酶联免疫吸附试验与中和抗体试验检测麻疹抗体比较研究

目的探讨酶联免疫吸附试验(ELISA)和中和抗体试验(NT)在麻疹抗体检测中的应用价值。方法以NT为"金标准",同时用德国Virion/Serion的定量ELISA试剂盒检测364份麻疹抗体滴度,将两种方法测定的结果进行比较。结果 NT的阳性率为57.69%,几何平均滴度(GMT)为1∶5.48,ELISA的阳性率为42.86%,平均抗体活性值为48.57IU/L。定性结果发现,ELISA特异度为99.35%,其敏感度即阳性符合率为73.81%,且阳性符合率随着滴度增加呈现增高的趋势(z=-5.99,P<0.001)。Fisher精确概率法发现,滴度1∶2组、滴度1∶4组与其他各组阳性符合率差异均有统计学意义(P<0.05),滴度1∶8组与滴度≥1∶64组阳性符合率差异有统计学意义(P<0.05),其余各组间阳性符合率差异均无统计学意义(P>0.05)。定量结果发现,ELISA抗体活性值与NT滴度呈明显正相关,相关系数r=0.884,P<0.001。结论德国Virion/Serion的定量ELISA试剂盒在检测低滴度麻疹抗体时易出现假阴性,检测高滴度麻疹抗体时,两种方法敏感性接近;滴度临界值为1∶8～1∶16。该试剂可推荐用于健康人群麻疹抗体水平监测。     

宁波市2004-2013年麻疹野病毒分离株的RT-PCR检测与分析

目的 分析宁波2004-2013年麻疹野病毒的分子生物学特征。方法 采用RT-PCR 对宁波2004-2013年分离的麻疹野毒株核蛋白基因碳末端450个核苷酸进行扩增,序列测定后与基因库中麻疹病毒各基因型参考株作比对分析。结果 宁波2004-2013年分离的31株麻疹病毒均为H基因型,其中6株(包括2004年1株及2005年5株)为H1b亚型,其它均为H1a亚型。基因同源性比对结果显示,31株麻疹病毒与H1a亚型参考株China93-4的同源性为97.1%～100%,与H1b亚型参考株China94-7的同源性为96.7%～100%,与中国疫苗株S191的核苷酸同源性为81.9％～92.4％,氨基酸同源性为87.2％～90.6％。结论 宁波2004-2013年麻疹病例主要由本土病毒株(H1亚型)传播引起,H1a基因亚型为绝对优势基因亚型,H1b亚型处于相对弱势,H1a亚型5个小分支病毒株引起的多个传播链造成麻疹野病毒在宁波广泛流行。     

一起甲型病毒性肝炎暴发疫情的病原学诊断与基因分析

目的 查明引起2004年宁波局部地区甲型病毒性肝炎（甲肝）暴发疫情的病原并分析其基因特征。 方法 用酶联免疫吸附试验检测血清中的甲肝病毒IgM抗体（HAV IgM）和戊型肝炎病毒IgM抗体（HEV IgM），利用逆转录-聚合酶链反应（RT PCR）检测粪便样品中的HAV核酸（RNA）并扩增VP1基因，测序结果利用DNA star软件进行比对分析。 结果　172份血清样品中HAV IgM均为阳性，HEV IgM均为阴性。172份粪便样品中共检测到HAV RNA阳性样品74份，占43.0%。选择5份样品进行HAV VP1基因扩增并测序，测序结果经过比对后发现4株宁波株(NB2004-10、NB2004-11、 NB2004-51和 NB2004-71)的VP1基因是完全一致的；NB2004-75与以上4株的核苷酸的同源性为99.9％，氨基酸的同源性为99.7％；宁波株与HAV各基因型标准株比较， 与IA亚型毒株AH2的核苷酸和氨基酸的同源性最高， 分别为98.9％和99.7%～100.0％；与中国其他地区流行株比较，核苷酸和氨基酸的同源性波动于89.4%～96.7%和97.0％~100.0％。结论　引起这次肝炎暴发疫情的病原是甲肝病毒，其基因型为IA亚型，与日本株AH2、AH3亲缘关系最近，与中国其他地区流行株处于不同的进化簇上。     

宁波市2003年以来乙型流感病毒监测结果与HA1序列分析

目的：了解近年来宁波市乙型流行性感冒病毒流行和抗原性的变异情况及种系分布。方法：采用狗肾传代细胞（MDCK）培养分离流感病毒，经血清学鉴定后提取病毒RNA，经聚合酶链式反应扩增目的基因后进行乙型流感病毒的HA1区域基因片段的核苷酸序列测定。结果：2003～2005年6月共分离到乙型流感病毒22株，血清学鉴定结果除2株为Victoria系的毒株以外，其余20株均为Yamagata种系。在时间的分布上2003及2004年都有Yamagata和Victoria系的毒株出现。血凝素基因重链区（HA1）基因片段的核苷酸序列测定结果，两个系列的毒株都有一些小的变异，但Yamagata系的毒株变异更明显些。2005年分离到的Yamagata系乙型流感与Shanghai／01／2000株相比已经有7个氨基酸被替代，它们的同源性只有97．6％。结论：宁波市乙型流感病毒大多以散发存在为主，抗原性有一定的漂移。     

宁波市2002～2004年流行性感冒的检测与HA1序列分析

目的：为了解近年来宁波市流行性感冒的流行情况以及病毒抗原性的变异情况。方法：采用MDCK细胞培养和鸡胚培养法分离流感病毒，交叉血凝抑制法进行抗原分析，对甲3型流感病毒的HA1血凝素基因作了核苷酸序列测定。结果：2002年-2004年共分离到流感病毒330株，其中甲3型324株(98．2％)、甲1型1株(0．3％)、乙型5株(1．5％)。甲3型毒株2002年与2003年及2004年的抗原比分别为1．9和2．45，核苷酸序列测定结果2002年～2004年HA1区约以5个氨基酸改变的速度变异。结论：3年来宁波市一直以甲3型流感为主要流行株，甲1型及乙型流感则以散发存在。甲3型流感病毒虽说没有发生重大变异，但其抗原性每年都有一定的漂移。     

宁波市麻疹野毒株N基因片段研究

目的探讨宁波市麻疹流行株的基因型别和遗传特征。方法利用细胞培养从宁波市2004~2005年28例临床诊断麻疹病例的咽拭子中分离麻疹病毒,通过RT-PCR扩增出病毒核蛋白(N)基因C末端456bp片段进行测序,并分析其和GenBank中麻疹病毒各基因型代表株的同源性。结果分离到8株麻疹病毒,其N基因片段与H1型代表株Hunan.CHN的同源性为97.6%~98.5%,与麻苗Shanghai-191的同源性为92.8%~93.4%。结论宁波市麻疹流行株属于H1基因型。     

327例放射工作人员淋巴细胞微核检测分析

淋巴细胞微核与染色体畸变有密切关系,采用微核测定检测染色体损伤具有简便、快速、可靠的特点〔1〕。据有关资料报道,放射性工作者长期小剂量照射后淋巴细胞微核有所改变〔2〕。为了解我市放射工作人员的健康状况,给防护条件的整改提供依据,我们对我市327名放射接触人员进行健康体检,本文就淋巴细胞微核检测结果进行分析。对象与方法1.对象　调查组为从事医用诊断、治疗的Ｘ射线工作者及厂矿企业中从事同位素和探伤工作的放射接触人员共327例,其中男256例、女71例;年龄20～72岁,平均35.4岁;放射工龄1～50年,平均11.4年。选择45例未接触放射…     

宁波市甲3型流感的流行与基因演变连续7年监测分析

目的了解甲3型流感病毒的抗原变异与流感流行的关系。方法用狗肾传代细胞(MDCK)分离流感病毒,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增血凝素基因产物,纯化后进行核苷酸序列测定。结果2002~2008年,宁波市流感流行有春季和夏秋季两个季节性高峰,而病毒抗原性突变大多发生在夏秋季这一季节。2002~2005年在血凝素基因HA1片断的变异较快,且第225~228位之间的氨基酸每年都有突变;而2005~2008年间这一区域却相当稳定。结论同一亚型的流感病毒在春季刚流行后紧接着夏秋季再次引起流行这可能与病毒的变异多数发生在每年的下半年有一定联系。甲3型流感2002~2005年的流行强度较2005~2008年强,可能与前者的血凝素基因HA1片断第225~228位每年都发生改变而后者却相当稳定有关。     

宁波地区人轮状病毒NSP4基因特征分析

目的研究宁波地区2005-2006年新生儿感染的A组轮状病毒NSP4基因特征及变异情况。方法利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测新生儿病毒性腹泻便样中的轮状病毒核酸,选择部分阳性样品通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NSP4全基因并测序,测序结果利用DNAstar和Blast软件进行比较分析。结果在20份新生儿病毒性腹泻便样中共检测到RV阳性样品10份;选择4份阳性样品进行NSP4基因扩增并测序,均能扩增出750bp片段;4个宁波株与标准株Wa、KUN和AU-1的核苷酸同源性分别为93.7%～94.4%、80.5%～81.2%和80.0%～80.8%,与1994-1998年中国其他地区流行株核苷酸和氨基酸的同源性为92.8%～98.9%和93.7%～99.4%。结论在宁波新生儿中有A组轮状病毒的流行,4个宁波株的NSP4基因均为Wa型,RVNSP4蛋白的3个功能区在中国大陆十几年的进化中是高度保守的,宁波株出现了一些特征性的氨基酸变异位点。