Expression of IL-1β and TNF-α in MCMV Myocarditis and Its Role

Autoi mmune myocarditis in Coxsackievirus B3(CB3)-infected mice is associated with infiltrationof the heart by inflammatory cells that secreteTNF-αand IL-1[1].In this study we examine theexpression of cytokines , TNF-αand IL-1βpro-duced locallyinthe heart inresponse to MCMVin-fectionin order to determine their potential role inthe development of acute myocarditis .1MATERIALS AND METHODS1 .1Reagents and AntibodiesMonoclonal goat anti-mouse IL-1β, TNF-αanti-body and SABC …     

血清抗AT1—受体自身抗体在难治性高血压患者中的病理作用及临床干预研究

目的：本文探讨了抗AT1－受体的自身抗体在难治性高血压中的存在及临床干预措施和效果。方法与结果：根据美国JNC－Ⅵ的诊断标准,收集了58例礁治性高血压病人,96例非难治性高血压病人及40例正常血压对照者;性别及年龄因素匹配。人工合成AT1－受体胸外第二环肽片段作为抗原,以ELISA法检测入选病人及对照组血清中的抗AT1－受体抗体,在上述3组病例中,抗体的阳性率分别为43％,10.4％及7.5%,在难治性高血压组抗体阳性率具有显著性差异（P＜0.05）。对抗体阳性的难治性高血压病人,随机分为血管紧张素－Ⅱ拮抗剂治疗组及ACE抑制剂治疗组,进行了为期6个月的临床随访,观察了两组病人在血压降低值、抗体变化及高血压并发症方面的差异,共得到有效病例数48例,发现血管紧张素-Ⅱ拮抗剂组和血压降低值优于ACE抑制剂组,且血压控制稳定。结论：抗AT1－受体自身抗体可能是导致部分高血压病人血压控制困难的原因之一,其机制可能AT1-受体自身抗体对AT1－体的激动活性有关,使用血管紧张素－Ⅱ拮抗剂氯沙坦可有效地阻断AT1-受体的各种激动途径,对抗AT1－受体自身抗体阳性的难治性高血压病人具有更大的使用价值。     

中国人尿路斑块蛋白Ib组织特异性及其启动子的克隆与鉴定

目的:研究中国人尿路斑块蛋白Ib的组织特异性并克隆与鉴定其启动子。方法:RT-PCR检测32例膀胱癌、16例正常膀胱粘膜、15例正常小肠粘膜、16例正常食道粘膜、19例正常肾实质、20例正常肝实质、8例正常皮肤及8例正常心肌标本中尿路斑块蛋白Ib的表达。以人正常膀胱粘膜为材料提取基因组DNA,克隆尿路斑块蛋白Ib启动子片段,并凝胶电泳和测序鉴定。结果:所有正常膀胱粘膜标本、16例分化Ⅰ级膀胱癌中有15例(93.8%)、9例分化Ⅱ级膀胱癌中有7例(77.8%)、7例分化Ⅲ级膀胱癌中有4例(57.1%)检测到尿路斑块蛋白Ib表达,而正常食道粘膜、小肠粘膜、肾实质、肝实质、皮肤、心肌标本均未检测到尿路斑块蛋白Ib表达。中国人尿路斑块蛋白Ib234bp的启动子被克隆并完成鉴定。结论:中国人尿路斑块蛋白Ib具有高度尿路移行上皮特异性,加上其启动子短小,尿路斑块蛋白Ib启动子非常适合膀胱癌的靶向基因治疗研究。我们成功克隆出中国人尿路斑块蛋白Ib启动子片段,为后续研究奠定了基础。     

单磷酸阿糖腺苷 病毒唑 柴胡及其联合应用对呼吸道合胞病毒的抑制作用

目的研究单磷酸阿糖腺苷(Ara-AMP)、病毒唑、柴胡及其联合应用对呼吸道合胞病毒(RSV)的抑制作用。方法将Ara-AMP、病毒唑及柴胡分别稀释成不同的浓度,用细胞培养法观察药物的细胞毒性反应;采用Vero细胞先感染病毒2h后给药法观察细胞病变(CPE)和药物对RSV的抑制作用。结果Ara-AMP、病毒唑及柴胡对Vero细胞的毒性剂量(TD)分别为0.25、0.2、2mg/ml;当Ara-AMP、病毒唑分别与柴胡联用时并未增加对细胞的毒性,而Ara-AMP与病毒唑联用时则对细胞的毒性增加;3种药物各自在Vero细胞上对RSV都有抑制作用,Ara-AMP和病毒唑的有效剂量均为25滋g/ml,柴胡为125滋g/ml。当3种药物配伍联合应用时,均可产生协同作用。结论Ara-AMP、病毒唑及柴胡各自对RSV具有显著的抑制作用,它们的联合应用可产生显著协同作用,既可降低用药量,减少毒副反应,又可有效抑制RSV的感染。     

高效表达型T克隆载体的构建及其特性

目的研制高效表达型T载体用于基因的表达及蛋白功能分析。方法限制性内切酶EcoR V酶切真核表达载体peDNA3,回收线性化质粒片段与三磷酸胸腺嘧啶脱氧核苷酸（driP）70℃退火,构成T克隆载体并回收纯化。将增强绿色荧光蛋白基因（EGFP）和中国旱獭α干扰素基因（cwIFNA5）分别扩增后直接克隆到新构建的表达型T载体,转化感受态细菌,挑选阳性菌并制备质粒瞬时转染真核细胞,荧光显微镜观察EGFP的表达,病毒保护试验检测中国旱獭α干扰素的生物学活性。结果成功构建了表达型T载体,外源基因EGFP和cwIFNA5克隆进该载体后可以进行高效表达,基因转染72h后,荧光显微镜观察到EGFP基因转染细胞荧光阳性率在80％以上,荧光强度高;病毒保护试验表明cwIFINA5基因转染细胞培养上清干扰素效价达1：640。结论新构建的表达型T载体可用于基因的克隆之外,还可以直接用于基因的高效表达及蛋白质功能分析。     

人肝癌裸鼠移植模型的研究进展

肝癌的基础与临床研究迫切需要能真正模拟肝癌在人体内自然生长、侵袭及转移全部过程的动物模型.目前,人肝癌裸鼠移植模型是人体外最接近人类肝癌的整体实验模型,并且造模时间短,成功率高,按移植部位可以分为皮下移植、原位移植、腹腔移植以及转移模型.影响裸鼠移植模型建立的因素主要有人肝癌细胞或外科标本的特性、移植部位及移植癌细胞数量、裸鼠的品系和周龄以及生长环境和其他因素的影响.     

病毒感染大鼠心室肌细胞钙通道基因表达及功能改变的研究

目的：研究大鼠心室肌细胞感染柯萨奇病毒B3（CVB3）后L型钙通道mRNA表达量及其电生理特性的变化。 方法: 用CVB3感染培养的SD大鼠心室肌细胞，采用半定量逆转录-聚合酶链式反应技术，检测病毒感染心室肌细胞L型钙通道各亚单位mRNA表达量的变化；用全细胞膜片钳技术，观察病毒感染前后心室肌细胞L型钙电流（ICa-L）的变化。结果: 病毒感染组心室肌细胞L型钙通道α1和β亚单位mRNA的表达量显著高于正常对照组（4.00±0.07 vs 2.21±0.41, P<0.01; 2.06±0.06 vs 1.22±0.30, P<0.05），而α2/δ亚单位mRNA表达量的改变不明显（4.12±0.19 vs 4.13±0.27, P>0.05）；感染组细胞ICa-L的平均电流密度明显大于正常组细胞［（-8.66±0.99) pA/pF vs (-6.97±1.75) pA/pF, P<0.01］，且前者的电流-电压曲线下移，峰电流密度增加25.74%（P<0.05）。结论: CVB3感染心室肌细胞后，使其L型钙通道α1和β亚单位mRNA的表达量增加，ICa-L增大，可能是病毒感染导致心肌出现异常电生理活动的细胞和分子机制之一。     

人膀胱癌阿霉素耐药株BIU－87／ADM的建立及其耐药机理的研究

以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，经递增阿霉素（ＡＤＭ）剂量的方法，历时８个月，建立了一株耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ．此细胞株对ＡＤＭ的耐受程度较亲本细胞提高了６．３倍，对柔红霉素（ＤＮＲ）、表阿霉素、长春新碱和鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，但对顺铂、丝裂霉素无交叉耐药性。与亲本细胞相比，耐药亚株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对ＤＮＲ蓄积减少；免疫化学显示，７５％的耐药细胞Ｐ－ｇｐ过表达。因而耐药细胞内ＤＮＲ低聚集主要是Ｐ－ｇｐ膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致，是其产生耐药性的主要原因。但并非所有ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ均表达Ｐ－ｇｐ，其他耐药机理的共存是有可能的。ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ及其亲本细胞为寻求逆转人膀胱癌耐药的新型化疗增敏剂或综合化疗方案提供了良好的实验模型。     

口腔鳞癌组织中转录因子Oct-4的表达及其与肿瘤干细胞相关性研究

目的：研究癌转录因子Oct-4在鳞癌细胞中的表达,探讨Oct-4的表达在口腔鳞癌发生发展中的意义及与肿瘤干细胞的关系。方法：采用免疫组化S-P技术,对40例口腔鳞状细胞癌（OSCC）组织标本进行Oct-4半定量检测。结果：Oct-4在40例OSCC中均呈阳性表达,在3例正常口腔黏膜组织中均呈阴性表达。不同的病理分期的Oct-4表达有显著性差异,t检验显示各组间有极显著性差异（p〈0．01）,Oct-4的表达强度随OSCC分化程度的降低而增强。结论：全能干细胞标志物Oct-4在正常口腔黏膜组织中不表达,但在OSCC中的一小部分癌细胞中高度表达,这些全能表达Oct-4的癌细胞很可能是肿瘤干细胞,这些少量的具有多潜能分化的肿瘤干细胞具有诱发并维持OS—CC恶性表达的能力。Oct-4表达水平可作为口腔鳞癌的分化及恶性程度的生物学指标,将有助于寻找肿瘤干细胞的标记物和肿瘤治疗靶,为分离、培养、鉴定OSCC的肿瘤干细胞提供可靠的依据,为OSCC的早期诊断、治疗及预后的判定提供理论基础。     

ShRNA沉默基因DNA甲基转移酶3b的表达对膀胱癌T24细胞增殖的影响

目的体外研究重组质粒pshRNA-DNMT3b对膀胱癌T24细胞中DNMT3bmRNA和蛋白的沉默效应以及细胞增殖抑制的影响，初步探讨DNMT3b在膀胱肿瘤发生过程中的作用。方法实验分为空白对照组、HK组及pshRNA-DNMT3b组（24、48、72h）；常规培养T24细胞，用脂质体lipofectamine2000将重组质粒pshRNA-DNMT3b转染进入T24细胞，后进行RT．PCR、WesternBlot、MTY检测，观察pshRNA-DNMT3b对T24细胞中DNMT3bmRNA、蛋白质水平变化以及细胞增殖的影响。结果重组质粒pshRNA-DNMT3b成功的转染进入T24细胞；RT-PCR电泳结果用Gel-proanalyzer图像分析系统进行灰度分析，空白对照组、HK组、pshRNA-DNMT3b组（24、48、72h）条带的IOD相对比值（DNMT3／β-actin）分别是（99．56±1．24）％、（99．12±1．35）％、（75．77±1．42）％、（44．69±1．05）％和（20．52±0．89）％；Westernblot图像分析结果各组的相对比值分别是（99．43±1．28）％、（98．90±1．31）％、（67．83±1．02）％、（43．43±1．05）％和（21．92±0．89）％；在MTF检测中空白对照组和HK组之间差异无统计学意义（P〉0．05），pshRNA-DNMT3b组仅在72h后和前2组之间差异有统计学意义（P〈0．01），但抑制率仅增加0．45％左右。结论重组质粒pshRNA-DNMT3b能有效的降低膀胱癌1、24细胞中基因DNMT3bmRNA的转录及蛋白的表达，但在抑制细胞增殖上作用甚微。