建立禽流感H7和H9亚型荧光定量PCR检测方法

目的建立高致病性禽流感H7和H9亚型荧光定量PCR方法。方法根据禽流感病毒(avian influenzavirus,AIV)HA-H7基因和HA-H9基因分别设计特异AIV H7和H9亚型特异荧光定量PCR引物和探针,优化反应体系和反应条件,分析该试剂的敏感性、特异性、重复性等。结果经优化反应体系和反应条件后,AIV H7试剂和AIV H9试剂的敏感性达到1×104.67EID50和1×103.80EID50水平,特异性与细胞培养敏感性类似;批内和批间精密度Ct值的CV值均远小于10%,可重复性良好。结论本项目研制的AIV H7和H9亚型的敏感性、特异性、重复性均好,适合在禽流感H7和H9亚型疫情和人类疑似禽流感病例中检测使用。     

黄曲霉毒素B1快速检测方法的研究进展

黄曲霉毒素B1是黄曲霉毒素系列中毒性、危害性、污染性最大的一种,且分布广,对世界范围内的大多数食品原料及成品均有不同程度的污染,严重威胁人类健康。目前,国内外对于黄曲霉毒素B1的检测要求越来越高,新发展起来的快速分析技术也逐渐应用于黄曲霉毒素B1的检测,除了常规的液相色谱法、薄层层析法、胶体金法、酶联免疫吸附法得到更充分的研究和应用外,时间分辨荧光免疫法等新兴免疫学快速检测方法以及具有创新意义的ELISA-TLC组合分析法也已初步建立,这些为实现快速筛查、现场快检,提高检测效率、降低检测成本提供了很好的思路;同时也为更好地维护人民群众饮食安全提供重要支撑。本文就黄曲霉毒素B1的快速检测方法做一综述,以期为进一步提高对黄曲霉毒素B1的监控水平和效率提供参考。     

寡核苷酸芯片用于HLA-A基因分型的研究

目的 应用寡核苷酸芯片分型方法，对HLA-A基因进行分型研究。方法 采用不对称PCR方法，扩增HLA-A基因的第2，3外显子，荧光标记扩增产物，作为杂交模板。设计分型检测寡核苷酸探针，制备HLA-A基因分型检测芯片。采取差异选择法，筛选强杂交信号和高特异性的分型探针。探索了探针长度、探针位置等对杂交信号的影响。杂交结果经荧光扫描，并用分型软件分析判断阳性探针和HLA-A基因型。结果 30例临床样本芯片分型结果与PCR-SSP及DNA测序分型结果相符。结论 采用寡核苷酸芯片技术对HL-A基因分型是种好的方法，具有测速快、成本低、高通量的优点。     

寡核苷酸芯片用于HLA-B分型的初步研究

HLA基因具有复杂的多态性。本研究根据HLA-B基因序列的多态性，设计了一套寡核苷酸探针，井用基因芯片点样仪点样到醛基修饰的载玻片上，制成寡核苷酸芯片用于HLA-B基因的分型。本研究以克隆井已测序的HLA—B基因序列作为标准样品，经PCR分别扩增其具有多态性的第二和第三外显子，PCR扩增产物与芯片进行杂交，利用分析软件将杂交模式转变成为HLA—B基因型。结果表明，利用芯片进行分型的结果与标准样品序列结果完全符合。结论：寡核苷酸芯片用于HLA—B基因分型是一种简便、快捷和有前景的方法。     

突变和修饰IFN-α2b基因的5’和3’端对其在E.coli表达的调控作用

目的对人 IFN- α2 b基因进行突变和修饰 ,从翻译水平上调控 IFN- α2 b基因在大肠杆菌中的表达。方法采用PCR技术 ,人工合成寡核苷酸引物 ,对人 IFN- α2 b基因进行了改造 :在不改变氨基酸的前提下 ,将 5’端编码区的四个 G、C位点突变为 A、T;去除 3’端非编码区。将突变和修饰后的基因片段分别克隆入原核表达载体 p BV32 1,在大肠杆菌中进行表达。对表达产物进行活性效价测定。结果 3’端删除非编码区 ,表达水平比删除前提高 4倍 ;5’端四个位点突变 ,表达水平比突变前降低 2倍。结论 IFN-α2 b基因的 3’端非编码区抑制其在原核系统的表达 ,删除该区可提高表达水平     

液相芯片技术在人乳头瘤病毒分型检测中的应用

目的构建人乳头瘤病毒(HPV)基因分型的液相芯片,针对中国常见的23种型别的HPV进行分型检测,并探讨其在临床应用中的特异性和敏感性。方法采用HPV通用型引物MY09/11以及一条简并引物对临床样本进行PCR扩增;针对HPV不同型别设计分型探针,并偶联到Luminex微球上,通过LuminexTM平台对PCR产物进行分型检测。同时以测序法作为验证标准,对液相芯片法(Luminex法)检测结果进行评价。结果以测序法作为验证标准,Luminex法对314例HPV样本的分型检测结果为灵敏度98.10%,特异性98.08%,符合率98.09%。Kappa一致性检验结果为0.962。结论 Luminex法用于HPV感染样本中的分型检测具有高灵敏度和特异性,可以用于临床HPV诊断。     

生物芯片产品质量控制平台及系列生物芯片诊断试剂研究

生物芯片是20世纪90年代中期发展起来的一种具有划时代意义的微量分析技术,它综合了很多学科的最新研究成果,在药物开发和筛选、基因测序、疾病诊断等多个领域应用广泛。特别在基因突变检测、遗传性疾病、传染性疾病及肿瘤诊断等方面应用的诊断类生物芯片,具有巨大的市场前景可能形成巨大的产业,科研单位和企业均投入大量人力、财力,以期开发出新的医用生物芯片产品。     

高致病性禽流感通用和H5亚型荧光定量PCR方法的建立

目的:建立高致病性禽流感H5亚型荧光定量PCR方法.方法:根据禽流感病毒(AIV)M基因和H5-HA基因分别设计AIV通用和H5亚型特异荧光定量PCR引物和探针,优化反应体系和反应条件,分析该试剂的敏感性、特异性、重复性等.结果:经优化反应体系和反应条件后,AIV通用试剂和AIV-H5试剂的敏感性达到1×101.25EID50水平;与细胞培养比较,AIV-H5试剂Kappa吻合系数κ为0.991(P<0.01),统计学显示两种检测结果的吻合度很强;批内和批间精密度CT值的CV值均远小于10%,可重复性良好.结论:本项目研制的AIV通用试剂和AIV-H5试剂的敏感性、特异性、重复性均好,适合在禽流感疫情和疑似H5禽流感病例中检测使用.     

广东省1999年急性弛缓性麻痹病例病原学监测分析

消灭脊髓灰质炎(脊灰)是我国政府向国际社会承诺的目标,近几年,我省脊灰实验室的工作人员经过不断的努力,高质量地完成我省急性弛缓性麻痹病例(ＡＦＰ)病原学的监测工作,为消灭脊灰的证实工作提供了可靠的资料。现将1999年的实验室监测结果分析如下:1　材料和方法11　资料来源全省的ＡＦＰ病例监测系统。12　ＡＦＰ病例粪便标本由ＡＦＰ病例报告的医院或卫生防疫站采集,冷藏送省卫生防疫站脊灰实验室。13　病毒分离和鉴定所用ＲＤ、Ｌ20Ｂ细胞和脊灰病毒(ＰＶ)标准血清由国家脊灰实验室提供。粪便标本处理、病毒分离和鉴定方法均参照ＷＨＯ…     

突变和修饰IFN—α 2b基因的5‘和3’端对其在E.coli表达的调控作用

目的 对人ＩＦα２ｂ基因进行突变和修饰,从翻译水平上调控ＩＦα２ｂ基因在大肠杆菌中的表达。方法 采用ＰＣＲ技术,人工合成寡核苷酸引物,对人ＩＦＮ－α２ｂ基因进行了改造;在不改变氨基酸的前提下,将５‘端编码区的四个Ｇ、Ｃ位点突变为Ａ,Ｔ;去除３’端非编码区,将突变和修饰后的基因片段分别克隆入原核表达载体ｐＢＶ３２１;在大肠杆菌中进行表达,对表达产物进行活性效价测定。结果 ３‘端删除非编码区,表达水平