短发夹状干扰RNA沉默信号传导和转录激活子3基因表达对大肠癌细胞的影响

目的构建携带信号传导和转录激活子3（STAT3）基因短发夹状干扰RNA（shRNA）的真核表达载体,观察干扰STAT3表达对大肠癌细胞HT-29细胞增殖的影响。方法从GenBank STAT3mRNA上寻找到3条符合特征的靶序列,合成靶序列的DNA寡核苷酸链,合成双链DNA,并和BamHⅠ和HindⅢ酶切后的pRNAT-U6.1/Neo载体质粒连接产生重组质粒,行PCR和测序鉴定。重组质粒瞬时转染大肠癌HT-29细胞,实时定量PCR、Western blot检测STAT3的表达。筛选出最佳重组质粒,转染大肠癌细胞后,MTT检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化。结果成功构建了携带有STAT3基因的shRNA的重组质粒,PCR和测序证实重组质粒构建正确。3种重组质粒对大肠癌HT-29细胞STAT3的表达有明显的抑制作用。筛选出的最佳重组质粒转染大肠癌细胞后,细胞增殖能力明显减弱;细胞周期分析显示,G0/G1期细胞占（74.80±1.85）%,S期细胞占（15.72±2.26）%,与对照组差异显著（P〈0.01）。结论干扰STAT3基因的表达可以有效抑制大肠癌HT-29细胞的生长。     

2例pT1aN3b胃癌患者的临床病理特征分析

本文总结了2例pT1aN3b胃癌患者的临床病理特征, 均含印戒细胞癌成分, 分别检出62枚与41枚淋巴结, 阳性淋巴结均集中于胃小弯侧。最长随访近9年, 患者均健康存活, 无复发迹象。     

胃癌根治术中食管切缘跳跃转移30例临床特征分析

目的总结分析胃癌根治术中食管切缘跳跃转移病例的临床特征。方法采用描述性病例系列研究的方法, 收集2006—2022年期间南京大学医学院附属鼓楼医院和东部战区总医院两家大型胃癌诊治中心的病例资料, 总结分析患者的肿瘤特征和手术情况以及肿瘤的免疫组织化学检测特点及病理分期, 并进一步分析食管侧吻合圈残留癌的细胞及组织层面分布特点。食管切缘跳跃转移定义为食管切缘阴性、但食管侧吻合圈阳性。结果双中心共有30例(0.33%, 30/8 972)胃癌患者根治术中发现食管切缘跳跃转移, 其中男性24例(80.0%), 年龄(63.9±11.0)岁。乳头状或管状腺癌17例(56.7%), 其中低分化13例(43.3%), 中分化4例(13.3%);印戒细胞癌4例(13.3%);黏液腺癌4例(13.3%);混合性腺癌3例(10.0%), 其中2例为低分化管状腺癌混杂印戒细胞癌及黏液腺癌, 1例为低分化管状腺癌混杂印戒细胞癌;特殊类型癌2例(6.7%), 其中1例为腺鳞癌, 1例为未分化癌。肿瘤位于胃小弯侧26例(86.7%), 位于贲门24例(80.0%)。肿瘤长径中位数6.6 cm, 距食管切缘中位数...     

基于虚拟现实技术的外科教学系统在外科手术器械教学中的应用

目的对基于虚拟现实技术的外科教学系统在外科手术器械教学中的应用效果进行评估。方法将81名临床医学专业五年级(2015级)医学生随机分为试验组(n=40)和对照组(n=41)。试验组采用基于虚拟现实技术的外科教学系统进行学习,对照组采用传统课堂教学方式进行学习。教学完成后两组接受相同形式的现场理论考核和教学满意度问卷调查。结果现场理论考核两组得分差异无统计学意义(P=0.179),但试验组在器械使用方法题的得分显著高于对照组,差异具有统计学意义(P=0.0047)。问卷调查显示,两组兴趣度差异无统计学意义(P=0.146),而试验组专注度高于对照组,差异具有统计学意义(P=0.026)。结论在外科手术器械教学中,基于虚拟现实技术的外科教学系统可以提高学生的学习兴趣和专注度,加深其对器械使用方法的理解,从而提高教学质量。     

慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达治疗结直肠癌的体内外研究

目的 探讨慢病毒介导shRNA沉默STAT3表达对结直肠癌生长的影响.方法 分别用慢病毒干扰质粒pRNAT-shSTAT3、慢病毒空质粒pRNAT-GFP和慢病毒包装质粒混合物共转染293T细胞,获得慢病毒分别感染结直肠癌HT-29细胞,筛选培养后获得HT-29-shSTAT3、HT-29-GFP细胞株.将3种细胞株用于建立裸鼠皮下移植瘤模型,分为3组:第1组为HT-29组,第2组为HT-29-GFP组,第3组为HT-29-shSTAT3组,每组5只.MTT法检测细胞生长情况,流式细胞仪检测细胞周期变化,取瘤组织切片行CD34免疫组织化学观察肿瘤微血管密度(MVD)的变化.应用单因素方差分析检测结果.结果 结直肠癌HT-29、HT-29-GFP细胞株生长能力明显强于HT-29-shSTAT3细胞株,3者比较,差异有统计学意义(F=632.50,P<0.05).HT-29-shSTAT3细胞株生长明显减慢,G0/G1期细胞占68.7%±2.9%,HT-29-GFP细胞株为38.5%±1.6%,HT-29细胞株为38.7%±2.3%;3者比较,差异有统计学意义(F=166.53,P<0.05).HT-29组、HT-29-GFP组和HT-29-sh STAT3组MVD分别为29±5、28±4、10±3,3组比较,差异有统计学意义(F=31.60,P<0.05).结论 慢病毒介导的shRNA沉默STAT3表达能明显抑制结直肠癌的生长.     

微粒子酶免法检测全血普乐可复浓度及其临床应用

目的　评价微粒子酶免 (MEIA)法检测全血普乐可复浓度的准确性及其在器官移植术后抗排异治疗中的应用。方法　以MEIA法检测 6例心脏移植、2例肝脏移植、2例小肠移植和 7例肾脏移植患者不同时期全血中普乐可复的谷浓度 ,并结合临床情况调整普乐可复的用药剂量。以MEIA法测定高、中、低 3种标准普乐可复全血样品 ,求算MEIA方法学的回收率 ,分析MEIA的准确性及其对临床普乐可复用药的指导作用。结果　在临床 6 83个血样的 472次检测中 ,质控血样检测结果均在控制范围内 ,质控的平均RSD为 (7.7± 2 .0 ) % ,方法回收率为 (96 .4± 7.4) % ,分析过程可在 1h内完成。结论　MEIA法具有快速、简便、专一性强和灵敏度高的特点 ,是一种较理想的普乐可复血药浓度常规检测方法 ,适宜在医院内开展     

大鼠胰肠重建式单纯胰腺移植动物模型的构建

目的:研究建立胰肠重建式大鼠单纯胰腺移植(pancreas transplantation alone, PTA)的方法. 方法:SD大鼠分为:对照组(NDC组,n=10)和PTA组(n=22);糖尿病大鼠采用脲链霉素诱导,PTA组血管吻合采用供胰腺腹主动脉绊(含腹腔动脉及脾动脉)及门静脉绊(含脾静脉)与受体腹主动脉及左肾静脉分别行端侧和端端吻合(袖套式);胰腺断端与小肠行Roux-y式吻合. 并于术前和术后1, 3, 7, 14和30 d监测受体质量、饮水量、进食量、尿量和空腹血糖. 结果:PTA组平均手术时间:供体为(32.2±12.7) min,受体为(63.4±15.9) min,移植物均无热缺血时间,冷缺血时间为(48.6±18.3) min. PTA组除11例(50%)于1 mo内死亡或胰腺失去功能外,均成活1 mo以上;并发症主要为胰漏及继发性胰腺炎(7例,31.8%);成功的胰腺移植后1 d血糖即下降,3 d达到正常;饮水量、进食量、尿量均减少,14 d后基本稳定. 结论:成功的PTA可有效恢复糖尿病大鼠内分泌功能.     

缺血预处理减轻胰腺移植受体大鼠小肠肠黏膜屏障的损害

背景:胰腺移植过程中的缺血再灌注损伤可以引起术后众多的并发症,其中继发性胰腺炎可以导致受体小肠黏膜的损伤,造成严重的后果。目的:观察缺血预处理对大鼠胰腺移植受体肠黏膜屏障的保护作用。设计:随机对照动物实验。单位:解放军第四军医大学西京医院胃肠外科。材料:实验于2001-09/2004-04在解放军第四军医大学西京医院胃肠外科实验室完成。动物为SD雄性大鼠83只。方法:①取47只大鼠,自阴茎静脉注射脲链霉素65mg/kg制备糖尿病大鼠模型。将造模成功的36只大鼠随机分为缺血再灌注组,供体缺血预处理组(DIPC组),受体双后肢缺血预处理组(RIPC组)3组,每组12只。剩余36只正常大鼠中随机取12只为对照组,另外24只为供体。②对照组仅行开腹术,其他3组行胰腺移植。DIPC组于获取供胰前阻断供体脾血管5min再灌注5min2次;RIPC组于供胰再灌注前阻断受体双后肢血流5min再灌注5min,重复3次;缺血再灌注组不作处理。主要观察指标:①手术后5d各组随机取6只大鼠检测小肠通透性(以血浆中FITC-dextran浓度表示)和吸收功能(以血浆中木糖浓度表示)。②各组其余6只大鼠于术后5d取血检测血清肿瘤坏死因子α、NO、超氧化物歧化酶和淀粉酶活性,取回肠黏膜组织检测小肠黏膜黏膜湿重、微绒毛高度及宽度、丙二醛含量及髓过氧化物酶活性,同时取肠系膜淋巴结、肝及脾组织进行细菌培养,观察细菌易位情况。结果:经补充后72只大鼠进入结果分析。①血浆中FITC-dextran浓度:缺血再灌注组高于对照组、DIPC组和RIPC组(P<0.01)。②血浆中木糖浓度:缺血再灌注组低于对照组、DIPC组和RIPC组(P<0.01)。③细菌易位率:缺血再灌注组高于对照组、DIPC组和RIPC组(P<0.01)。④小肠黏膜损伤程度:缺血再灌注组低于其他3组(P<0.01)。⑤缺血再灌注组小肠髓过氧化物酶活性和丙二醛含量显著高于其他3组(P<0.01),血清超氧化物歧化酶活性和NO水平低于其他3组,淀粉酶活性和肿瘤坏死因子α水平高于其他3组(P<0.01)。结论:供体和受体双后肢缺血预处理均可保护大鼠胰腺移植受体小肠肠黏膜屏障,降低细菌易位率     

VEGF、STAT3在大肠癌组织中的表达及其相关性研究

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）和信号转导子与转录活化子3（STAT3）表达在大肠癌中的变化，以及与大肠癌临床病理的关系，并研究两者的相关性。方法采用免疫组化方法检测大肠癌中VEGF、STAT3的表达情况。结果大肠癌中VEGF、STAT3蛋白表达阳性率分别为66．7％（22／33）和63．6％（21／33），显著高于正常大肠组织的阳性率（P〈0．01）；VEGF的表达与Duke’s分期及有无淋巴结转移有关（P〈0．05）；而STAT3的表达与肿瘤的分化程度、Duke’s分期有关及有无淋巴结转移有关（P〈0．05）。相关分析表明VEGF和STAT3正相关（P〈0．05）。结论大肠癌组织中存在VEGF和STAT3的高表达，VEGF的表达与大肠癌病程的发展及淋巴转移关系相关，而STAT3的表达除与大肠癌病程的发展及淋巴转移相关外，还与大肠癌组织的分化程度有关。另外，大肠癌的发生过程中VEGF可能受STAT3的调控，STAT3可能会成为大肠癌的抗血管生成新的治疗靶点。     

胰高血糖素负荷试验在肝储备功能检测中的作用

充分了解肝病患者潜在的肝脏功能.对肝脏外科具有十分重要的意义.胰高血糖素负荷试验后,通过检测血液内c-AMP的应答反应能定量反映肝脏储备功能,并且方法简单、创伤小、副作用少,研究结果表明它比常规肝功能试验灵敏、准确、特异性高.