人膀胱癌阿霉素耐药亚株BIU－87／ADM的建立及生物学特性

应用递增阿霉素剂量的方法，体外诱导建立了一株人膀胱移行细胞癌耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ。此细胞株对阿霉素的相对耐受度较亲本细胞提高了６．３倍；对阿霉素类似物柔红霉素、表阿霉素及天然生物碱类如长春新碱、鬼臼乙叉忒有明显的交叉耐药性，对顺铂、丝裂霉素无明显的交叉耐药性。与亲本细胞相比，耐药亚株生长速度减慢，倍增期延长，汇合密度降低，细胞异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对柔红霉素聚集显著减少；免疫细胞化学研究显示，约７５％的耐药亚株Ｐ－ｇｐ过表达，而亲本细胞均为阴性；ＲＴ／ＰＣＲ发现，耐药亚株ｍｄｒ１基因表达，而亲本细胞无ｍｄｒ１基因扩增产物。结果证明，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ耐药性的产生与Ｐ－ｇｐ介导产生的细胞内药物外溢增多有关。由于并非所有ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ均表达Ｐ－ｇｐ，所以其它耐药机制的共存是可能的。     

环孢素A逆转人膀胱癌耐阿霉素细胞亚株BIU—87／ADM效应的研究

ＢＩＵ－８７敏感细胞和ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞用环包素和柔红霉素处理后，采用３－（４，５）－双甲基－２０噻唑－（２，５）－二苯基溴化四氮唑蓝（ＭＴＴ）法评价细胞毒作用，荧光分光光度计检测细胞内ＤＮＲ聚集量。结果发现，ＣｓＡ能显著性增加ＤＮＲ对ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ的细胞毒作用，逆转倍数为７．１倍，而对ＢＩＵ－８７敏感细胞的细胞毒作用增加不明显；ＣｓＡ与ＤＮＲ共同孵育２．５ｈ后能显著增加ＢＩＵ－８７／     

呼吸道合胞病毒A,B亚型变异的进一步研究

利用抗呼吸道合胞病毒的单克隆抗体，通过间接免疫荧光法和免疫转印法对本室分离到的武汉地区１９８８年－１９９３年的７２株呼吸道合胞病毒进行了分型，可奖其分为Ａ、Ｂ两型和Ｂ１、Ｂ２亚型；其中，Ａ型株占２９．２％，Ｂ型株占７０．９％。流行病学分析显示，本地区呼吸道合胞病毒流行株５年中有４年以Ｂ型株为主；Ａ、Ｂ两型的分布还局灶化特点；两型在性别、发病年龄方面无显著性差异。     

人细小病毒B19感染与习惯性流产的关系探讨

目的:探讨人细小病毒B 19(Human parvovirus B 19,HPVB19)感染与习惯性流产(Recurrent pregnancy loss,RPL)的关系。方法:建立人细小病毒B 19巢式聚合酶链反应(Nested Polymerase chain reaction,NestedPCR)检测方法,采集习惯性流产孕妇流产组织和正常妊娠人工流产组织,用巢式PCR方法检测流产组织中HPV B 19 DNA。结果:56例RPL孕妇流产组织中HPVB 19 DNA有16例阳性,阳性率28.6%,50例正常妊娠人工流产组织中HPVB19 DNA有2例阳性,阳性率4.0%,2组HPV B19感染率有显著性差异(χ2=12.38,P<0.01)。流产次数与HPV DNA阳性率无显著性关系(χ2=0.03,P>0.05)。结论:RPL孕妇HPV B 19感染率显著高于正常孕妇,HPV B 19感染可能导致习惯性流产的发生。     

Vascular Endothelial Growth Factorl65-regulated Nasopharyngeal Carcinoma Cell Lines Invasion and Migration Involve Expression and Activation of Matrix Metalloproteinase-2

The effect of vascular endothelial growth factor (VEGF) overexpression on matrix met-alloproteinase-2 (MMP-2) in nasopharyngeal carcinoma (NPC) cells in vitro and the possible mechanism involved were investigated, and the correlation between the expression of VEGF and MMP-2 in NPC evaluated. The NPC cells were transfected with PAd-trackVEGF165 plasmid. The expression levels of VEGF and MMP-2 mRNA and protein in NPC cells were detected by semi-quantitative RT-PCR and Western blot respectively. It was found that the expression of VEGF and MMP-2 mRNA and protein was significantly increased in NPC cells after transfection of VEGF165. It was concluded that the expression of VEGF was correlated to the in vitro invasion of NPC cells, and the induction of MMP-2 by VEGF was a key process of NPC cell invasion.     

Influence of silencing TRAF6 with shRNA on LPS/TLR4 signaling <Emphasis Type="Italic">in vitro</Emphasis>

This study investigated the influence of silencing TRAF6 with shRNA on lipopolysaccharide(LPS)/toll-like receptor(TLR)-4 signaling pathway in vitro.Four plasmids(pGCsi-TRAF6-shRNA1,2,3,4) containing different shRNA sequences were designed and synthesized.The proliferation of RAW264.7 cells after transfected with these plasmids was measured by MTT assay.Inflammatory cellular models were established by LPS stimulation.Levels of TNF-α,IL-1β and TGF-β1 in the supernatants,mRNA expressions of TRAF6,IL-6 and COX-...     

脂多糖对人支气管上皮细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6表达的影响

目的 观察脂多糖对人支气管上皮细胞16HBE STAT1、STAT3、STAT4、STAT6表达的影响.方法 采用普通RT-PCR检测16HBE细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA表达;Western印迹检测16HBE细胞STAT1、STAT4、STAT6的蛋白表达.分别采用不同浓度的脂多糖在不同的时间点处理16HBE细胞,采用Real-time PCR的方法检测16HBE细胞STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA表达.结果 1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞1 h组、0.25 μg/ml的LPS处理16HBE细胞4 h组、1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞4 h组STAT1、STAT4的mRNA表达较正常对照组显著增高(P＜0.01);0.25 μg/ml的LPS处理16HBE细胞2 h组、1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞2 h组、10 μg/ml的LPS处理16HBE细胞2 h组STAT1、STAT4的mRNA表达较正常对照组有所增高(P＜0.05);1 μg/ml的LPS处理16HBE细胞1 h组STAT6的mRNA表达较正常对照组显著增高(P＜0.01).所有LPS处理16HBE细胞组STAT3的mRNA表达均较正常对照组减低.结论 人支气管上皮细胞表达STAT1、STAT3、STAT4、STAT6的mRNA和STAT1、STAT4、STAT6的蛋白,一定剂量的脂多糖在某些时间点分别刺激了人支气管上皮细胞STAT1、STAT4、STAT6的mRNA表达.     

蛇莓乙醇提取物的体外抗炎机制研究

目的 研究蛇莓乙醇提取物在体外的抗炎作用,初步探讨其抗炎机制.方法 通过脂多糖(LPS)干预RAW264.7巨噬细胞系建立炎症细胞模型,ELISA法检测上清液中TNF-α、NO的分泌量,实时荧光定量RT-PCR法检测TNF-α、iNOS、血红素氧合酶1(HO-1)的基因表达,Western blot法测定HO-1的蛋白表达量,免疫细胞化学法检验核因子-κB(NF-κB)的表达及分布变化.结果 蛇莓提取物干预后细胞所分泌的炎症介质(TNF-α和NO)与炎症模型组相比均显著降低(均P<0.01),并存在剂量依赖关系;实时荧光定量RT-PCR结果显示蛇莓提取物干预后细胞TNF-α、iN-OS的mRNA表达水平显著降低,HO-1的mRNA表达水平明显升高,差异均有统计学意义,也存在剂量依赖关系;Western blot结果显示药物干预后HO-1的蛋白表达水平明显升高(P<0.01);免疫细胞化学法结果显示仅有LPS干预时,NF-κB表达增强且集中分布在细胞核,而药物干预时,NF-κB多分布在胞质.结论 蛇莓提取物通过抑制NF-κB的激活,下调巨噬细胞表达炎症介质,同时促进HO-1的释放而发挥一定的抗炎作用.     

构建一种高产量小胶质细胞体外纯化培养的方法

背景小胶质细胞在一些神经系统疾病如帕金森病、阿尔茨海默病中有重要作用.体外原代培养是进行小胶质细胞功能研究的基础,但目前常用的一些经典培养方法存在步骤繁琐、产量过低的问题.目的建立一种简易高产量的原代小胶质细胞体外纯化培养方法.设计以细胞为单一样本的探索性研究.单位华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科.材料实验于2004-04/10在协和医院中心实验室完成,新生(出生1 d)昆明小鼠10只,雄性.方法改进的培养方法以McCarthy等的经典培养方法为基础,通过提高初次接种密度,减少细胞离心过滤过程,进行不换液的营养缺失培养等重要改进,并使用低浓度胰酶-乙二胺四乙酸消化法分离纯化小胶质细胞,经MAC-1抗体免疫化学染色标记,计算MAC-1抗原阳性细胞,观察小胶质细胞培养的产量和纯度.主要观察指标①倒置显微镜观察小胶质细胞形态.②免疫组织化学鉴定比较两种方法下小胶质细胞纯度、激活状态.结果经典的McCarthy培养方法小胶质细胞培养周期为20 d,产量为2×105个/瓶,细胞纯度为95%～97%;改进的方法小胶质细胞培养周期为15 d,产量为1×106个/瓶,得到的小胶质细胞纯度为96%～98%.与经典的McCarthy培养方法比较,改进的方法周期短,产量提高了3～10倍.两种方法培养的小胶质细胞纯度和细胞激活状态没有明显差别.结论新方法得到的小胶质细胞纯度与激活状态均与经典方法相似,但由于其步骤简单,周期短和有效提高了培养产量,为进行小胶质细胞功能特性以及在神经修复中作用的深入研究提供了良好的方法学基础.