骨髓间充质干细胞离子通道的表达及意义

目的：研究分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）膜表面离子通道的表达,为研究干细胞在分化过程中离子通道变化奠定基础。方法：采用Percoll分离液体外分离法,体外培养出能稳定传代的大鼠BMSCs,利用膜片钳技术记录BMSCs的离子电流。通过设定不同的实验程序,记录通道电流的幅度、激活和失活电流的峰值与时程、离子通道的选择性、Ⅰ-Ⅴ曲线。利用各种通道阻滞剂对记录到的电流进行鉴定、分析。结果：培养的细胞接种后24 h开始贴壁,传代后细胞呈漩涡状。流式细胞术检测培养的细胞CD71、CD44呈阳性,CD34、CD45阴性,证实其为大鼠BMSCs。利用膜片钳技术在大鼠BMSCs上记录到延迟整流钾电流,并且在24%的BMSCs中发现了对河豚毒素（TTX）敏感的钠电流,在25%的BMSCs中记录到L-型电压依赖型钙电流。RT-PCR法证实BMSCs存在SCN5A、 Kv4.3 和CACNA1C 3种通道。结论：记录到的离子电流具有兴奋细胞的特点。     

视网膜神经节细胞培养上清液对骨髓间充质干细胞向神经元样细胞的诱导作用

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(rat mesenchymal stem cells,rMSCs)体外诱导分化成神经元样细胞的能力。方法用视网膜条件分化液诱导传代的rMSCs,待细胞分化后进行形态学观察,并用免疫细胞化学方法方法进行鉴定。结果诱导细胞2 d后即可见有神经元样细胞出现,7 d神经元样细胞占细胞总数的(27±1.0)%,Nestin染色阳性、MAP-2染色阳性。结论体外rMSC能扩增、传代,并被诱导分化成神经元样细胞。     

激活素受体相互作用蛋白ARIPzip真核表达载体的构建及表达

目的构建激活素受体相互作用蛋白 （aetivin receptor interacting protein zip, ARIPzip） 真核表达载体,以便进一步探讨其生物学作用。方法从小鼠成纤维细胞3T3中提取HNA,并利用ARIPzip特异性引物通过RT-PCR方法扩增了ARIPzip cDNA,并克隆入pcDNA-Flag载体中,构建重组载体pcDNA-F-ARIPzip。将重组载体转染入HEK293细胞中,并通过免疫印迹方法检测ARIPzip的表达。结果酶切及测序结果显示,重组质粒构建成功;免疫印迹结果显示,瞬时转染重组质粒的HEK293细胞中可有效表达ARIPzip。结论本研究成功构建了激活素受体相互作用蛋白ARIPzip真核表达载体,并能够在真核细胞中进行表达,为进一步研究ARIPzip的生物学功能奠定了基础。     

眼黑色素瘤眼球摘除术后死亡原因的临床及病理分析

目的 评估脉络膜或睫状体黑色素瘤眼球摘除术后死亡的预兆因素.方法 对1996年1月至2005年6月诊断为脉络膜或睫状体黑色素瘤行眼球摘除术的35例患者进行随访.通过临床及病理检查,记录肿瘤最大基底直径、肿瘤前界位置、有无巩膜外或视盘/视神经浸润、细胞病理分型及术后转移死亡例数等指标.进行2个或多个率比较的χ2检验,以及比较其转移死亡的相对危险度或称比值比(rat ratio,RR).结果黑色素瘤最大基底直径较大者死亡的危险性相对较高(0.011),肿瘤前界达到睫状体或虹膜者与位于脉络膜内者相比预后较差(0.025相似文献   

超声生物显微镜在眼科的临床应用及进展

超声生物显微镜（UBM）是20世纪90年代发展起来的新型眼科B超影像学检测工具。它是由加拿大医生Pavlin等设计的一种无创伤性的眼用超高频超声图像诊断系统,由高频率换能器与超声仪器结合而成,探头频率为20～100MHz,分辨力100～20μm,探查深度15～1mm。用于人体的频率为50—100MHz,分辨力70—20μm,探查深度6～1mm;     

骨髓血管内皮祖细胞的分离培养及分化鉴定

目的 研究分离、培养小鼠骨髓血管内皮祖细胞的方法并对其进行诱导分化鉴定,为临床进行缺血性疾病的替代治疗奠定细胞学基础.方法 用灌注法分离小鼠骨髓血管内皮祖细胞,用血管内皮生长因子、成纤维细胞生长因子诱导其分化,形态学观察细胞的生长过程,并利用抗CD34抗体鉴定血管内皮祖细胞,利用抗vWF抗体、抗eNOS抗体鉴定血管内皮细胞. 结果小鼠骨髓血管内皮祖细胞可在体外培养条件下贴壁生长,可诱导分化为表达特异性组织蛋白的内皮细胞.结论 在小鼠骨髓内可分离出骨髓源性血管内皮祖细胞,呈贴壁增殖状态,并有分化能力.     

基质细胞衍生因子-1α在增生性糖尿病视网膜病变继发新生血管性青光眼中的作用

目的 观察基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)在增生性糖尿病视网膜病变(PDR)继发新生血管性青光眼(NVG)中的作用,并探讨其作用机制.方法 采集PDR患者25例31只眼的玻璃体标本.其中,继发NVG者13只眼作为实验组,无NVG者18只眼作为对照组.配制含10、100、1000 ng/ml SDF-1α和10 ng/m1血管内皮生长因子(VEGF)培养液,并以此分组;测量各浓度组与体外对照组人脐静脉内皮细胞(HUVEC)管腔样结构及毛细血管样结构全长.配制含10、100、1000 ng/ml SDF-1α和100 ng/ml血管内皮生长因子(VEGF)培养液,并以此分组;采用5'-溴2'-脱氧尿嘧啶(BrdU)掺入法行细胞增生检测,分析各浓度组与体外对照组吸光度[A,旧称光密度(OD)]值.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测玻璃体标本实验组和玻璃体标本对照组患者玻璃体标本中VEGF和SDF-1α含量.结果 体外血管生成检测显示,10、100、1000 ng/ml SDF-1α和10 ng/ml VEGF组HUVEC管腔样和毛细血管样结构长度均较体外对照组长,差异均有统计学意义(P＜0.05).细胞增生检测显示,10、100、1000 ng/ml SDF-1α和100 ng/ml VEGF 组A值均较体外对照组增高,差异有统计学意义(P＜0.05).ELISA法检测显示,玻璃体标本实验组患者玻璃体标本中SDF-1α和VEGF含量均明显高于玻璃体标本对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 SDF-1α参与了PDR继发NVG的形成过程,可能与SDF-1α促进血管内皮细胞增生而促进新生血管形成有关.     

抑制消减杂交技术筛选骨髓间充质干细胞与视网膜神经节样细胞差异表达基因

目的　抑制消减杂交技术筛选和克隆视网膜神经节(RGC)样细胞与骨髓间充质干细胞的差异表达基因。方法　提取RGC样细胞总RNA为检测子,骨髓间充质干细胞的总RNA为驱动子，进而用抑制消减杂交技术方法获得消减杂交产物。结果　本消减文库共挑取克隆120个，经聚合酶链式反应（PCR）鉴定，其中含有插入片段的阳性克隆有20个。在这些阳性克隆中，PCR扩增片段大小分布于250~1500 bp。共得到5个差异基因片段，这些差异表达基因与视觉信号转导、神经细胞再生等功能有关。结论　抑制消减杂交技术有效地克隆了骨髓间充质干细胞诱导前后差异表达的基因。     

骨髓间充质干细胞在大鼠缺血-再灌注损伤眼的视网膜下移植

目的 观察骨髓间充质干细胞移植于大鼠缺血再灌注损伤眼的视网膜下后生长、分化和迁移的情况。方法 体外培养大鼠骨髓间充质干细胞并传至第四代，建立大鼠眼缺血-再灌注损伤模型。将Brdu标记的BMSCs移植于大鼠缺血再灌注眼内的视网膜下，应用荧光免疫组织化学方法示踪移植后10、20、30天视网膜中Brdu标记的BMSCs的分布情况。结果 移植后10d荧光显微镜下见大部分Brdu标记的BMSCs在移植区城周围成簇聚集。移植后20d观察发现BMSCs分布较多的位置为外核层。移植后30d可见BMSCs部分出现在节细胞层并且连接成片。在移植后整合于视网膜的BMSCs中，部分细胞显示NSE、GFAP、NF200阳性。结论 移植于缺血再灌注损伤眼视网膜下的BM—SCs具有向损伤部位迁移和分化为神经样细胞的能力。