重组日本血吸虫中国大陆株rTPI分子对小鼠免疫保护性作用的研究

目的研究重组日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶（SjC－TPI）分子抗血吸虫感染的保护性作用。方法用IPTG诱导表达,制备纯化的重组TPI蛋白,将重组TPI抗原免疫C57BL／6及昆明鼠,8周后用血吸虫尾蚴攻击感染,45d后剖杀,计数减虫率及减卵率。结果C57BL／6获得27．78％的减虫率;昆明鼠获得21．39％的减虫率,54．00％的减卵率。结论重组SjC－TPI对血吸虫感染具有一定的保护作用,可能为日本血吸虫病疫苗候选分子之一。     

重组日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶蛋白质表达、纯化及特性分析

磷酸丙糖异构酶（ＴＰＩ）是已被公认的血吸虫病疫苗候选分子之一,本研究将日本血吸虫中国大陆株ＴＰＩ分子基因ＤＮＡ片段定向克隆到表达载体ｐＧＥＸ－４Ｔ－３（编码２６ｋＤａ的ＧＳＴ蛋白）中,构建重组表达质粒,然后转化大肠杆菌ＢＬ２１感受态细胞,阳性克隆用ＩＰＴＧ诱导,阳性菌株可表达分子量约５５ｋＤａ的融合蛋白（ＧＳＴ－ＴＰＩ）,此融合蛋白可与ＧｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ结合成复合物,用凝血酶切割融合蛋白复合物,获得分子量约２８ｋＤａ的重组表达ＴＰＩ分子。重组ＴＰＩ分子具有磷酸丙糖异构酶活性,并能被日本血吸虫重感染兔血清,血吸虫病人血清所识别。重组ＴＰＩ免疫家兔产生抗体的效价最高可达１∶２５６００,该血清抗体能识别日本血吸虫中国大陆株成虫抗原中分子量约２８ｋＤａ的蛋白条带。     

血吸虫病抗独特型抗体疫苗及NP30/短程抗体检测试剂盒

作者采用创新途径制备并筛选出日本血吸虫单克隆抗独特型抗体(anti-id)NP30,证实NP30系肠相关抗原(GAA)的内影像分子,为虫卵肉芽肿形成的致敏原,可替代虫源性抗原用于血吸虫病疫苗及免疫诊断的研究,研制出血吸虫病抗独特型抗体疫苗、免疫增强剂及NP30/短程抗体检测试剂盒。证实NP30对多个品系小鼠(BALB/c、C57BL/6、ICR、昆明种)具有较好的保护作用,减虫率达到39.53％～50.46％,主动免疫山羊可诱导42.78％     

抗日本血吸虫单链抗体免疫毒素的构建 表达及生物学活性鉴定

目的构建抗日本血吸虫单克隆抗体NP11-4单链抗体和绿脓杆菌外毒素衍生物PE38KDEL的原核融合表达载体,并对其表达产物进行生物学活性鉴定。方法应用PCR方法体外扩增NP11-4VH、VL、scFv和PE38KDEL基因,经测序后将scFv及PE38KDEL基因通过限制性内切酶双酶切及连接反应,构建原核表达载体pBAD/gIIIA-scFv-PE38KDEL,转化E.coliTop10F′,L-阿拉伯糖诱导表达,表达产物经Western blot及ELISA鉴定其活性。结果构建了重组免疫毒素表达载体pBAD/gIIIA-scFv-PE38KDEL,诱导表达产物主要以包涵体形式存在,分子量约为70kD;经变性、复性后的重组免疫毒素与血吸虫可溶性虫卵抗原有较好的结合活性。结论构建及表达了抗日本血吸虫单链抗体免疫毒素,为血吸虫病治疗提供了一条新思路。     

日本血吸虫抗独特型抗体NP30对急性血吸虫病的免疫治疗作用

目的探讨日本血吸虫抗独特型抗体NP30对急性血吸虫病的免疫治疗作用。方法根据L9（3^4）正交表设计动物实验,日本血吸虫尾蚴感染C57BL／6小鼠后注射抗独特型抗体NP30,观察不同治疗方案各组小鼠的存活时间并计算不同时问段的生存率,取小鼠肝脏石蜡切片,HE染色,测量小鼠单个虫卵肉芽肿的直径及面积。结果各实验组小鼠的生存中位数为45～78d,其中第4组生存中位数为71d,比同样感染40条尾蚴的对照组2（53d）延长了33．96％。Cox回归分析显示小鼠存活时间主要与尾蚴感染水平、抗体注射途径有关（P均〈0．05）。各实验组小鼠单个虫卵肉芽肿平均直径为179．07～226．86μm,平均面积为（32．11～5t．37）×10^3μm^2;对照组各组小鼠单个虫卵肉芽肿平均直径为205．89～239．86μm,平均面积为（44．61～57．24）×10^3μm^2。极差分析及方差分析均显示抗独特型抗体NP30的注射方式和注射剂量是影响虫卯肉芽肿平均直径和面积的主效应因素。NP30的最佳免疫治疗方案为感染尾蚴28d后,以每鼠每只20μg的剂量连续3次肌肉注射。结论抗独特型抗体NP30可改善血吸虫感染小鼠的生存状况,降低血吸虫对宿主造成的免疫病理损害,具有治疗急性血吸虫病的潜能。     

大容量天然人源Fab抗体库的构建及日本血吸虫抗独特型抗体的筛选、鉴定

目的:构建大容量天然人源Fab抗体库,筛选全人源日本血吸虫抗独特型抗体并进行初步鉴定。方法:采集15位健康成人的骨髓淋巴细胞,构建天然人源Fab抗体库。并以日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)及成虫抗原(SWAP)免疫鼠血清IgG包板进行筛选,经ELISA鉴定后,对阳性克隆进行可溶性表达。结果:构建了2×109大容量天然人源Fab抗体库,经核苷酸序列分析,证实插入片段为Fab基因片断。经过6轮筛选后,从富集的次级抗体库中随机挑取80个克隆,用ELISA法鉴定得到4个可与免疫鼠血清(Ab1)特异性结合,而不与SEA及SWAP结合的单克隆抗体(C12、C19、D1、D2),其中C12经SDS-PAGE电泳显示插入片断正确。结论:成功构建了大容量天然人源Fab抗体库,并从中获得人源日本血吸虫抗独特型抗体C12,为研制用于人体血吸虫病免疫预防的抗独特型抗体疫苗奠定了基础。     

循环抗原检测进一步研究的初步设想

卫生部于1993年5月18日～24日在岳阳举行了血吸虫病循环抗原检测研讨会.8个单位参试了血吸虫循环抗原(CAg)检测方法,一些专家对当前CAg检测中的问题进行了分析。     

高亲和力抗Met人源基因工程抗体scFv的筛选与特性分析

目的：〖HT5"SS〗应用噬菌体展示技术制备抗HGF受体Met特异性、高亲和力的全人抗体scFv片段。〖HT5W〗方法: 〖HT5"SS〗以从天然抗体库中筛选出的Fab基因可变区VH和VL为模板,分别在CDR区引入有限突变和随机突变,扩增出scFv基因库,克隆于pComb3XSS中,构建scFv次级突变抗体库,筛选高亲和力克隆。〖HT5W〗结果: 〖HT5"SS〗经5轮细胞筛选和2轮抗原固相筛选,选取60个克隆进行ELISA检测,选择较高亲和力的噬菌体抗体,克隆于原核表达载体pBADgIII/A中,经诱导表达、SDSPAGE和Western blotting分析,在相对分子质量30 000处出现预期大小的蛋白条带。单链抗体经表达、变性与复性和IMAC亲和纯化后,用于流式细胞术、免疫沉淀分析,结果表明,scFv能够与S114细胞表达Met的胞外区特异性结合,其亲和常数Kd 值为4.76×10-8mol/L,与突变前抗体的亲和力（ Kd值为5.24×10-6mol/L）相比,抗体的亲和力提高约100倍。竞争ELISA结果显示,亲和力成熟后抗体的抗原结合表位未变。〖HT5W〗结论:〖HT5"SS〗 经过CDR突变和抗体库筛选,有效提高了抗体的亲和力,该抗体有望成为临床肿瘤诊断或治疗的候选分子。     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30引起小鼠足垫反应的实验研究

目的：探讨日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０引起小鼠足垫反应的实验条件。方法３对个因素２个小平（尾蚴感染数１０条／鼠和５０条／鼠,ＮＰ３０注射剂量１μｇ／鼠和１０μｇ／鼠,感染后４周和７周）应用正交设计进行小鼠足垫试验,于ＮＰ３０注射后不同时间观察足垫肿胀情况。结果正交设计结果的方差分析表明,ＮＰ３０在注射后１２ｈ的结果有显著性差异。结果ＮＰ３０引起的足垫肿胀为迟发型变态反应。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原的电泳分析

本文报道日本血吸虫 SEA电泳分析的初步资料,PAGE的区带模式以及鉴定血清学抗原的方法。日本血吸虫 SEA的 PAGE谱十分复杂,有 12条氨基黑染色带,5条 PAS染色带,二者都能染色的有二条。日本血吸虫SEA有三种主要血清学抗原,其中二种是糖蛋白,一种是不含糖的蛋白质。以上结果表明,日本血吸虫 SEA的电泳分析结果与曼氏血吸虫 SEA的十分相似。