CD117/CD11b在急性早幼粒细胞白血病不同病期的表达变化

为了了解CD117／CD11b在急性早幼粒白血病细胞初诊及治疗后的表达变化，探讨其表达变化对APL诊断和预后的意义，采用CD45／SSC双参数散点图设门方法进行三色或四色流式细胞术细胞表面及浆内分化抗原分析，应用RT—PCR技术检测骨髓中PML／RARα融合基因的mRNA表达。结果表明：APL与CML慢性期都高表达MPO、CD13和CD33，而几乎不表达CD34、HLA—DR及T，B淋巴系列标志。有14．5％的APL患者表达cD56，有48，2％的APL患者表达CD15，CD15在APL的表达明显低于CML慢性期（48，2％船95．2％，P〈0．01）。有78．3％的APL患者表达CD117，而在CML慢性期不表达CD117。CD11b在APL的表达率仅为16．9％，而在CML慢性期几乎都表达CD11b。有72．3％的APL患者呈CD117^＋CD11b^-表型，而在CML慢性期患者细胞中均未见此表型，它几乎均呈CD117^＋CD11b^-表型。11例表型为CD117^＋CD11b^-的APL患者经治疗获完全缓解，在2个月以后CD117阳性细胞百分率均小于5％，同时细胞高表达CD11b，呈CD117^-CD11b^＋表型。检测31例APL患者PML／RARα融合基因，25例该融合基因阳性，阳性率为80．6％，其中16例（64％）为PML／RARα基因L型，9例（36％）为S型。16例PML／RARα融合基因L型APL患者CD117表达有14例（87．5％），9例S型CD117表达有4例（44．4％），6例PML／RARα融合基因阴性APL患者CD117表达有2例（33．3％）。结论：CD117／CD11b表型分析有助于APL与其它AML亚型及CML慢性期细胞的鉴别，CD117’CD11b一表型有助于APL细胞和APL患者缓解恢复期的良性髓系增生细胞的区分，对APL患者的治疗方案选择、预后判断以及发病机理的研究等均有重要价值。     

两个家庭亲子先后患同类型急性白血病

亲子同时或先后患白血病在国内外均鲜有报道。我们将父子先后患急性淋巴细胞白血病（ALL）及母女先后患急性髓系白血病（AML）的4例患者作一报道。     

人Glioblastoma/HHT多药耐药细胞系的建立及维拉帕米对耐药性的逆转作用

对人Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ细胞系采用反复短期暴露于高浓度的高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）药液中的方法，建立了一株多药耐药（ＭＤＲ）细胞系，命名为Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ／ＨＨＴ。此细胞系高度表达Ｐ－糖蛋白（Ｐｇｐ），但无多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）的表达。５μｇ／ｍｌ维拉帕米（异搏定）能部分逆转Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ／ＨＨＴ细胞系的耐药性。２．５μｇ／ｍｌ～１０μｇ／ｍｌ异搏定不仅能增加Ｇｌｉｏｂｌａｓｔｏｍａ／ＨＨＴ细胞对柔红霉素（ＤＮＲ）的摄取量，也能减少ＤＮＲ的外排，而且上述作用随异搏定浓度的增加而增强     

多参数流式细胞术检测急性白血病患儿CD14表达的意义

为了探讨CD14在小儿白血病中的表达及其在白血病诊断和鉴别诊断中的意义 ,本文采用CD45/SSC多参数散点图设门多色流式细胞术分析158例小儿急性白血病 (AL)患儿白血病细胞的CD14及其它白血病相关抗原的表达情况。结果 :158例中有9例 (5.7 %)表达CD14,且均为急性髓系白血病 (AML)。CD14在M4/M5患儿中的阳性率明显高于非M4/M5患儿 (P<0.01) ;M4和M5b患儿CD14的阳性率明显高于M2及M5a(P均<0.01);CD11b在M2的阳性率 (6/20例,30 %)明显低于M5(7/9例,77.8 % ,P<0.05) ;CD15在M5a的阳性率明显低于M5b (P<0.05)、M2 (P<0.01)及M4 (P<0.05)。在AML组中 ,CD14的表达与CD11b、CD15呈正相关 (P均<0.01)。提示CD14有助于淋巴系白血病、髓系白血病及单核细胞相关性白血病 (MLIL)的诊断与鉴别诊断 ,其对单核细胞相关性白血病免疫分型诊断中的特异性为100% ,敏感性为64.3 %。CD14和CD15有助于M5亚型的区分及M2与M5a、M2与M4的鉴别诊断 ,CD14和CD11b则有助于M2与M5的鉴别诊断     

羟基喜树碱治疗复发和难治性神经母细胞瘤的疗效观察

目的：复发和难治性神经母细胞瘤（neuroblastoma, NB）疗效差,生存时间短,死亡率高。羟基喜树碱（10-hydroxycamptothecin, HCPT）是中药提取物,对消化道肿瘤、肺癌、卵巢癌等有较好疗效,但它在NB中的治疗反应国内外尚未见报道。该研究探讨HCPT治疗复发和难治性NB的疗效。方法：10例复发和2例难治性NB患儿接受HCPT化疗,其中5例复发患儿接受HCPT单药治疗,余7例患儿接受HCPT联合治疗。HCPT单药治疗用法：7.5 mg/m2,静脉滴注,d 1～14;HCPT联合化疗采用改良新A1与改良B方案交替应用。改良新A1方案：CTX 1 200 mg/m2,d 1;VP16 100 mg/m2,d 1～5;HCPT 5 mg/m2,d 1～3;CDDP 90 mg/m2,d 4。改良B方案：IFO 1.5 g/m2,d 1～5;HCPT 5 mg/m2,d 1～3;CBP 450 mg/m2,d 2,均采用静脉滴注。结果：部分缓解4例（33.3％）,疾病稳定8例（66.7％）。有效患者中位缓解时间3.5(2～5)个月。HCPT单药治疗不良反应轻微,HCPT联合化疗的主要不良反应为骨髓抑制及消化道反应,无化疗相关的死亡。结论：HCPT治疗复发和难治性NB有一定的近期疗效,毒性可耐受,远期效果需进一步研究。［中国当代儿科杂志,2009,11（5）：361-363］     

2E8-Genistein免疫毒素靶向杀伤Nalm-6白血病细胞作用及其机制研究

目的 观察2E8(自制鼠抗人CD19新单克降抗体)-4',5',7-三羟基异黄酮(Genistein,Gen)免疫毒素(2E8-Gen)体外靶向杀伤Nalm-6细胞作用及其机制,为靶向治疗B细胞系自血病、淋巴瘤奠定基础.方法 通过细胞形态观察、台盼蓝拒染法、细胞生长曲线比较、MTT比色法和流式细胞术.结果作用24 h,2E8-Gen对Nalm-6细胞具有明显的杀伤作用,浓度在20～100 nmol/L 9个观测点的细胞存活率[从20 nmol/L时的(71.8±7.9)%逐步降到100 nmol/L时的(16.6±12.9)%,n=3]与对照组[(100±13.9)%]相比差异均有统计学意义(P<0.05),浓度在80 nmol/L以上杀伤作用显著加强;100 nmol/L 2E8-Gen在24、48、72 h对Nalm-6细胞生长抑制率分别为82%、84%、94%,呈时间依赖关系.100 nmo/L浓度2E8-Gen组的Nalm-6细胞生长曲线与空白组、PBS组和相同浓度的纯2E8组的Nalm-6细胞生长曲线相比,差异有统计学意义(F=152.15,P=2.15×10-7),但后3组间差异无统计学意义(F=1.51,P=0.29);而100 nmol/L 2E8-Gen对CD19阴性的Molt-3细胞的生长曲线与空白组相比无明显影响(F=0.34,P=0.59).24 h 100 nmol/L 2E8-Gen组早期凋亡Nalm-6细胞阳性率[(33.45±8.77)%]明显高于对照组[(10.44±1.28)%,t=-4.39,P=0.001].结论 2E8-Gen对有CD19抗原表达的Nalm-6细胞具有良好的选择性杀伤作用,并呈时间依赖关系,浓度在80 nmol/L以上杀伤作用显著加强,凋亡机制参与了该杀伤作用.     

rhIL-11在儿童特发性血小板减少性紫癜中的临床应用

重组人白细胞介素-11（rhIL-11），是一种促血小板生长因子，可明显促进骨髓内造血细胞的增殖，诱导巨核细胞的成熟和分化。rhIL-11用于治疗肿瘤化疗后血小板减少已有较多的文献报道，但用于治疗特发性血小板减少性紫癜（ITP），文献报道很少。我们自2003—2005年应用rhIL-11治疗了6例急性ITP和2例慢性ITP息儿，现报告如下。     

移植物体外净化白血病细胞模型的建立

本实验采用荧光素Calcein AM标记白血病细胞后分别接种入细胞株或骨髓细胞中以建立 3个白血病移植物细胞模型 ,采用免疫磁珠法对细胞模型进行选择 ,并用流式细胞术 (FCM)评价移植物模型中白血病细胞的净化效果。结果表明 :所建立的移植物细胞模型既可以用荧光显微镜分析 ,又可以用FCM进行精确评价。模型Ⅱ经免疫磁珠法体外净化后髓系白血病KG1a细胞的清除率为 (0 98± 0 0 9)log,模型Ⅲ中淋巴系白血病NALM 6细胞的清除率为 (1 82± 0 51 )log。结论 :建立的模型直观、稳定、重复性好 ,能用于免疫磁珠法体外净化移植物白血病细胞效果的精确评价及体外杀伤肿瘤作用的实验研究     

儿童急性淋巴细胞性白血病微小残留病监测的预后意义

目的 研究儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)化疗过程中,不同时间点监测的不同微小残留病(MRD)水平的预后意义.方法 对102例ALL患儿进行MRD监测研究,分别在患儿诱导化疗开始后第15天、第29天、第3个月、第6个月、第12个月进行MRD监测.根据患儿初诊时免疫表型特征,采用流式细胞术检测不同的四色单克隆抗体组合.常用的抗体组合包括CD45CD19CD34CD10和CD45CD19CD34CD20等.结果 102例ALL患儿的5年总体生存(OS)率和无事件生存(EFS)率分别为(86.9±3.4)%和(79.9±4.0)%,共12例患儿复发.在第15天、29天、3个月、6个月和12个月,分别有14.3%、43.9%、39.1%、39.7%和45.6%的患儿处于MRD阴性(MRD<10~(-4)).其中MRD水平能在1年内达到阴性的患儿的长期存活率明显高于MRD持续阳性的患儿[5年EFS:(92.5±3.2)% vs. (58.3±8.6)%,P<0.001].各时间点上,化疗后第15天时MRD≥10~(-2)[(79.8±10.3)% vs.(28.6±17.1)%,P<0.001]、第29天时MRD≥10~(-3)[(88.3±4.9)% vs.(51.3±14.4)%,P<0.003]、第3个月[(92.4±5.1)% vs.(65.5±7.5)%,P<0.015]、6个月[5-year EFS rates(96.3±3.6)% vs.(65.4±7.5)%,P<0.003]及第12个月[(100.0±0.0)% vs.(67.7±8.4)%,P<0.002]时MRD≥10~(-4)的患儿的5年EFS率明显较差.而第15天时MRD≥10~(-2)是独立的不良预后因素.结论 采用流式细胞术动态监测MRD水平能有效地评估ALL患儿的预后,而不同时间点上具有预后意义的MRD水平并不相同.     

人参皂苷 Rh2抗白血病多药耐药细胞 K562/VCR作用研究

目的 通过观察人参皂苷 Rh2对人白血病多药耐药 (MDR) 细胞 K562/VCR 生长、凋亡的作用和逆转耐药的情况,探索该药在抗人白血病 MDR 方面的应用价值。方法 将人参皂苷Rh2与 K562、K562/VCR 细胞共培养 48 h 后采用 MTT法分析其对细胞生长的抑制率;将其与 K562/VCR 细胞于 37 ℃ 孵育 30 min 后,采用 Annexin V 和 PI 双染法在流式细胞仪上检测细胞凋亡情况;并观察其对 K562/VCR 细胞摄取柔红霉素 (DNR) 能力及细胞表面 P-糖蛋白 (P-gp) 表达的影响;在 DNR 与 K562/VCR 培养体系中加入不同质量浓度人参皂苷Rh2,孵育 48 h 后观察人参皂苷Rh2对 K562/VCR细胞耐药的逆转情况。结果 人参皂苷Rh2 可明显抑制 K562 和 K562/VCR 细胞的生长,并呈量效关系,人参皂苷Rh2对 K562 和 K562/VCR 的半数抑制浓度 (IC50) 分别为44.5、59.4 μg/mL。K562/VCR 经人参皂苷Rh2 在 37 ℃ 作用 30 min 后,细胞的凋亡明显增加,随人参皂苷Rh2质量浓度的增加,凋亡细胞的比例明显增加［人参皂苷 Rh2 300 μg/mL,Annexin V+ 细胞 (51.5±6.9)%］。K562 细胞经长春新碱 (VCR) 诱导耐药后,P-gp 表达率明显提高 (从 4.28% 到 93.80%),DNR 摄取率减少,25 μg/mL 以上质量浓度的人参皂苷Rh2即可明显提高 K562/VCR 对 DNR 的摄取,但 P-gp 的表达无明显改变。同时,它可明显提高 DNR 对 K562/VCR 的杀伤率,50 μg/mL 人参皂苷 Rh2 可使 K562/VCR 对 DNR 的敏感性提高到原来的 6.30 倍。 结论 人参皂苷 Rh2 能抑制 K562/VCR 细胞生长,诱导其凋亡,还可以逆转 K562/VCR 的耐药,是一种具有广阔开发前景的抗白血病药物。