重组IL-2、IL-6、TNF-α作为血吸虫病疫苗佐剂的研究

目的：观察重组IL－2、IL－6和TNF－α（rIL-2,rIL-6,rTNF-α）作为血吸虫病抗独特型抗体疫苗佐剂的可行性，并探讨其作用机制。方法：日本血吸虫抗独特型抗体NP30主动免疫BALB／c小鼠，分别联用rIL-2,rIL-6和rTNF-α，观察其对小鼠的保护性免疫作用，以及对宿主体液免疫和细胞免疫的影响。结果：rIL-2和rIL-6能明显提高NP30疫苗对小鼠宿主的保护性作用，减虫率和减卵率均明显提高，减虫率从单用NP30的40．6％分别提高到53．5％和55．7％，减卵率从46．5％分别提高到68．7％和69．8％；二者均使血清特异性IgG、IgG1和IgG2a抗体明显升高；另外，足垫试验结果显示NP30加用rIL-2可引发迟发型变态反应。rTNF-α无增强NP30的保护性免疫作用。结论：rIL-2和rIL-6可作为血吸虫病抗独特型抗体疫苗的佐剂，其作用机制与同时增强Th1和Th2免疫应答有关。     

抗独特型抗体在寄生虫病领域的研究进展及应用

独特型及抗独特型抗体源自免疫网络学说,抗独特型抗体具有模拟抗原及免疫调节的作用.基于这一理论基础,抗独特型抗体已被J一泛应用于疾病的免疫诊断、疫苗及免疫治疗等方面的研究中.该义就抗独特型抗体的制备、鉴定方法以及其在寄生虫病领域中的研究进展进行综述.     

日本血吸虫单克隆抗独特型抗体NP30诱导抗卵免疫的研究

目的观察日本血吸虫单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０对日本血吸虫雌虫生殖产卵及卵胚发育的影响。方法腹腔注射ＮＰ３０主动免疫Ｃ５７ＢＬ／６小鼠,连续３次,对照组腹腔注射ＳＰ２／０腹水。结果尾蚴攻击感染后第２７天,ＮＰ３０免疫组肝组织内虫卵数下降了３０．９１％,雌虫子宫内虫卵数减少了３８．５５％。尾蚴攻击感染后第３９天,ＮＰ３０免疫组肝组织内的成熟虫卵下降了６６．６３％,死亡虫卵增加了６０．６６％。结论ＮＰ３０主动免疫小鼠具有抗雌虫生殖产卵和抗卵胚发育的双重功效,为一很有希望的血吸虫病抗病疫苗候选分子     

单克隆抗独特型抗体NP30用于日本血吸虫病血清学诊断的研究

本研究用单克隆抗独特型抗体NP30与日本血吸虫肠相关抗原(GAA)和可溶性虫卵抗原(SEA)检测了702份不同病期及正常人群中的血清抗体,结果显示,在急性感染时,NP30抗体的检出率为98％,与GAA(94％)和SEA(98％)的无差别。在慢性感染时NP30抗体的检出率为87％,与GAA(86％)的无差别,但低于SEA(98％)的。在正常人群中,上述3种的抗体假阳性率均为3％左右,无差别。NP30的抗体滴度几何均数在急性血吸虫感染时高于GAA的,低于SEA的,在慢性感染时低于后两者,提示NP30的抗体在血吸虫感染期间出现比较早,消退较快。上述结果提示,NP30可以替代虫源性抗原,用于日本血吸虫病诊断。     

用抗日本血吸虫虫卵单克隆抗体NP28-5B检测循环抗原的研究

本研究使用杂交瘤技术制备鼠抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原(SEA)单克隆抗体NP28-5B,其同型鉴定为IgGl,针对的靶抗原分子量为140kD。将酶标记单抗NP28-5B进行Dot-ELISA直接法检测急性患者血清100份和慢性血吸虫病患者血清200份中循环抗原,阳性率分别为96％和98％,检测正常人血清200份,仅3例假阳性(1.5％)。用双盲法检测血吸虫病流行区江西矶山岛居民血清339份,其中粪检阳性血清114份,阳性率为89.47％,粪检阴性血清225份,阳性率为69.33％,研究证明NP28-5B具有高度诊断潜能。     

抗rSjCTPI单克隆抗体检测血吸虫循环抗原疗效考核价值研究

目的 进一步探讨抗重组血吸虫磷酸丙糖异构酶（rSjCTPI）的单克隆抗体检测血吸虫循环抗原对血吸虫病疗效考核的价值。方法 建立以纯化的抗日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）的多克隆抗体（IgG）为捕捉系统,以酶标抗rSjCTPI为检测系统的酶联免疫吸附试验（P-M-ELISA）法,分别对同批治疗前及治疗后2、4、6、12个月的血吸虫病人进行检测,并与常规检测抗体的SEA-ELISA法比较。结果 P-M-ELISA法对治疗前血吸虫病人检测阳性率为96.6%,而检测抗体的SEA-ELISA为98.3%,P-M-ELISA法对治愈后2、4、6、12个月血清循环抗原检测阴转率分别为15.3%、37.3%、52.0%、83.3%,而检测抗体的SEA-ELISA法分别为3.4%、6.8%、12.0%、16.7%。结论 表明该法既有较好的诊断价值,又有较好的疗效考核价值。     

用噬菌体肽库筛选SjC-TPI的模拟抗原表位

目的　筛选日本血吸虫中国大陆株磷酸丙糖异构酶 (SjC TPI)分子的模拟抗原表位 ,研究其免疫学特性。方法　用纯化的抗重组SjC TPI抗体 (IgG)筛选 12肽库 ,获取SjC TPI的模拟抗原表位 ,并研究其抗原特性。结果　获得SjC TPI分子的两个模拟抗原表位M1和M2 ,Westernblotting分析结果表明由这两个模拟抗原表位免疫小鼠产生的免疫血清能识别SjC TPI分子和含此两抗原表位的噬菌体外壳蛋白。DNA测序结果显示这两个模拟抗原表位的氨基酸序列与SjC TPI无同源性。结论　本研究获得的模拟抗原表位M1及M2为SjC TPI的空间构型抗原的模拟表位 ,具有较好的抗原性     

全人源抗MAGE-A1单链抗体的筛选及免疫活性鉴定

目的:从全人源单链噬菌体抗体库中筛选出抗MAGE鄄A1特异性单链抗体并进行免疫活性鉴定。方法:以纯化MAGE鄄A1为抗原,经过五轮吸附—洗脱—扩增,从单链噬菌体抗体库中筛选出特异性抗MAGE鄄A1噬菌体抗体,ELISA、DotBlotting检测其抗原结合能力,并对特异性较强的克隆提取质粒,表达可溶性抗体。WesternBlotting、DotBlotting、免疫细胞化学检测其抗原结合活性,非竞争ELISA法检测其亲和常数。结果:从单链噬菌体抗体库中筛选出噬菌体抗体并进行富集,经鉴定为抗MAGE鄄A1的特异性噬菌体抗体。抗MAGE鄄A1可溶性抗体分子量约为30kD,与MAGE鄄A1特异性结合,其亲和常数约为1.432×106L/mol。结论:所得全人源抗MAGE鄄A1单链抗体保留完整抗体分子结合抗原的特异性,免疫原性弱,是肿瘤导向治疗的理想载体。     

肝细胞癌MAGE-A9基因的克隆、表达及特性鉴定

目的：扩增和克隆人黑色素瘤抗原MAGE—A9(melanoma antigen A9)cDNA，构建原核表达载体，制备抗MAGE—A9单抗．观察其在肝细胞癌中的表达。方法：从人肝癌组织提取总RNA，用RT—PCR从中扩增出MAGE—A9 cDNA，插入载体pMD18-T中．测序正确后，构建重组表达载体pBAD/gⅢ-MAGE—A9,转化大肠杆菌TOP10株进行表达。重组蛋白经L-Arabinose诱导表达纯化后．制备抗MAGE—A9单抗．免疫组化检测MAGE—A9在肝细胞癌中的表达和定位。结果：获得MAGE-A9cDNA，测序结果与GenBank一致。成功构建表达载体，表达可溶重组蛋白，SDS—PAGE分析其相对分子质量为35kD。获得抗MAGE—A9单抗，MAGE-A9在肝细胞癌中的阳性表达率为21％(8／39)，主要表达于胞浆，未见肿瘤异质性，统计学分析MAGE—A9的表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性。结论：有相当部分肝癌患者的肿瘤表达MAGE—A9抗原，且其表达与患者年龄、性别、肿瘤大小和分化程度没有相关性．MAGE-A9可能成为肝癌特异性免疫治疗的靶点。     

感染日本血吸虫的BALB/C小鼠血清内抗14OKD抗原分子抗体的动态观察

本研究采用针对日本血吸虫(中国大陆株)虫卵140KD分子的单克隆抗体NP28-5B,建立的竞争ELISA,定期检测感染日本血吸虫(中国大陆株)的BALB/C小鼠体内存在针对140KD SEA抗原的特异性抗体应答及其动态。