眼科的抑癌基因

一、抑癌基因的概念抑癌基因的概念最初是由 Kundson于 1985年在对视网膜母细胞瘤的研究中发现并提出的 ,是指当这类基因发生突变、缺失或失活时可引起细胞恶性转化而导致肿瘤的发生。 1986年 Sager将抑癌基因的概念扩大 ,认为所有产生可抑制肿瘤生成和发展的因素都可称为抑癌基因。并将其分为 4类 :1癌基因产物的拮抗物 ,2干扰素 ,3生长抑素 ,4控制染色体稳定的因素。随着研究的深入 ,抑癌基因的概念逐渐被缩窄 ,新的抑癌基因的概念是 :抑癌基因是一大类可抑制细胞生长并能潜在抑制癌变作用的基因群 ,它仅在某一种特定的细胞内起作用。确…     

大鼠视网膜干细胞与神经干细胞体外增殖、分化特点比较

目的 通过对大鼠视网膜干细胞和神经干细胞体外增殖、分化特点进行比较,进一步明确视网膜于细胞自我更新及向神经细胞方向分化的能力.方法 实验研究.分离出生10 d大鼠睫状体区组织及新生大鼠脑组织,分别应用酶消化法将两种组织制成单细胞悬液,放入含有20 μg/L碱性成纤维细胞生长因子、20μg/L表皮生长因子及1×B27添加剂的无血清DMEM/F12培养液中培养,观察并比较视网膜干细胞及神经干细胞体外增殖的特点.分别取第2代细胞,应用免疫细胞化学染色法检测干细胞特异性抗原神经巢蛋白（nestin）及细胞分裂增殖标志物5-溴脱氧尿核苷（BrdU）的表达.同时,应用含50 ml/L的胎牛血清及1×N2添加剂的培养基促进其分化,观察两种细胞向神经细胞方向分化的特点：分别应用免疫细胞化学染色法对分化后的细胞nestin、神经无标志物神经元特异性烯醇酶（NSE）、神经胶质细胞标志物神经胶质酸性蛋白（GFAP）进行检测,并应用卡方检验对两种干细胞分化后的NSE及GFAP阳性细胞数比例进行比较.结果 两种细胞原代培养48 h后均可见小的球状细胞团悬浮生长,折光性强.原代培养约7 d后传代,传代后细胞能重新形成球状细胞团,应用免疫细胞化学染色方法均可检测到细胞内nestin及BrdU的阳性表达,视网膜干细胞体外增殖的能力较神经干细胞弱.两种细胞均可在血清诱导条件下转变为贴壁生长,并分化出具有神经细胞形态的细胞.诱导第7天进行免疫细胞化学染色,检测出两种干细胞表达nestin阳性细胞数比例分别为（9.5±3.5）%及（9.1±0.7）%.视网膜干细胞分化后NSE及GFAP的阳性细胞数比例分别为（11.2±2.8）%及（18.9＋2.1）%,低于神经干细胞分化后两种标志物阳性细胞数比例[（34.1±63）%及（41.9±3.3）%],NSE、GFAP在两组表达的差异均有统计学意义（x2=103.23,P＜0.05;x2=74.36,P＜0.05）.结论 来源于睫状体区的大鼠视网膜干细胞形态、体外增殖及可分化特性与神经干细胞相似,但其增殖及分化为神经细胞的能力较神经干细胞弱.     

激活素A在人皮肤微血管内皮细胞中的表达及对其增殖的抑制作用

目的将真核表达质粒pEGFP-AetivinA以脂质体介导转染人皮肤微血管内皮细胞,观察能否在细胞内表达,为进一步研究其作用奠定基础。方法pEGFP-AetivinA扩增和酶切鉴定;原代培养人皮肤微血管内皮细胞,以脂质体介导将真核表达质粒pEGFP-AetivinA转染该细胞,于一定时间内在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,MTT法检测基因转染对人皮肤微血管内皮细胞增殖的影响。结果转染后48h在荧光显微镜下人皮肤微血管内皮细胞可见发出绿色荧光,72h发出绿色荧光的细胞增多,强度增强;转染后48h与72h,转染组与对照组比较细胞增殖有明显的抑制,差异有显著性（P〈0．05）。结论脂质体可介导pEGFP-AetivinA转染人皮肤微血管内皮细胞,并在细胞内有较高表达,pEGFP-AetivinA基因转染抑制了人皮肤微血管内皮细胞的增殖。     

可吸收明胶海绵载体与骨髓间充质干细胞的相容性

目的探讨可吸收明胶海绵的生物相容性,为其作为骨髓间充质干细胞（BMSCs）的有效载体进行眼内移植奠定基础。方法体外培养BMSCs,接种于可吸收明胶海绵,观察BMSCs的黏附、增生情况,采用乳鼠视网膜细胞条件分化液诱导,观察BMSCs的分化情况并行免疫组织化学鉴定。结果在乳鼠视网膜条件分化液的环境中,接种后72h,BMSCs伸出伪足黏附于可吸收明胶海绵表面。诱导后的细胞呈现神经元细胞的典型形态,免疫组织化学显示神经元特异性烯醇化酶（NSE）和巢蛋白（nestin）阳性。结论BMSCs能够在可吸收明胶海绵上较好地黏附、增生及分化,可吸收明胶海绵具有良好的生物相容性。     

GAP-43在新生大鼠视网膜及其诱导的骨髓间充质干细胞向视网膜神经节样细胞分化过程中的表达

目的 探讨生长相关蛋白43(growth associated protein,GAP-43)在新生大鼠视网膜发育过程中及在以新生大鼠视网膜细胞诱导体外培养的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cell,BMSC)向视网膜神经节样细胞定向分化中的作用.方法 体外培养新生3 d大乳鼠视网膜细胞,应用免疫细胞化学方法检测GAP-43的表达;提取新生大鼠视网膜细胞总RNA,应用RT-PCR方法检测GAP-43 mRNA的表达.体外培养大鼠BMSC至第3代,经流式细胞仪检测干细胞表面标志物进行鉴定,应用乳鼠视网膜细胞诱导BMSC分化,观察诱导后细胞的形态学变化,并应用免疫细胞化学方法对诱导后第5天的细胞进行神经元及视网膜神经节细胞标志物NSE、nestin、GAP-43、thyl.1鉴定,并应用RT-PCR的方法检测、分析GAP-43 mRNA的表达情况.结果 体外培养的新生大乳鼠视网膜细胞应用免疫细胞化学方法可检测到GAP43阳性表达;RT-PcR方法检测到新生大鼠的GAP-43 mRNA的表达;第3代BMSC经流式细胞仪检测CD71(+)、C LY29(+)、CD34(-)、CD45(-),经与大乳鼠视网膜细胞共培养的方法可诱导BMSC分化为视网膜神经节样细胞,免疫细胞化学染色表明其表达特异性标志物NSE、nestin、GAP-43、thyl.1,分化后的神经节样细胞内可检测到GAP-43 mRNA阳性表达:结论本研究结果显示CAP-43不仅参与了大鼠视网膜发育过程,且GAP-43在以乳鼠视网膜细胞诱导BMsc定向分化为视网膜神经节样细胞这一过程中具有重要意义.     

家族性渗出性玻璃体视网膜病变致病基因研究进展

家族性渗出性玻璃体视网膜病变（ｆａｍｉｌｉａｌｅｘｕｄａｔｉｖｅｖｉｔｒｅｏｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ,ＦＥＶＲ）是一种罕见的遗传性视网膜血管发育异常的疾病,具有遗传异质性,遗传模式、表型和病程多样性的特点。ＦＥＶＲ遗传方式包括常染色体显性遗传、常染色体隐性遗传和Ｘ染色体隐性遗传。近年来,对ＦＥＶＲ致病基因的研究有了新的进展,目前已经发现的基因有ＦＺＤ４、ＬＲＰ５、ＮＤＰ、ＴＳＰＡＮ１２、ＺＮＦ４０８和ＫＩＦ１１,其中前４种基因被证实参与Ｎｏｒｒｉｎ／Ｆｒｉｚｚｌｅｄ-４信号通路,在视网膜血管生成过程中起重要作用。本文主要就ＦＥＶＲ致病基因的最新研究进展做一综述。     

视网膜光损伤的研究进展

视网膜是接受光能、产生视觉的重要组织结构,但视网膜也是眼组织中最易受光损害的部位。当光强度或光照时间等超过了视网膜的防御能力,就会造成视网膜损伤。过多的光照射在AMD的形成和发展中起着非常重要的作用。实验研究发现不同的光损伤动物模型表现出视网膜不同的形态改变,损伤程度与多因素相关,如：光照强度、照射时间、模型物种等。视网膜光损伤致病及其防御机制的研究是目前眼科领域的一个重要研究课题。现对视网膜光损伤的相关研究进行了综述。     

应用组织块培养法对大鼠视网膜干细胞进行分离培养及鉴定

目的:应用组织块培养大鼠视网膜干细胞的有效性。方法:机械分离出生10d大鼠睫状体组织,剪成细小组织块,置入20μg/L碱性成纤维细胞生长因子、20μg/L表皮生长因子及1×B27添加剂的无血清DMEM/F12培养液中培养,同时取大鼠胚胎脑组织,应用常规机械-酶消化法进行神经干细胞的分离培养作为阳性对照。应用免疫荧光染色检测神经干细胞特异性抗原神经巢蛋白(nestin)的表达,应用含100mL/L的胎牛血清的培养基促进其分化以确定其神经干细胞特性。结果:原代培养48h后在组织块边缘开始出现细胞团,折光性强,呈球形或者桑葚状悬浮生长。培养4～5d后,悬浮生长的细胞团数量增多,出现较大的细胞团,原代培养7d后传代,传代后细胞能重新形成细胞团。应用免疫荧光方法可检测到细胞内nestin阳性表达,且视网膜干细胞可在以血清为诱导条件下变为贴壁生长,并分化出具有神经细胞形态的细胞。其形态、增殖及可分化特性与作为阳性对照的神经干细胞相似。结论:组织块培养法对细胞损伤小,操作简便,可成功对大鼠视网膜干细胞进行分离培养。     

Rb基因扩增与视网膜母细胞瘤发生的关系初步探讨

在对视网膜母细胞瘤病人的Rb 基因存在状态进行检测时,发现一例患者体细胞Rb 基因有明显扩增改变。Rb 基因在视网膜母细胞瘤患者中的扩增改变,为首次报导,是否意味着Rb 基因扩增与肿瘤发生有着某种关联。     

视盘金属异物一例

患者,男,5岁,住院号218179。一周前雷管炸伤右眼,1990年1月12日入院。检查眼压Tn,右眼角巩膜缘5点可见1.5毫米长闭合伤口,玻璃体轻度混浊,视盘表面颞侧半可见一棕褐色金属异物嵌入,周围视网膜水肿,黄斑区尚正常。X光照片,右眼异物显影。诊断:右眼角巩膜穿通伤、视盘异物、玻璃体混浊,1月20日全麻下行异物取出术。