流感及H5N1亚型禽流感病毒液相检测芯片的制备

目的 建立利用液相芯片技术检测甲、乙型流感和H5N1亚型高致病性禽流感病毒的方法,并对该方法进行评价。方法 对GenBank中甲型流感病毒的NP、乙型流感病毒的HA以及高致病性禽流感病毒(H5N1)的H5、N1基因片段序列进行同源性比对,根据保守序列,设计针对各基因的简并引物和寡核苷酸探针,制备探针偶联微球,将样本核酸多重PCR扩增产物与微球进行杂交,以Bio-Plex液相芯片检测系统进行芯片检测。结果 该方法可以对甲型流感病毒的NP基因、乙型流感病毒的HA基因以及高致病性禽流感病毒(H5N1)的H5、N1基因同时进行检测,病毒核酸的最低检出量为1pg,检测特异性高。结论 成功构建了甲、乙型流感病毒和H5N1亚型高致病性禽流感病毒液相芯片检测系统,为流感、禽流感的快速检测、诊断奠定了基础。     

2010年三省市实验室间比对试验结果分析评价

实验室间比对是按照预先规定的条件,由两个或多个实验室对相同或类似的物品进行测量或检测的组织、实施和评价。它是对实验室工作进行质量评价的一种常用的、有效的方法。2010年底,本中心组织了三省市50家实验室的室间比对活动,现将比对结果分析如下。1材料与方法1.1比对样品与检测项目理化检测项目为滤膜中锡。样品为带螺旋盖塑料盒包装,每份样品独立包装且有唯一性编号。共有4个浓度梯度,每两种不同浓度的样品编为一组:A组和B组,每个参加实验室收到的样品为其中一组(含两个浓度梯度)的滤膜样品。该批样品从中国疾病预防控制中     

2011-2012年江苏省职业暴露人群禽流感病毒抗体水平及影响因素

目的了解2011-2012年江苏省职业暴露人群H5N1高致病性禽流感病毒抗体水平。方法采集职业暴露人群血清样本,分别用湖北株、广东株两种抗原株,采用血清凝集抑制法(HI)测定禽流感H5N1抗体水平,同时对研究对象进行职业暴露情况与方式问卷调查。结果用湖北株抗原检测血清标本679份,H5N1抗体几何平均滴度(GMT)为7.62,95%CI为7.24～8.02;用广东株抗原检测血清标本314份,H5N1抗体GMT为11.00,95%CI为9.92～12.19,两者差异有统计学意义。不同年龄、性别、年份、是否宰杀禽类或接触禽类、是否接种过禽流感疫苗、近一个月是否接触过病死禽,人群GMT差异均无统计学意义;不同监测点、近一个月接触不同种类禽类,人群GMT差异有统计学意义。结论禽流感有经由呼吸道传播的可能性,通风条件差,可能加剧传播。鸭与鹅在江苏禽流感传播过程中的传播媒介作用可能大于鸡与野禽。广东株抗原与江苏职业暴露人群禽流感病毒流行株的特异性抗原更接近。     

AllGlo探针Real-time RT-PCR检测发热伴血小板减少综合征病毒

目的建立基于AllGlo探针Real-time RT-PCR技术检测发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)的方法。方法根据SFTSV基因组S片段的相对保守序列设计引物和AllGlo探针,建立和优化Real-time RT-PCR反应体系,对其敏感性、特异性和稳定性进行评价,并检测临床疑似SFTSV病例标本,与普通RT-PCR法、病毒分离法和抗体检测法进行比较。结果所建立AllGlo探针Real-time RT-PCR法检测SFTSV核酸,标准曲线方程为y=-3.38x+46.03(y为Ct值,x为核酸拷贝数log值),r20.998,扩增效率为97.6%,Ct值变异系数(CV)均1.2%,检测限为1.00×103 copy/mL。与汉坦病毒、H1N1、H3N2、登革病毒1~4型均无交叉。检测362份疑似病例标本,SFTSV核酸阳性检出率11.9%,高于普通RT-PCR法、病毒分离法和抗体检测法(P值均0.05)。结论建立的AllGlo探针Real-time RT-PCR法,操作简单、快速,灵敏性、特异性较高,可用于SFTSV核酸检测。     

裂谷热研究进展及防制

裂谷热是由裂谷热病毒(Rift Valley Fever Virus,RVFV)引起的一种重要的人兽共患病,对人和动物健康危害巨大。目前RVFV主要在非洲和阿拉伯半岛地区流行,随着我国改革开放的深入,"一带一路"国际合作的推进,与疫区国家间的经贸和交往越来越频繁,RVFV传入我国的风险在加大,需给予特别关注。本文对FVFV的生物学特性、致病机理和分子流行病学特征进行综述,并提出预防和控制建议措施。     

甲型H1N1（2009）流感流行后流感样病例呼吸道病原检测分析

目的：了解甲型H1N1（2009）流感流行后的流感样病例（ILI）中,除流感病毒外的相关病原分布,为ILI患者临床治疗、流行病学调查提供参考。方法：收集流感监测哨点医院393份ILI咽拭子标本提取核酸,应用实时荧光PCR方法进行20种相关病原比对检测,分析各病原的阳性率与构成比。结果：检测出阳性咽拭子标本51例,分属13种共计64株病原体,其中阳性率较高的为肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、冠状病毒。另有13例为两种病原体混合感染,占阳性标本数的25.49%。结论：ILI的病原构成比较复杂,且存在混合感染,临床治疗与流行病学调查均应引起重视。     

一起皮肤炭疽疫情病原的实验室检测及毒力基因鉴定

目的 对2012年江苏省连云港市赣榆县一起皮肤炭疽疫情的病人临床标本及病牛肉标本进行快速分子诊断及毒力基因的鉴定。方法 用Real-time PCR方法对病人的血、焦痂标本及病牛肉标本进行炭疽杆菌染色体编码的rpoB基因及质粒PXO1、PXO2上pag、capA基因的检测,并对质粒上4种毒力基因(cya,pag,lef,cap)进行扩增并测序。结果 病人焦痂标本和病牛肉标本中均检测出rpoB基因和质粒PXO1、PXO2基因,4种毒力基因的测序结果证实扩增序列为炭疽杆菌质粒基因片段,病人标本与病牛肉标本的基因序列完全一致。结论 实验室检测结果证实此次皮肤炭疽疫情是由当地村民宰杀携带炭疽杆菌强毒株的病牛引起。     

江苏省2009—2013年汉坦病毒分离株全基因序列测定及分析

目的:从分子水平分析2009—2013年江苏省分离汉坦病毒(Hantavirus,HV)的型别及变化,为疾病的预防控制提供实验依据?方法:采集2009—2013年江苏省肾综合征出血热(hemorrhagic fever with renal syndrome,HFRS)急性期患者血清及监测点鼠肺标本?采用胶体金法检测血清样本中汉坦病毒的IgM?IgG抗体,采用免疫荧光检测鼠肺样本中汉坦病毒抗原,并用VERO E6细胞分离病毒,RT-PCR检测标本培养物中病毒M片段以鉴定HV病毒,采用高通量测序技术对分离株进行全基因组测序,MEGA6.0软件对其进行序列比对和进化分析?结果:分离到的11株病毒与陕西分离株LR1?四川分离株S85-46以及汉坦病毒原型株76-118遗传距离最为接近,属于汉滩(Hantean,HTN)型病毒?分离株与2002年分离的江苏(A9?HTN型)株以及浙江株?安徽株处于不同的进化分支上,表明遗传关系较远?结论:江苏的汉坦病毒优势株发生了变化,而且发生了宿主转换?目前疫苗仍具有保护效力,但需加强监测?     

江苏省2008年某福利院手足口病暴发的流行病学和病原学特征研究

目的 了解2008年江苏省某福利院手足口病(HFMD)暴发疫情的流行病学和病原学特征.方法 对该福利院首起暴发疫情开展流行病学调查,并进行3个月的跟踪随访.实验方法采用荧光定量RT-PCR法检测肠道病毒71型(EV71)和柯萨奇病毒A组16型(CA16)病毒,并用RD、Vero细胞分离病毒,间接免疫荧光法鉴定分离株,并对EV71分离株的VPI基因序列进行种系发生分析.结果 该福利院首起暴发疫情发病数为21例,罹患率为20.0%;10份粪便标本分离出3株EV71病毒,其VPI基因序列分析表明为CA基因亚型,与安徽省阜阳地区08株的同源性在97.9%～100.0%之间.随访研究发现EV71病毒在疫情第1周即可通过粪便排毒,最长排毒期近10周.首起疫情发生2个月后,该福利院又暴发产生6例CA16病毒感染的病例,两起疫情均有3例发生潜伏期排毒,7名婴幼儿被发现机体同时存在两种病毒.结论 该福利院先后两起疫情分别由EV71和CA16病毒引起.EV71分离株为CA基因亚型,同安徽省阜阳地区08株有较高的同源性.两种病毒在机体中存在潜伏期排毒、混合感染(或携带)和超长排毒期现象.