Detection of Klebsiella pneumonia in respiratory tract samples by the loop-mediated isothermal amplification method

目的:建立环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测呼吸道感染患者痰液中肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae,Kpn)的方法并进行初步应用。方法:基于Kpn phoE基因设计4条特异性引物,对反应条件中的Mg^2+和甜菜碱浓度进行优化,建立检测Kpn LAMP方法并进行特异性和灵敏度试验;收集308例呼吸道感染患者痰液样本,进行细菌培养法、LAMP法、DNA测序技术检测,评估LAMP检测体系。结果:8 mmol/L、0.4 mmol/L确定为Mg^2+和甜菜碱的最佳扩增浓度;该体系特异性强,与其他菌株无交叉反应,灵敏度为104 CFU/mL;临床样本中Kpn的LAMP检出率(53.89%)高于培养法(42.20%),差异有统计学意义(χ^2=161.65,P<0.05);LAMP法与细菌培养法在Kpn阳性样本、无细菌生长样本、非Kpn其他细菌阳性样本中的一致率分别为96.15%、100%、65.25%,46例不一致样本经DNA测序验证,LAMP法与测序符合率为86.95%(40/46);LAMP法和DNA测序法对131例样本同时进行检测,经Kappa检验两者具有极好的一致性(Kappa系数=0.817)。结论:与细菌培养法相比,LAMP法具有准确性高、灵敏度高、特异性强、反应省时等优势,可以作为肺炎克雷伯菌的快速检测方法。     

血清超敏肌钙蛋白T轻度升高在老年冠心病患者中的临床意义

目的:评估老年冠心病患者超敏肌钙蛋白T(hs-TnT)轻度升高的临床意义,并探讨其可能机制。方法:入选年龄>70岁患者250例,均留取入院次日晨起空腹静脉血,住院期间完成冠状动脉造影,并明确诊断为冠心病;依据hs-TnT值分为轻度升高组(0.014～0.100μg/L)和正常组(<0.014μg/L)。结果:2组患者冠状动脉病变严重程度、左室重量指数[(90.0±26.1)g/m2∶(100.0±30.9)g/m2]、左室收缩功能[(56.0±6.7)%∶(50.0±7.9)%]、估测肾小球滤过率{[(66(74～52)]ml/(min.1.73m2)∶[60(70～49)]ml/(min.1.73m2)}比较均差异有统计学意义(均P<0.05);2组炎症反应指标、左室舒张功能差异无统计学意义。结论:hs-TnT轻度升高与老年冠心病患者冠状动脉病变严重程度、左室重量指数增加、左室收缩功能下降、肾功能减退相关,可作为老年冠心病早期危险分层的一个指标并能指导临床治疗。     

类风湿关节炎患者SIRL-1表达及其调控NETs形成的作用

目的：探讨白细胞信号抑制受体-1(SIRL-1)在类风湿关节炎（RA）患者关节滑膜组织和外周血中性粒细胞、单核细胞、嗜酸性粒细胞中的表达及其对中性粒细胞外捕网（NETs）形成的影响。方法：免疫组织化学染色比较RA患者和骨关节炎（OA）患者滑膜组织中表达SIRL-1的阳性细胞数;流式细胞术分析RA患者和健康志愿者（HC）外周血中性粒细胞、单核细胞和嗜酸性粒细胞表面SIRL-1表达;密度梯度离心法分离RA患者和HC外周血中性粒细胞,分析SIRL-1单克隆抗体（SIRL-1mAb）自发形成NETs的影响。结果：RA滑膜组织中表达SIRL-1的阳性细胞数少于OA滑膜组织（P=0.040 2）;与健康对照组相比,RA患者外周血中性粒细胞和单核细胞表面SIRL-1表达明显降低（P=0.029 8,P=0.006 7）,但两组人群嗜酸性粒细胞SIRL-1表达差异无统计学意义（P=0.401 7）;RA患者中性粒细胞比健康对照组更易自发形成NETs(P=0.000 2);与未使用SIRL-1 mAb组相比,SIRL-1 mAb处理的RA患者形成NETs水平明显降低（P=0.036 8）,SIRL-1 ...     

人抗乙型肝炎表面抗原Fab片段的表达及活性鉴定

人抗乙型肝炎表面抗原Ｆａｂ片段的表达及活性鉴定２００００３上海第二军医大学长征医院范列英，韩焕兴，胡东平，孔宪涛关键词ＨＢｓＡｇ，Ｆａｂ片段，噬菌体抗体中国图书资料分类号Ｒ５１２．６２噬菌体抗体技术不仅能大量制备人源性单克隆抗体，而且为制备其他的具有...     

人源抗乙肝病毒表面抗原单克隆抗体的抗原结合活性

人源抗乙肝病毒表面抗原单克隆抗体的抗原结合活性韩焕兴范列英胡栋平孔宪涛自鼠源性单克隆抗体出现以来，人单克隆抗体的制备一直是人们研究的目标。我们应用分子生物学方法，建立了针对乙肝病毒表面抗原（ＨＢｓＡｇ）的抗体组合文库，并选择部分阳性株，进行了抗体片段...     

HLA-A*0201/BSP融合基因的构建与表达

目的:克隆表达HLA-A*0201 α链胞外区与BirA酶底物肽(Bir A substrate peptide,BSP)的融合蛋白.方法:采用PCR技术从人HLA-A*0201 α链cDNA库中克隆基因的胞外区,拼接可生物素化的BSP片段序列后,经双酶切插入载体pET28a( )后在E.coli BL21(DE3)诱导高效表达,并对表达产物进行纯化与复性.结果:成功地扩增出HLA-A*0201/BSP基因并测序证实,构建了融合表达载体pET-HLA-A*0201,并获表达与纯化.结论:成功构建了HLA-A*0201/BSP融合基因,为进一步体外构建特定的HLA-A*0201四聚体,标记相应特异性CD8 T细胞提供物质基础.     

自身免疫性肝炎特异性靶抗原的表达及免疫学鉴定

目的 克隆、表达可溶性肝抗原（ＳＬＡ）及细胞色素Ｐ４５０ ２Ｄ６（ＣＹＰ ２Ｄ６）。方法 采用 ＲＴ—ＰＣＲ技术从人肝组织ｐｏｌｙ（Ａ）＋ＲＮＡ中扩增ＳＬＡ及 ＣＹＰ ２Ｄ６ ｃＤＮＡ，经ＢａｍＨ　Ⅰ、Ｈｉｎｄ Ⅲ双酶切定向插入载体ＰＱＥ－３０并在大肠杆菌Ｍ１５中表达。对表达载体ＰＱＥ—３０／ＳＬＡ、ＰＱＥ—３０／ＣＹＰ ２Ｄ６中的目的基因进行序列分析，表达产物用 ＳＤＳ—ＰＡＧＥ、免疫印迹方法鉴定。结果 表达产物经 ＳＤＳ－ＰＡＣＥ和免疫印迹分析后在分子量 ４．７ × １０４和５．０ × １０４处各有一条明显的蛋白带，并分别能特异性与抗ＳＬＡ、ＣＹＰ２Ｄ６阳性血清反应。结论 表达ＳＬＡ、ＣＹＰ２Ｄ６为自身免疫性肝炎的诊断及其发病机制研究提供物质基础。     

细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4+49基因多态性与自身免疫性肝病相关

自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)和原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)是两组重要的自身免疫性肝病，多基因遗传因素在AIH和PBC的发生发展中起重要作用。细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)基因位于染色体2q33区域，其外显子1区基因多态性与高加索人种的AIH和PBC相关。我们采用限制性片段长度多态性分析法(PCR-RFLP)分析了49例AIH和58例PBC患者CTLA-4外显子1区49位A／G单核苷酸多态性，并与正常献血者作比较。     

视黄醇结合蛋白的放射免疫分析

视黄醇结合蛋白的放射免疫分析范列英，沈新义，耿培兰，徐庆文，王志凌视黄醇结合蛋白（ｒｅｔｉｎｏｌ－ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ，ＲＢＰ）为血液中视黄醇转运蛋白［１］，是反映近端肾小管功能和肝功能损害程度的敏感指标［２，３］．我们用本室制备的ＲＢＰ纯品...     

慢性肝炎与肝癌患者血清中肝特异性自身抗体的差异分析

目的　阐明慢性肝炎与肝癌患者血清中肝特异性自身抗体的差异。方法　以肝组织切片和可溶性肝抗原为抗原基质 ,用间接免疫荧光法和蛋白印迹检测 40 0例慢性肝炎、肝硬化和 12 1例原发性肝癌患者血清中的肝特异性自身抗体。结果　免疫荧光法显示肝癌患者血清中肝特异性自身抗体的阳性率 (2 9.7% )显著高于慢性肝炎 (18.75 % )。蛋白印迹法测得两组病例自身抗体的阳性率相近 ,且靶抗原相对分子质量多分布在2 0× 10 3 ～ 5 5× 10 3 之间 ,有 19.83%肝癌和 1.75 %的慢性肝病患者的血清在 2 0× 10 3 左右处有 1～ 2条明显的阳性带。结论　慢性肝病和肝癌患者体内不仅存在相似的自身免疫紊乱 ,且随着病情的变化部分肝癌患者体内的自身靶抗原发生了改变。进一步纯化、鉴定这些有意义的靶抗原分子将有助于探讨自身免疫在慢性肝病的转归和恶性变中的作用。