组胺对大鼠正常肝细胞及缺氧/复氧时肝细胞活力的影响

目的:评价组胺对大鼠正常肝细胞及缺氧/复氧时肝细胞活力的影响。方法:大鼠肝细胞株,调整细胞密度为1×107cells/L,接种于培养孔中,每孔200μL作为研究对象,本研究包括2个实验,各实验中研究对象随机分为7组。实验1:空白组和2×104μg/L组各12孔,其它各组各6孔,空白组不做任何处理,10μg/L组、102μg/L组、103μg/L组、104μg/L组、2×104μg/L组和5×104μg/L组分别加入相应浓度的组胺,孵育25h,各组取6孔,测定肝细胞活力,取空白组和2×104μg/L组的其它6孔,收集细胞培养上清液和细胞,分别用于测定谷丙转氨酶(ALT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性,电镜观察细胞超微结构。实验2:分组方法同实验1,空白组和2×104μg/L组各12孔,其它各组各6孔,空白组不做任何处理,加入相应浓度的组胺后立即进行缺氧1h、复氧24h,各组取6孔,测定肝细胞活力,取空白组和2×104μg/L的其它6孔,收集细胞培养上清液和细胞,分别用于测定ALT和SOD的活性,电镜观察细胞超微结构。结果:实验1:与空白组比较,103μg/L组-5×104μg/L组肝细胞活力增加,且呈浓度依赖性,2×104μg/L组SOD活性升高(P0.05),ALT活性差异无显著(P0.05);电镜下空白组和2×104μg/L组肝细胞未见损伤。实验2:与空白组比较,102μg/L组-5×104μg/L组肝细胞活力降低,其中2×104μg/L组和5×104μg/L组肝细胞活力降低更明显,2×104μg/L组ALT活性升高,SOD活性降低(P0.05),2×104μg/L肝细胞损伤重于空白组。结论:组胺可增加大鼠正常肝细胞活力,且呈浓度依赖性,2×104μg/L组胺可提高其抗氧化能力;组胺可降低缺氧/复氧时大鼠肝细胞活力,且与浓度有关,2×104μg/L组胺可降低其抗氧化能力。     

中国人Wilson病ATP7B基因Thr935Met突变与临床表型的关系研究

目的　探讨Wilson病 (Wilsondisease,WD)ATP7B基因突变的高频位点之一Thr 935Met与临床表现的关系。方法　应用PCR技术扩增 90例WD患者和 30例正常人ATP7B基因第 12外显子 ,其PCR产物行限制性内切酶TaiI酶切分析。结果　正常人组酶切未见异常。 90例WD组第 12外显子有 10例Thr 935Met杂合突变 ,未见纯合突变 ,检出率为 11 1%。突变组的平均发病年龄为 19 10岁± 8 5 2岁 ,无突变组的平均发病年龄为 14 0 0岁± 7 4 2岁 ,差异有显著意义 (P =0 0 4 7)。结论　Thr 935Met突变组患者的发病年龄迟于未见该点突变组的患者 ,而性别、首发症状及铜生化水平与该点突变无明显相关性。     

肝移植围术期血液中单核细胞TLR4表达和血清细胞因子变化的关系

目的： 探讨肝移植围术期血液中单核细胞TLR4及血清细胞因子浓度的变化。方法：采集15例肝移植患者外周静脉血，用流式细胞仪检测单核细胞TLR4的表达；ELISA法检测血清TNF-α、IL-1β和IL-8，分析TLR4表达与细胞因子的关系。结果：单核细胞TLR4在新肝期3 h、新肝24 h显著上调表达(P<005)；新肝24 h细胞因子的浓度显著高于其它各时间点 (P<001)；新肝24 h时TNF-α、IL-1β和IL-8的浓度与单核细胞TLR4的表达呈正相关(P<005)；发生急性肺损伤患者TLR4表达强且血清细胞因子水平升高。     

胼胝体病变-肝豆状核变性的少见脑部影像学表现

目的研究肝豆状核变性患者胼胝体病变及其临床价值。方法收集3例肝豆状核变性患者的临床及影像资料,参照2001年第八届莱比锡肝豆状核变性国际会议制定的诊断评分系统评分。利用磁共振成像(MRI)技术检查胼胝体压部病变。结果 3例患者均存在胼胝体压部病变,但均无胼胝体病变所致的失连接综合征表现。头颅MRI技术提示3例患者胼胝体病变主要为长T2异常信号、FLAIR像稍高信号,其中1例DWI呈高信号。出现胼胝体病变的3例肝豆状核变性患者均病情较重、脑部损伤弥漫(尾状核、壳核、苍白球、丘脑、中脑及桥脑)。结论胼胝体病变为肝豆状核变性患者少见的影像学表现,若在有典型基底节病变的同时还伴有胼胝体病变则高度支持肝豆状核变性的诊断。胼胝体病变也提示患者病情较重、脑部损伤弥漫,预后相对较差。     

18F－FDG PET/CT肿瘤内代谢异质性参数预测肺腺癌EGFR基因突变的价值

目的探讨18F-FDG PET/CT传统代谢参数、CT征象及肿瘤内代谢异质性参数预测肺腺癌表皮生长因子受体(EGFR)基因突变的价值。方法回顾性纳入2016年1月至2020年6月间在济宁医学院附属医院经病理证实的147例肺腺癌患者[男73例、女74例, 年龄(59.8±10.2)岁], 分析EGFR基因突变组与野生组患者在临床资料(吸烟史、肿瘤位置及临床分期)、CT征象(最大径、有无磨玻璃成分、分叶征、毛刺征、空泡征、空气支气管征、胸膜凹陷征及支气管截断征)、18F-FDG PET/CT传统代谢参数[SUVmax、SUVmean、肿瘤代谢体积(MTV)及病灶糖酵解总量(TLG)]及肿瘤内代谢异质性参数[CV、异质性指数(HI)]间的差异。采用两独立样本t检验、Mann-WhitneyU检验或χ2检验分析数据;通过多因素logistic回归分析EGFR基因突变的预测因素;采用ROC曲线分析探讨不同参数对EGFR基因突变的预测效能。结果 147例患者中, EGFR基因突变型87例, EGFR野生型60例。2组患者在性别(男/女)、吸烟史(有/无)、原发灶位置(周围/中心)、胸膜凹陷征(有/...     

浅议鼻咽癌放疗后鼻窦炎的干预方法及临床效果

目的：探讨鼻咽癌放疗后鼻窦炎干预方法及临床疗效。方法选取本院于2008年1月~2013年12月收治的鼻咽癌患者50例,随机分为对照组和观察组,对照组患者在接受放疗时未采取临床干预,观察组在放疗初期行干预治疗,观察两组患者治疗3个月、6个月以及1年后的鼻窦炎发生率。结果对照组和观察组患者治疗3个月、6个月以及1年后的鼻窦炎发生率分别为32.0%、72.0%、28.0%和28.0%、52.0%、20.0%,观察组鼻窦炎发生率明显低于对照组,两组患者治疗3个月、6个月后的鼻窦炎发生率比较,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论鼻咽癌患者放疗初期便临床干预,可有效降低放疗后鼻窦炎发生率。     

肝豆汤改良方对Wilson's病模型TX乳鼠神经元内Cyt C/Caspase信号通路的分子调控机制

目的:探讨肝豆汤改良方调控TX乳鼠神经元内细胞色素C(Cyt C)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)信号通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:本实验乳鼠神经元通过原代方法分离培养所得,分为正常组、模型组、肝豆汤改良方组、丁苯酞组,正常组为正常DL乳鼠神经元,用完全培养基培养,模型组为TX乳鼠神经元,用10%空白兔血清培养,肝豆汤改良方组为TX乳鼠神经元,加入含体积浓度(5%,10%,15%,20%)肝豆汤改良方兔血清的培养基继续培养,丁苯酞组为TX乳鼠神经元,用10%含丁苯酞兔血清培养。采用原子吸收分光光度法检测不同浓度含肝豆汤改良方兔血清作用24 h后,对TX乳鼠神经元内微量元素的影响;流式细胞仪检测经肝豆汤改良方兔血清作用后活性氧(ROS)释放量的变化;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测经含肝豆汤改良方兔血清作用后Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白的表达。结果:与模型组比较,含肝豆汤改良方兔血清可显著降低TX乳鼠神经元内铜、铁含量,增加锌含量(P0.01)。流式细胞仪检测发现,含肝豆汤改良方兔血清较模型组可显著降低TX乳鼠神经元内ROS的释放量(P0.01)。Western blot检测结果显示与模型组比较,含肝豆汤改良方兔血清可显著降低TX乳鼠神经元内Cyt C,Caspase-9,Caspase-3蛋白表达(P0.01)。结论:肝豆汤改良方可能是通过促进过量铜排出而抑制神经元内Cyt C,Caspase-9,Caspase-3表达,从而减轻高铜对神经元的损伤作用。肝豆汤改良方可通过减少脑内铜含量,进而调控Cyt C/Caspase信号通路达到减轻高铜诱导的神经元损伤的治疗效果。     

微量元素钼的代谢与人体健康

微量元素钼（Mo）是1778年被发现的高熔点稀有金属,是人体必需微量元素之一;Mo在人体主要存在于骨骼,由消化道吸收,通过肾脏、胆汁、汗液以及头发排泄,主要以无机盐及与蛋白结合构成含钼酶的辅助因子两种方式参与物质的代谢过程;适量的Mo对人体各项生命活动具有重要意义,但Mo缺乏和Mo蓄积均会引起机体多系统功能障碍;Mo失衡可以通过饮食或支持性治疗进行防治。     

肝豆汤对Wilson病模型铜负荷大鼠肝脏Wnt/β-catenin信号通路的调控作用

目的：探讨肝豆汤对铜负荷大鼠肝脏中分泌型糖蛋白（Wnt）/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的调控作用及机制。方法：SD大鼠115只随机分为正常组（20只）、造模组。造模组予以1 g·kg^-1·d^-1的硫酸铜饲料及0.02 mL·g^-1·d^-1的0.185%硫酸铜溶液连续喂养12周;造模成功大鼠随机分为模型组（45只）,肝豆汤组（25只）和青霉胺（PCA）组（25只）;模型组、肝豆汤组和PCA组分别予以0.02 mL·g^-1·d^-1生理盐水,0.4 g·kg^-1·d^-1的中药肝豆汤和0.09 g·kg^-1·d^-1青霉胺灌胃,连续4周,末次灌胃后取各组大鼠肝脏组织检测：电感耦合等离子体原子发射光谱法（ICP-AES）检测各组大鼠肝铜含量;苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠肝脏组织病理改变,免疫组织化学法检测肝脏组织氧化应激相关蛋白的表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肝组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达水平。结果：ICP-AES法结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝脏铜含量显著升高（P<0.01）;肝豆汤可降低铜负荷大鼠肝脏铜含量（P<0.05）,PCA可显著降低模型组大鼠肝脏铜含量（P<0.01）;HE染色结果显示,与正常组比较,模型组大鼠肝脏组织镜下可见肝细胞大小不一、排列紊乱,部分肝索丧失;肝豆汤组和PCA组细胞损伤程度较模型组明显降低;免疫组化结果显示：肝豆汤和PCA可显著降低模型组8-羟基脱氧鸟苷（8-Hydroxyguanosine）,硝基酪氨酸（Nitrotyrosine）蛋白表达量（P<0.01）;Western blot结果显示,肝豆汤和PCA可使铜负荷大鼠肝脏内Wnt通路相关蛋白β-连环蛋白（β-catenin）,磷酸化糖原合成激酶3β（glycogen synthase kinase-3,p-GSK3β）,原癌基因（cellular myelocytomatosis oncogene,c-Myc）蛋白表达量显著增加（P<0.01）。结论：肝豆汤可通过促进过量铜排出减轻高铜诱导的肝脏损伤,并通过激活肝脏Wnt/β-catenin信号通路促进损伤的肝组织代偿性自愈以达到减轻高铜诱导氧化应激损伤的治疗效果。     

肝豆汤对Wilson病模型TX小鼠肝细胞内铜代谢通路的分子调控机制

目的:探讨肝豆汤调控毒牛奶(TX)小鼠肝细胞内铜转运通路的分子靶点并观察其相应的调控机制。方法:20只家兔适应性喂养3 d后,随机分为空白组(生理盐水)和肝豆汤组(4.5 g·kg-1·d~(-1)),每日2次ig,连续10 d,制得含药血清;采用2步灌注法分离提取DL,TX小鼠肝细胞,采用原子吸收法检测加含不同百分含量(5%,10%,15%,20%)含肝豆汤兔血清作用24 h后,对TX小鼠肝细胞内微量元素的影响,另设空白组;蛋白质免疫印迹(Western blot)法检测经含肝豆汤兔血清作用后腺嘌呤核苷三磷酸7b(adenosine triphosphate7b,ATP7b),抗氧化蛋白1(anti-oxidant1,ATOX1),铜转运体1(copper transporter1,CTR1),金属巯蛋白(metallothionein,MT),超氧化剂物歧化酶铜伴侣蛋白(copper chaperone of superoxide dismutase,CCS),细胞色素氧化酶17(cytochrome-coxidase17,COX17)蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组TX小鼠肝细胞内铜含量升高,锌含量降低,铁含量升高,ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达明显降低,CTR1,MT蛋白表达显著升高(P0.01);与模型组比较,含肝豆汤兔血清可显著降低TX小鼠肝细胞内铜含量,增加锌含量,降低铁含量(P0.05,P0.01);Western blot检测结果显示,含肝豆汤兔血清可明显增加ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达(P0.05,P0.01),降低CTR1,MT蛋白表达(P0.01)。结论:肝豆汤可能是通过调控细胞内铜代谢相关蛋白,上调ATP7b,ATOX1,CCS,COX17蛋白表达,抑制CTR1,MT表达,从而发挥细胞内排铜作用。肝豆汤可通过多靶点、多途径调控铜代谢通路达到降低肝细胞内铜含量的治疗效果。