柳州市城镇人群α和β地中海贫血的发生率调查和基因型鉴定

目的 调查广西柳州市城镇人口中α和β地中海贫血（地贫）的发生率和基因突变类型及其构成比。方法 以整群抽样收集1028份其父母双方或一方为柳州市户口的新生儿脐带血及1312份柳州市户口的婚检育龄成人的外周静脉血，分别进行α地贫和β地贫调查；所有样品均进行红细胞（RBC）参数和血红蛋白（Hb)电泳分析，以巴特血红蛋白（Hb Bart's)阳性者为α地贫，平均红细胞体积（MCV＜85fl和HbA2≥4．0％为β地贫阳性表型指标。采用基于PCR的基因分析方法进行α和β地贫及β地贫复合α地贫样品的确诊，对α和β地贫表型阳性而未查出基因者，以家系成员的表型分析诊断。结果 1028份脐带血样品检出α基因携带者112例（包括3例双重杂合子），α地贫基因携带率11．19％，共检出含5种α地贫的等位基因，其构成比依次为37．4％（－－^SEA),31.3%(-α^3.7),17.4%(-α^4.2),12.1%(α^CSα)和0．9％（α^QSα)。1312份成人外周静脉血样品共发现β地贫携带者89例，基因携带率为6．78％。其中有14例伴有胎儿血红蛋白（HbF)增高，检出率1．07％。在89例β地贫阳性样品中，有16例（占18％）为β地贫复合α地贫双重杂合子，共发现9种不同的基因型，检出率为1．22％。该地区3种最常见的基因－βCD41－42（－CTTT）移码突变，βCD17（T－A）无义突变和β－28（A－G）转录突变占突变基因的90％。结论 α和β地中海贫血在柳州地区的发生率很高。     

PCR技术在钩端螺旋体病例诊断中的应用

目的了解聚合酶链式反应(PCR)检测技术在钩端螺旋体病临床诊断中的作用。方法利用PCR检测技术对根据临床症状和抗体筛查结果已经确诊的病例进行进一步排查。结果临床诊断的1例"阳性"病例和3例疑似病例的PCR检测结果都为阴性。结论鉴于目前绝大多数实验室并不开展针对钩端螺旋体的菌体培养分离和显微镜凝集实验,对于钩端螺旋体病例,应运用PCR检测技术加以甄别,排除某些抗体检测试剂导致的假阳性,避免不正当治疗。     

反向点杂交快速诊断非缺失型α-地中海贫血

目的 建立一种简便快速筛查非缺失型α—地中海贫血点突变的反向点杂交(reverse dot blot,RDB)技术。方法 将生物素直接标记在引物上,选择性扩增人α2珠蛋白基因,将PCR产物与固化在膜条上的寡核苷酸探针杂交,洗膜、显色后分析结果。结果 采用生物素标记的引物：Bio—C1和Bio—C3可选择性扩增α2珠蛋白基因,PCR产物长度为1085bp,该标记片段与固相探针构成的反向点杂交检测体系,可以分辨出中国人群中已知的6种非缺失型α—地中海贫血点突变。结论 该反向点杂交检测体系无需巢式PCR扩增,一步选择性扩增的α2珠蛋白基因产物即可用于杂交;无需进行检测标记物(如生物素)反应,而将生物素直接标记在引物上;无需不同的洗膜条件,故较已报道的同类方法更为简单易行。RDB技术可用于快速诊断中国人非缺失型α—地中海贫血点突变。     

大引物PCR定点诱变技术的研究进展

PCR技术自问世以来发展迅速、现已成为细胞生物学及分子生物学研究中常用的方法。而基于PCR的定点诱变技术又成为研究基因的生物学特性，探索蛋白质结构和功能相关关系的强有力工具。其中的大引物PCR定点诱变技术因其简便高效而倍受研究者欢迎。本文从该技术的每一层面人手，对此方法的研究进展进行慨述。     

大引物PCR定点诱变技术的研究进展

PCR技术自问世以来发展迅速 ,现已成为细胞生物学及分子生物学研究中常用的方法。而基于 PCR的定点诱变技术又成为研究基因的生物学特性 ,探索蛋白质结构和功能相关关系的强有力工具。其中的大引物 PCR定点诱变技术因其简便高效而倍受研究者欢迎。本文从该技术的每一层面入手 ,对此方法的研究进展进行概述     

基于症候群监测初步建立我国口岸入境人员传染病 监测网络及其2009-2011年监测结果分析

目的 了解我国入境人群发热症候群和腹泻症候群的病原谱构成数据,促进我国入境传染病网络实验室监测网络技术平台建立和完善.方法通过口岸体温监测、医学巡查、主动申报、健康体检等手段,于2009年5月-2011年3月间,联合9个直属检验检疫局所属口岸建立监测哨点并对筛选出的入境发热及腹泻人员进行样本采集、统一病原谱检测及数据分...     

基于SPRi生物芯片平台的HIV-1感染快速检测方法的建立及其应用

目的利用表面等离子共振成像(SPRi)生物芯片平台建立HIV-1感染快速检测方法并将其应用于临床标本的检测。方法通过文献分析比较筛选出最适检测蛋白,再通过梯度稀释法确定其适宜检测浓度,建立HIV-1感染检测方法并进行优化,然后用已知标本(HIV-1阳性血清,HBV阳性血清,HCV阳性血清及健康人血清)进行检测以确定该方法的特异性;与商业化ELISA检测试剂同步用于临床标本的检测,比较检测结果的一致性。结果当检测蛋白浓度低于0.16mg/ml时,无阳性信号出现;当检测蛋白浓度≥0.16mg/ml时均有阳性信号出现且呈现线性增强趋势。从降低检测成本和减少高浓度时可能出现非特异性结合的情况考虑,最终将检测蛋白的最适浓度确定为0.16mg/ml。用优化的HIV-1检测方法检测已知标本,只有HIV-1阳性血清出现阳性信号,HBV阳性血清、HCV阳性血清及健康人血清时均无阳性信号。临床标本检测表明,该方法和商业化ELISA试剂盒,均能检出同一份HIV-1阳性标本,一致性为100%。结论基于SPRi平台建立的HIV-1快速检测法具有特异、准确、快速、简便等优点,可用于HIV-1感染检测。     

一个β地中海贫血复合δβ地中海贫血家系的表型与基因型分析

目的：调查一种缺失型δβ地中海贫血（简称地贫）基因型与表型的关系,探索进行β地贫复合该缺失型突变高风险胎儿的快速产前诊断方法。方法：以表型和基因分型进行家系分析。表型分析采用红细胞指标和血红蛋白电泳分析;用跨越断裂点的三引物聚合酶链反应直接分析法检测δβ地贫缺失突变;用反向点杂交技术筛查β地贫基因突变;并对一例该型地贫高风险胎儿进行了产前基因诊断。结果：先证者（重症地贫）为一种缺失型δβ地贫与β地贫双重杂合子,其δβ地贫基因遗传自母方,在该家系3代9名成员中共检测到4例携带了这一基因,其表型和基因型结果相互吻合;β地贫基因（密码子41－42－CTTT移码突变）遗传自父方。对该家系的重症地贫高风险胎儿进行产前基因诊断的结果显示,胎儿的基因型完全正常。结论：在国内首次报告由缺失型δβ地贫基因与β地贫移码突变双重杂合导致的重平地贫高风险胎儿的产前诊断结果。采用的技术简便、快速,可用作同类事件的参考。     

肠道传染病病原体可视化基因芯片检测技术的研究

〔目的〕研究建立能同时检测7种肠道传染病病原体的可视化的快速、高效的基因芯片检测技术。〔方法〕针对霍乱弧菌、副溶血弧菌、沙门菌、大肠埃希菌O157：H7、金黄色葡萄球菌、轮状病毒、诺瓦克病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）等7种肠道传染病病原体,设计特异引物和探针,构建芯片。以链霉亲和素包被的磁珠为信号标记分子检测芯片上的特异杂交反应,结果采用裸眼观察或普通光学设施成像保存。测试构建芯片的特异性、重复性及灵敏度等参数。〔结果〕该芯片具有较好的特异性和重复性,检测灵敏度可达25ng/μl;对27份临床粪便样本分别进行PCR和芯片检测,芯片检测结果与PCR方法检测结果一致。〔结论〕本研究建立的基于磁珠标记的可视化芯片技术,能够用于快速筛查选定的7种主要的肠道传染病病原体。该技术对于进一步开发更多指标的微生物检测方法具有很好的示范作用。