.
为探讨肿瘤细胞耐药性,以人膀胱癌细胞株BIU-87为亲本,以递增阿霉素剂量的方法,历时8个月,成功地诱导建立了一株耐药细胞亚株BIU-87/ADM。通过生物学鉴定发现此细胞对阿霉素的相对时受度较亲本细胞提高了6.3倍,对阿霉素类似物柔红霉素、表阿霉素及天然生物碱类抗癌药长春新碱、鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性,对顺铂、丝裂霉素则无交叉耐药性。为进一步阐明其耐药机理,应用链霉亲和素-生物素免疫细胞化学技术对其耐药性进行研究发现,约75%的BIU-87/ADM细胞P-gp过表达,而亲本细胞均为阴性。由此结果表明,BIU-87/ADM耐药性的产生主要是由于P-gp膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致,是其产生耐药性的主要原因,BIU-87/ADM的建立为进一步针对P-gp药泵功能逆转其抗药性的研究奠定了实验基础。 相似文献
28.
活动性巨细胞病毒感染与反复自然流产的关系探讨 总被引:2,自引:0,他引:2
目的探讨活动性人巨细胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)感染与反复自然流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)的关系.方法采集反复自然流产孕妇和正常产前体检孕妇外周血,分离外周血单个核细胞(PBMCs)和血浆,分别用免疫荧光法和实时定量PCR检测HCMV pp65抗原和HCMV DNA,并比较2种方法的一致性.结果 65例RSA患者HCMV pp65抗原有20例阳性,阳性率30.8%,50例正常体检孕妇 HCMV pp65抗原有4例阳性,阳性率8.0%,2组孕妇HCMV活动性感染率有显著性差异(χ^2=8.87,P<0.01).孕妇HCMV pp65抗原阳性率升高,孕妇流产几率增加(χ^2=7.53,P<0.01). 免疫荧光法和实时定量PCR有较好的一致性(92.3%).结论反复自然流产孕妇 HCMV活动性感染率显著高于正常孕妇,HCMV pp65抗原检测也许可作为RSA早期诊断指标之一. 相似文献
29.
目的研究IL-1β和TNF-α在巨细胞病毒(MCMV)心肌炎小鼠心肌组织中的表达及在心肌损伤中的作用。方法将60只4周龄BALB/C小鼠随机分为两组,实验组(36只)腹腔注射10-4TCID MCMV,对照组(24只)注射3T3细胞裂解液。观察腹腔注射后3、7、14d心肌组织中IL-1β TNF-α的表达及心肌病理改变。结果实验组心肌组织出现灶性或弥散性炎性细胞浸润、心肌细胞变性和坏死,对照组无病理改变。实验组IL-1β、TNF-α蛋自主要表达在炎性浸润细胞、变性或坏死的心肌细胞,而对照组几乎无表达。结论IL-1β、TNF-α在MCMV心肌炎心肌组织中表达,并可能在其发病中起重要作用。 相似文献
30.
目的 通过腺病毒(adenovirus,Ad)载体介导bcl-2基因转染体外培养的新生大鼠耳蜗螺旋神经节细胞(spiral ganglion cells,SGC),探讨bel-2蛋白过度表达对顺铂所致SGC损伤的拮抗作用.方法 体外培养新生大鼠SGC,携带绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒载体Ad-GFP转染SGC,并行神经丝蛋白(NF200)免疫细胞化学染色鉴定,激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察.携带bel-2基因的腺病毒载体Ad-bel-2转染SGC,蛋白质印迹法(Western Blot)检测bcl-2蛋白表达.设立Ad-bcl-2转染加顺铂组(A组),Ad-GFP转染加顺铂组(B组),顺铂组(C组)和正常对照组(D组),顺铂作用浓度为2μg,/ml;顺铂作用48 h后,行各组SGC计数,并通过lmageJ软件测量各组SGC轴突长度.结果 成功分离并培养新生大鼠SGC.激光共聚焦扫描荧光显微镜下观察到腺病毒载体可安全高效转染体外培养的SGC.Ad-bcl-2转染3 d后,Western Blot检测有外源性人bcl-2基因的高效表达,而Ad-GFP转染组和顺铂组未检测到表达.顺铂作用后,A、B、C组部分SGC细胞突起变短、萎缩,胞体缩小、变圆,甚至浮起.A组SGC数目明显多于B组和C组(P值均<0.01),但少于D组(P<0.05);A组SGC轴突长度明显长于B组和C组,但短于D组(P值均<0.01).结论 腺病毒能够安全高效地转染体外培养的新生大鼠SGC.bel-2蛋白过表达对顺铂所致SGC损伤有一定的拮抗作用. 相似文献