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免疫磁珠与荧光定量逆转录聚合酶链反应在胃癌患者外周血癌细胞检测中的应用价值 总被引:3,自引:0,他引:3
目的研究免疫磁珠和荧光定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)检测胃癌患者外周血癌细胞的应用价值。方法将不同浓度的人胃腺癌细胞系MGC803细胞加入到健康人血中,经淋巴细胞分离液收集单核细胞后,等分4份。其中1份直接用于提取RNA(方法Ⅰ)、其他分别用阴性磁珠(方法Ⅱ)、阳性磁珠(方法Ⅲ)及联用阴性和阳性磁珠(方法Ⅳ)富集癌细胞。然后,以癌胚抗原(CEA)mRNA作为分子标志物进行荧光定量RTPCR检测其相对拷贝数;并检测45例胃癌、30例胃溃疡患者和30名健康人外周血CEAmRNA。结果方法Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ测得的CEAmRNA相对拷贝数与癌细胞数间有良好的相关性(方法Ⅱ和ⅢP<005;方法ⅣP<001),尤以Ⅳ方法为佳,可检测出每毫升血中含有的1个胃癌细胞。Ⅰ~Ⅳ方法检测胃癌患者阳性率分别为4222%、5333%、5111%和6444%;方法Ⅳ与方法Ⅰ比较,差异有显著意义(P<005)。用方法Ⅳ检测30例胃溃疡患者均为阴性,而其他3种方法检出2例阳性;30名健康人中4种方法均未检出扩增产物。结论免疫磁珠与荧光定量RTPCR法可提高胃癌患者外周血CEAmRNA的检出率。 相似文献
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目的:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,观察 RNA干扰沉默生存素基因对胃癌MGC-803细胞增殖的影响.方法:用脂质体介导将生存素siRNA表达质粒转染 MGC-803细胞,通过倒置显微镜观察转染后细胞形态学的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期的变化,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测生存素mRNA的表达水平.结果:生存素siRNA表达质粒转染组MGC-803细胞变圆、浮起,生存素siRNA表达质粒明显下调MGC-803 细胞内生存素mRNA的表达,与空白对照组相比降低了48.2%,阻断细胞周期在G1期(77.4%),显著抑制细胞增殖,siRNA转染组细胞吸光度比空白组显著降低 (24 h:0.272±0.048 vs 0.576±0.018;48 h:0.270±0.060 vs 0.809±0.027;72 h:0.143±0.046 vs 1.015±0.075;均 P<0.01).转染24,48和72 h后的抑制率分别为53.4%, 66.7%和86.3%.结论:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,可有效下调生存素在MGC-803细胞中的表达,并在体外抑制细胞的增殖. 相似文献
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芦荟大黄素抑制人口腔癌KB细胞增殖和迁移的双重效应及其机制研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨芦荟大黄素抑制人口腔癌细胞生长和迁移的双重效应及其机制.方法 对人口腔上皮癌KB细胞分别用2.5、5、10、20和40 μmol/L的芦荟大黄素处理,对照组为含0.1%二甲基亚砜的培养液,分别用结晶紫实验和划痕损伤愈合迁移实验分析长效抗增殖作用和抗迁移效应,并用Western blotting方法 检测蛋白激酶Ca和c-myc蛋白水平的变化.结果 芦荟大黄素能长时间抑制KB细胞的生长;划痕损伤愈合迁移实验结果 显示,药物处理3 d后进入划痕区域的细胞数为(6.2±0.2)个/mm2,而对照组为(33.5±0.4)个/mm2,差异有统计学意义(P<0.05);对照组细胞抑制蛋白激酶Ca和c-myc的水平较高,经芦荟大黄素处理后,均以剂量依赖方式下降.结论 芦荟大黄素的抗增殖和抗迁移活性与抑制蛋白激酶C信号传导途径有关. 相似文献
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目的:探讨替米沙坦对自发性高血压大鼠(SHR)血管前纤维蛋白1(Profmn-1)及细胞外信号调节激酶(ERK1/2)磷酸化水平的影响。方法:选取10周龄SHR及其同源对照魏-凯氏(WKY)大鼠,给予替米沙坦(5~10mg/kg·d)或安慰剂,为期10周。尾套法测量大鼠尾血压。采用实时定量聚合酶链式反应(PCR)和Western免疫印迹检测治疗后大鼠主动脉组织中Profilin-1mRNA和蛋白及ERK1/2磷酸化水平。结果:与WKY对照组相比,SHR大鼠血压明显升高[(126±3.5)mmHg:(195±6.1)mmHg],伴血管Profilin—1mRNA[(1.0±0.11);(7.8±0.57)]及ERK硫酸化水平[(1.0±0.11):(2.43±0.19)]表达明显升高(P均〈0.01),而经替米沙坦治疗后SHR大鼠血压明显降低[替米沙坦低剂量组(169±6.2)mmHg,高剂量组(161±4.9)mmHg],伴Profilin-1mRNA[替米沙坦低剂量组(4.45±0.92),高剂量组(1.95±0.41)]表达及ERK1/2磷酸化水平[替米沙坦低剂量组(1.62±0.20),高剂量组(1.34±0.09)]明显下调(P均〈0.05)。结论:长期替米沙坦治疗可降低高血压大鼠血压水平,降低血管Profilin-1表达及ERK1/2磷酸化水平,提示替米沙坦对高血压血管重塑具有一定的保护功效。 相似文献
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联用免疫磁珠及定量RT-PCR检测胃癌外周血微转移 总被引:5,自引:0,他引:5
目的探讨联用免疫磁珠和定量RT-PCR检测胃癌患者外周血微转移的方法学及意义.方法首先将人胃癌MGC-803细胞以不同浓度加人到健康人外周血中,其次用淋巴细胞分离液收集单核细胞,然后等分成4份分别用4种方法处理--直接扩增(A方法)、阴性磁珠筛选(B方法)、阳性磁珠筛选(C方法)及联用阴性和阳性磁珠筛选(D方法),最后用定量RT-PCR检测β2 微球蛋白mRNA和癌胚抗原(CEA)mRNA并计算出相对CEA.mRNA值.同法测定41例胃癌、10例良性胃病患者和5例健康人外周血CEA mRNA.结果参照模型中D方法测出的相对CEA mRNA值均小于A、B和C方法测出的,其检测灵敏度为每ml血含有1个癌细胞.41例胃癌患者中用A、B、C和D方法测出的阳性例数分别为19例(46.34%)、23例(56.10%)、22例(53.66%)和27例(65.85%);D方法与A方法比较,P<0.05.D方法检测10例良性胃病均为阴性,而用其它3种方法检测有1例阳性;5例健康人均未见扩增.结论联合使用免疫磁珠阴性、阳性筛选和定量RT-PCR可提高胃癌患者外周血微转移的检出率. 相似文献
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非编码RNA是指除mRNA、tRNA和rRNA以外,不编码蛋白质的RNA分子.它们在细菌、真菌和哺乳动物等许多生物体的重要生命活动中发挥着极广泛的调控作用.近年来研究表明,非编码RNA既可作为癌基因,也可作为抑癌基因,对肿瘤的发生、发展产生重大的影响.同时,非编码RNA又有希望成为肿瘤诊断的标志物和肿瘤治疗的新靶点.作者综述了小干扰RNA和微小RNA等主要非编码RNA与肿瘤关系的最新研究进展. 相似文献
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植物雌激素大豆苷原(daidzein)对结肠癌LoVo细胞生长的影响 总被引:3,自引:0,他引:3
目的 了解植物雌激素大豆苷原(daidzein)对结肠癌细胞生长的影响。方法 取对数生长期的人结肠癌细胞株LoVo细胞,以不同浓度的大豆苷原处理细胞2,3,4和6d,然后应用MTT法测定细胞的生长率。结果 大豆苷原在高浓度100μmol/L时在体外对LoVo有明显的抑制作用(P<0.01),而在低浓度<5μmol/L时对LoVo细胞又具有促增殖作用。结论 大豆苷原在体外对LoVo细胞的生长具有促进和抑制的双向作用。 相似文献
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从江西,浙江和福建三省中随机抽取三代均为畲族的120例无关个体测定其ABO血型,结果为A型24人,B型38人,O型51人,AB型7人;基因频率为:p=0.1388,q=0.2094,r=0.6518。本文较全面了反映了畲族ABO血型的分布特点,为研究畲族的起源与变迁提供了有价值的资料。 相似文献
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目的 探讨微小RNA(microRNA,miRNA)对体外培养的人舌鳞状细胞癌TeaS113细胞增殖的影响.方法 用脂质体把miRNA-31和miRNA-139的类似物或抑制物分别导人人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,分别为实验组,脂质体试剂为对照组,然后用甲基噻唑基四唑(MTT)法检测细胞增殖情况.结果 对照组吸光度值(A值)在24、48和72 h时分别为(0.125±0.002)、(0.169±0.002)和(0.216 4±0.004);miRNA-31类似物可促进Tca8113细胞增殖,使其A值分别增至(0.136±0.001)(P<0.001)、(0.186±0.004)(P<0.001)和(0.249±0.012)(P<0.01);miRNA-139抑制物也使A值分别增加到(0.148±0.002)(P<0.001)、(0.214±0.002)(P<0.001)和(0.250±0.009)(P<0.01).与此相反,miRNA-31抑制物在48、72 h时抑制Tea8113细胞增殖,其A值分别降至(0.145±0.001)和(0.155±0.011)(P<0.001);mjRNA-139类似物在24、48 h也分别使A值降至(0.135±0.001)和(0.170±0.009)(P<0.001).结论 miRNA-31和miRNA-139在人舌鳞状细胞癌发生过程中起着重要作用,调整其活性有可能成为一种有效治疗口腔癌的新方法. 相似文献
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miRNA检测技术进展及其在医学检验中的应用 总被引:2,自引:1,他引:2
miRNA是一类21~23个核苷酸左右的非编码单链小RNA,首先由Lee等[1]于1993年在秀丽线虫中发现.Reinhart 等[2]于2000年发现miRNA具有控制线虫发育的重要功能.随后,miRNA成为医学研究的热点之一. 相似文献