选择性脊神经后根切断术治疗痉挛性脑性瘫痪研究进展

选择性脊神经后根切断术 (ＳｅｌｅｃｔｉｖｅＰｏｓｔｅｒｉｏｒＲｈｉｚｏｔｏｍｙ ,简称ＳＰＲ)是目前治疗痉挛性脑性瘫痪的有效手术治疗方法。脑瘫是一种由多种病因引起 ,尚不能控制其发生的严重致残性疾病。它带来的不仅仅是家庭问题 ,还有社会问题 ,故一直为世界各国所重视。脑瘫发生于出生前、出生时和出生后短期内的非进行性脑损害〔1〕,其基本病理改变为非可逆性 ,目前尚不能进行病因学治疗。当损伤脑皮质及脑部下行性传导通路后 ,对γ运动神经元的抑制作用减弱 ,造成γ运动纤维兴奋性增强引起肌梭的敏感性增加 ,产生异常放电 ,通…     

提高胚胎大鼠神经干细胞数量的实验方法

目的：通过培养了解神经干细胞的生物学特性，着重从胎龄选择、优化分离和换液方法上提高神经干细胞的增殖能力和生长数量。方法：实验于2004-04／2005-09在锦州医学院中心实验室完成。①雌性SD大鼠35只，每日做阴道细胞涂片，排卵期雌雄合笼，以出现精栓计为受孕第0．5天。分别于孕10．5，11．5，12．5，13．5，14．5，16．5，18．5d取出大鼠胚胎体，每时间点各5只。②通过采用机械分离和酶消化分离相结合的方法分离培养不同胎龄大鼠脑神经干细胞。③换液首次采用分瓶法以后采用低速离心半量换液。④采用免疫细胞化学技术分别检测神经干细胞特征性标志巢蛋白表达和用血清诱导分化为大量神经元微管组合蛋白2和神经胶质纤维酸性蛋白表达。结果：①胎龄为12．5d的胎鼠提取的神经干细胞集落最多，其次为13．5d。②在上述条件下培养及传代的细胞不断分裂增殖，形成悬浮生长的呈巢蛋白阳性的神经球。③用血清诱导分化为大量表达微管组合蛋白2阳性的神经元和胶质纤维酸性蛋白阳性的神经胶质细胞。结论：考虑到生长因子在孕13-15d能够很好地发挥作用，故选择胎龄为13．5d胎鼠作为实验材料较为合适。通过采用机械分离和消化分离相结合的方法分离和原液首次采用分瓶法显著提高了神经干细胞的培养数量，培养出的细胞具有自我更新能力和增殖能力，可分化为神经元、神经胶质细胞及少突胶质细胞。     

锌对人脐带血间充质干细胞DNA和蛋白质含量及增殖周期的影响

背景:锌通过直接和间接作用对DNA聚合酶和RNA聚合酶产生影响,在细胞的DNA复制、RNA转录、增殖、分化等活动中起重要作用.有研究表明适宜浓度的锌具有促进神经元和成骨细胞增殖的作用.目的:拟通过流式细胞技术观察锌对脐血间充质干细胞细胞周期、DNA和蛋白质含量的影响,旨在探讨适宜浓度锌对脐血间充质干细胞的干预作用.方法:密度梯度离心法分离培养人脐带血间充质干细胞,取传3代细胞,对照组向细胞中加入含胎牛血清的DMEM/F12培养液,锌处理组向上述培养液中加入硫酸锌,使锌终浓度分别达到0.5,1.5,2.5,3.5,4.5,5.5 mg/L,培养21 d.观察细胞表面抗原的表达,MTT法检测细胞活性,流式细胞仪测定细胞DNA含量、蛋白质含量和增殖周期.结果与结论:脐带血间充质干细胞表面抗原CD29和CD44呈阳性表达.锌对脐带血间充质干细胞活性的促进作用呈量效关系,0.5~4.5 mg/L锌处理组细胞活性显著高于对照组(P < 0.01),尤以质量浓度为2.5 mg/L时最为明显.培养7,14,21 d与对照组相比,2.5 mg/L锌处理组脐带血间充质干细胞DNA含量、蛋白质含量均显著升高(P < 0.01);细胞增殖指数、S期和G2+M期细胞百分率均明显升高,G0/G1期细胞百分率则显著下降(P < 0.01).提示0.5~4.5 mg/L锌能促进脐带血间充质干细胞的增殖、DNA复制和蛋白质合成,且2.5 mg/L为最佳质量浓度.     

脂肪间充质干细胞的分离培养和鉴定

背景:近年来的研究发现,在脂肪组织中也存在这与骨髓间充质干细胞类似的间充质干细胞.脂肪组织可以从美容吸脂中获得,来源丰富,取材方便,蕴藏着巨大的临床应用价值.目的:分离培养人脂肪间充质干细胞并检测其生物学特性.方法:用离心的方法获得人脂肪间充质干细胞,接种于含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养基中行贴壁培养.并进行细胞形态学观察,绘制细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞表面抗原.结果与结论:采用消化、离心分离获得的脂肪间充质干细胞大小较为均匀,呈梭形或星形的成纤维细胞样.细胞生长曲线测定表明接后第5天细胞进入指数增生期,至第9天后数量减少;流式细胞仪检测表明超过90%细胞为CD29、CD45和CD105阳性.提示体外分离培养脂肪间充质干细胞生长稳定,可作为组织工程的种子细胞.     

体外分离培养人脐静脉内皮及内皮下间充质干细胞

目的:建立人脐静脉内皮及内皮下间充质干细胞体外培养和扩增的方法,探讨其生物学特性,建立间充质干细胞体外培养扩增体系。方法:实验于2006-04/2006-09在辽宁医学院解剖学实验室完成。解剖细胞培养室为无菌百级培养间。正常健康产妇顺产或剖宫产的新生儿脐带由辽宁医学院附属第一医院提供,产妇及其家属均知情同意,并经医院伦理委员会批准。实验方法:①体外分离和培养贴壁细胞:无菌条件下取正常健康产妇分娩或剖宫产脐带,将其用预热PBS充分洗涤去血渍后,从脐静脉一端插入留置针,用预热PBS冲净静脉腔血后,用止血钳夹闭另一端,注入经预热至37℃的Ⅰ型胶原酶,置于37℃水浴箱中消化,30min后放出胶原酶,并用PBS冲洗血管腔,收集消化液和冲洗液,400r/min离心10min,吸弃上清液,重悬于M199培养基(含体积分数为0.15的胎牛血清,2mmol/L谷氨z酰胺,2μg/L碱性成纤维细胞生长因子,100U/mL青霉素,100U/mL链霉素)。以5×108L-1密度接种于6孔培养板中,置于37℃、体积分数为0.05的CO2饱和湿度培养箱中培养,48h后全量换液,以后每3d全量换液。待细胞80%融合时,0.25%胰酶消化,按1×108L-1传代培养。②间充质干细胞生长曲线的测定:取传代培养细胞,按2×107L-1密度接种于24孔培养板内,每天取3孔,将细胞消化计数,连测8d,绘制间充质干细胞生长曲线。③间充质干细胞表面抗原检测:在24孔塑料培养板内放置无菌的盖玻片,每孔中种植108L-1第2代细胞悬液1mL。采用免疫细胞化学方法进行细胞表面抗原检测。结果:①间充质干细胞的形态学观察:接种的细胞48h后细胞完全贴壁生长,其镜下形态有呈椭圆形、多角形的内皮细胞以及呈梭形的成纤维样细胞,有的形成漩涡状生长的集落。②间充质干细胞生长曲线的分析:传代培养的潜伏期约为24～36h,细胞倍增时间约为30～36h,对数增殖期约为二三天,对数增殖期后第5天进入平台期。③间充质干细胞表面抗原特性:免疫细胞化学分析结果显示,间充质干细胞表面抗原cd166、cd44阳性,而vWF阴性,说明分离获得的细胞具有间充质干细胞的特点。结论:所建立的分离和培养方法可获取人脐静脉黏附细胞中一组独特的细胞群,具有间充质干细胞的生物学特性。     

骨形成蛋白(BMP)复合材料的实验研究

作者利用异种、同种、半脱钙骨基质明胶和羟基磷灰石四种材料植入20只大鼠肌肉内,通过光学显微镜观察比较了各种材料的吸收速度、抗原性和成骨情况。结果表明,异种骨基质明胶在植骨早期有轻度的排斥反应。羟基磷灰石不易被吸收,无诱导成骨作用。同种骨基质明胶适合作为较小骨缺损的骨形成蛋白复合材料,修复较大骨缺损,半脱钙骨基质明胶是较佳的复合材料。     

国人颅骨颌型的研究

本文测量了180例干燥颅骨的总面角、鼻面角和齿槽面角三项角度项目;分析了颅骨在性别和年龄上的颌型差异;探讨了颅骨发育中的某些变化趋势。本文的部分数据同其它文献作了比较     

视黄酸通过降低心转录因子Tbx20的表达抑制早期心的形成

目的:研究过量视黄酸抑制爪蟾早期心形成的机制.方法:用过量视黄酸培养发育到第14期的胚胎.4h后,胚胎用MEMPHA固定进行转录因子Tbx20的胚胎整体原位杂交.取发育第14期胚胎形成心的组织,并分别加入视黄酸和骨形成蛋白进行培养.4h时后,用MEMPHA固定并进行Tbx20的胚胎整体原位杂交.结果:视黄酸降低Tbx2...     

全硫代反义寡核苷酸对肺癌细胞生长及端粒酶活性的影响

目的将互补于hTR模板区的全硫代修饰型反义寡核苷酸(PS-ASODN)作用于肺癌细胞NCI-H292,探讨其对肺癌的治疗价值。方法PS-ASODN经lipotap脂质体转染作用于NCI-H292细胞,采用MTT法、ELISA法和流式细胞术检测NCI-H292细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变。结果①MTT法检测,1.0μmol/LPS-ASODN处理后24h细胞生长抑制率为12.86%,且随着时间的延长,抑制作用逐渐增强。②ELISA法检测结果,0.5～1.5μmol/L的PS-ASODN对NCI-H292细胞作用72h后端粒酶皆为阴性,对照组阳性。③流式细胞仪检测结果:端粒酶PS-ASODN转染NCI-H292细胞培养72h后,检测到细胞早期凋亡率增加,凋亡率为15.3%,与对照组相比有极显著意义(P<0.01)。PI染色结果细胞被阻止在G1/G0期,S期比率有所降低,降为14.5%。结论①端粒酶PS-ASODN对NCI-H292细胞增殖有明显的抑制作用,其抑制作用具有浓度、时间依赖性。②端粒酶PS-ASODN能明显地抑制NCI-H292的端粒酶活性。     

人参皂苷Rg1对缺血性脑卒中大鼠脑组织Fas和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1对缺血性脑卒中大鼠脑组织膜蛋白(Fas)、胱天蛋白酶(Caspase-3)表达的影响及其意义。方法:将大鼠随机分为假手术组、缺血性脑卒中组、人参皂苷Rg110、20、40mg/kg组、尼莫地平1mg/kg药物对照组,采用大脑中动脉闭塞法建立缺血性脑卒中模型;应用免疫组化法检测脑组织Fas、Caspase-3的表达。结果:人参皂苷Rg1各剂量组及尼莫地平组大鼠脑组织Fas、Caspase-3表达阳性细胞数明显低于缺血性脑卒中组(P<0.05)。结论:人参皂苷Rg1防治大鼠缺血性脑卒中损伤的机制可能与抑制脑组织Fas、Caspase-3表达有关,且以高剂量效果较好。